Barrancabermeja, es una ciudad ribereña por el rio grande de la magdalena, esta en la provincia de mares del departamento de Santander, y cuenta con gran cantidad de humedales como los conocidos como ciénagas, se tiene conocimiento que esta ciudad fue colonizada por españoles, sus costumbres están relacionadas con la cultura costeña, culturalmente se resalta la pesca es uno de los atractivos mas relevantes que se ha denominado en la región.

A nivel municipal inclusivo nacional, Barrancabermeja es poseedora de una gran riqueza ambiental  y de minerales, gracias a su ubicación geográfica estratégica se encuentra rodeadas de humedales y su mayor fuente de ingreso es por la extracción y refinación de crudo o petróleo, sin embargo se ha visto afectada en gran manera debido a la contaminación de sus recursos hídricos, actualmente el propósito de este estudio en el cuerpo hídrico de la ciénaga de magdalena Miramar ha perdido su autorregulación o depuración, las aguas residuales del mas del 40% de la población son descargas sin ningún tratamiento de hídrico y a su vez, la contaminación generada por el hombre, hace que sea más atenuante, por lo cual podremos decir que no existe civilización ni cultura ambiental en la comunidad aledaña del sector. (Hurtado, A., 2013)

De esto podemos concluir que la ciénaga Miramar ha perdido su capacidad de autorregulación, las descargar directas de aguas residuales han enutroficado el cuerpo hídrico de tal manera que para brindar una recuperación del humedal es necesario hacer la eliminación de dichas descargas y  a su vez implementar sistemas de limpieza y  oxigenación. Con el fin de darle tiempo a el sistema para su estabilización y pronta recuperación 

Chan-Quijano, J., & Jarquín-Sánchez, A., & Ochoa-Gaona, S., & Martínez-Zurimendi, P., & López-Jiménez, L., & Lázaro-Vázquez, A. (2015). Directrices para la remediación de suelos contaminados con hidrocarburos. Teoría y Praxis, (17),123-144. Recuperado de http://www.redalyc.org/articulo.oa?id=456144902006

Granados, L. (Julio de 2020). Ciénaga Miramar: Agentes contaminantes, legado Ecopetrol y Municipio. Obtenido de https://corrillos.com.co/2020/07/cienaga-miramar-agentes-contaminantes-legado-ecopetrol-y-municipio/

Jaramilo, F., Rincón, A. R., & Rico, R. (2009). Toxicología Ambiental. Universidad Autónoma de Aguascalientes (Ed.), Toxicología Ambiental (p. 398). Recuperado de: https://elibro-net.bibliotecavirtual.unad.edu.co/es/ereader/unad/40705?page=1

 

Hurtado, A., (2013). Formulación de plan de manejo ambiental para la ciénaga Miramar en el Municipio de Barrancabermeja- Santander. recuperado de: http://polux.unipiloto.edu.co:8080/00000956.pdf
Mendoza & otros (2014). Validación a microescala del método de ensayo 4-aminoantripina para cuantificar compuestos fenólicos en cultivos microbianos. Recuperado de: http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S2224-54212014000200003#:~:text=El%20m%C3%A9todo%204%2Daminoantipirina%2C%20es,requiere%20de%20instrumental%20sofisticado10.

CamposanoB& otros, (2012). Degradación de fenol por células de Pseudomonasaeruginosa libres e inmovilizadas en Opuntia imbricata. Recuperado de: https://smbb.mx/congresos%20smbb/morelia07/TRABAJOS/Area_IV/CARTELES/CIV-12.pdf

Ochoa, M., (2020). Petróleo en Barrancabermeja: una deuda que ya cumple 100 años. Recuperado de: https://es.mongabay.com/2020/03/petroleo-en-barrancabermeja-colombia-y-fracking/ 

Por la autoridad ambiental y a si poder realizar objetivos puntuales a el tema a tratar 
- Cumplir al 100 % con la plantación del número de individuos programados para plantar por la tasa de mortalidad que a causado los estragos en la ciénaga de Miramar en Barrancabermeja  

Materiales y reactivos

Frascos de vidrio
Bolsas de plástico
Platos de plástico
Cucharas de plástico
Servilletas
Filtros de café.

Guantes de látex . 

Metodología:

La recolección de la muestra es de tipo puntual y se recoge directamente en la botella, la cantidad a recolectar será dos frascos de un litro cada uno, y las muestras se tomarán cada una en un punto distinto de la ciénaga. Se recomienda que uno de los puntos en donde se tome una de las muestras sea en cercanías de la refinería de ECOPETROL S.A. 
La muestra de suelo proveniente de la ciénaga se realiza en bolsa de plástico la cual se tiene sellada hasta el momento de su uso

El análisis de los datos se hará comparativamente con los reportados en distintas bibliografías, para de esta manera formular un plan de manejo ambiental y las recomendaciones pertinentes para la recuperación de la ciénaga de los tóxicos provenientes de la extracción y refinado de hidrocarburos. 

De acuerdo con lo anterior, son diversas las causas por las cuales el agua puede ser contaminada por hidrocarburos, es decir que puede ser el resultado de la explotación, refinación, distribución y almacenamiento de petróleo crudo y sus derivados y esta contaminación se puede dar tanto en sistemas de almacenamiento como en las fuentes de abastecimiento subterráneas y superficiales, así como en otros emplazamientos.

es un hecho que ha venido en aumento como resultado.

Ahora bien, el humedal de la ciénaga Miramar ubicada en la ciudad de Barrancabermeja, es objeto de la contaminación a causa de la refinería de petróleo que se desarrolla desde hace aproximadamente un siglo, según lo soporta Granados, (2020) cuando sostiene que el 18 de febrero de 1922 se inició la historia del complejo petrolero con la llegada de los primeros equipos procedentes de Talara (Perú) donde se construyó la Refinería de Barrancabermeja, inicio con un alambique diseñado para destilar crudo.

De acuerdo con lo anterior, por la ubicación de la refinería al lado de la Ciénaga Miramar, se ha convertido en uno de sus verdugos para el sistema íctico (peces) y fauna, por la contaminación con residuos de hidrocarburos que se ha generado en más de 90 años. 
Los efectos ambientales generados a causa de los vertidos de hidrocarburos sobre el humedal se encaminan hacia el daño de los auentes hídricos y otros compartimentos ambientales, sin embargo existe una afectación directa sobre la fauna y ora a partir del vertimiento de aguas residuales. Barrancabermeja posee una ubicación estratégica fundamental por la cantidad de humedales que presenta en su territorio, sin embargo la explotación petrolífera y la presencia de la empresa ECOPETROL ha generado niveles de contaminación importante que ha afectado su potencial ecoturístico, su ora y su fauna. El vertimiento de residuos por parte de las plantas de renación de petróleo presentan gran toxicidad sobre el ambiente, ya que estos vertidos, según estudios anteriores, no presentan un tratamiento adecuado para el vertido y la remoción de contaminantes es poco eciente en la zona. (Ciénaga Miramar, 2020)  
La realización de muestreos para determinar la calidad del agua y la presencia de contaminantes derivados de la renación del petróleo se constituyen en acciones importantes para la planeación de estrategias que permitan mitigar los impactos ambientales y la formulación de índices de medición de la toxicidad presente en la ciénaga.  

•         Preparar las 5 diluciones de la muestra de agua: se diluye la muestra de agua a diferentes concentraciones, donde cada una de las diluciones preparadas tiene un total de 100 ml, las diluciones se realizan de la siguiente manera de acuerdo con la concentración.

•         Desinfectar los platos desechables donde se realizará la siembra

•         Agregar a cada plato desechable las diluciones con las diferentes concentraciones y etiquetar cada uno de los experimentos.

•         Sobreponer el papel absorbente donde se colocarán las semillas

•         Con la ayuda de la pinza, realizar la siembra de 20 semillas en cada recipiente

Dentro del análisis de la problemática ambiental causada por el Benceno en los procesos de extracción y refinación de hidrocarburos, se ha seleccionado como técnica de biorremediación la técnica de la 4-aminoantripirina, a partir del tratamiento y degradación biológica con el uso de bacterias de la familia Pseudomonas,sp., Pseudomonaaeruginosa, en consorcio con Chlorellavulgaris, cuya metodología y aplicación se determinarán en el siguiente estudio.

Proponer la estrategia de biorremediación de aguas contaminadas con Benceno producto de la contaminación por hidrocarburos en la industria de extracción y refinación del petróleo en la zona de la Ciénaga Miramar, en el municipio de Barrancabermeja, con el uso de Pseudomonaaeruginosaen consorcio con Chlorellavulgaris bajo la técnica de 4-aminoantripirina.

-          Plantear estrategias de biorremediación de Benceno tóxico en aguas contaminadas por hidrocarburos, mediante el uso de bacterias de la familia de Pseudomonass.p. con el fin de degradar los contaminantes existentes en la Cinénaga Miramar del Municipio de Barrancabermeja

 

-          Plantear la metodología adecuada a las necesidades de degradación del Benceno a partir de la estrategia del 4-aminoantripina en las condiciones de la ciénaga

 

Cepas de microorganismos: Pseudomonasaeruginosa, proveniente de la Universidad Industrial de Santander; Cepa Chlorellavulgaris, utilizada para conformar el consorcio

Medios de cultivo y crecimiento: Conservación de las cepas bacterianas en 1 ml de caldo BHI con la bacteria y 1 ml de glicerina, se congelan a -80°c.Para el crecimiento de bactrias se cultivan en caldo Luria Bertani con composición: Triptona 10 g/L, extracto de levaduras 5 g/L y cloruro de sodio 10 g/LUna vez las cepas están crecidas se las siembra en agar medio mínimo de sales (MMS) y 1% en agar, a dos concentraciones de fenol: 400 ppm y 800 ppm. Los components del MMS son en g/L, 0,5 KH2PO4, 1 NH4Cl, 2 Na2SO4, 2 KNO3, 0.001 CaCl2, 1. MgSO4.7H2O, 0.0004 FeSO4

Cultivos: Las siembras en MMS son realizadas a 30°C por duplicado con intervalo entre réplicas de 3 días, luego se conservan en congelación. Para evaluar el crecimiento y degradación de cada bacteria por sí sola se sembró en caldo LB con una concentración de Fenol de 400 ppm, a 30°C y 150 rpm, durante 56 horas.Para la formación del consorcio se siembra el alga como la bacteria seleccionada por separado en una proporción 2:1 (bacteria-alga). El consorcio crece a 30°C y 100 rpm durante 56 horas.

Análisis de biomasa y sustrato (Benceno): De cada una de las muestras anteriores se debe tomar 1 ml y se lee la absorbancia en espectrofotómetro a 620 nm, con el fin de cuantificar el aumento de la biomasa de la bacteria; 1 ml para absorbancia a 750 nm para cuantificar la cantidad de microalgas, 2 ml para cuantificar el fenol mediante el método de la 4-aminopirimidina y 1 ml para sembrar en cajas de agar LB para el recuento de unidades formadoras de colonias (Ufc) cada una de estas medidas se debe realizar cada hora durante 12 horas, y luego cada cuatro horas durante tres días. Con ello se realiza la curva de crecimiento teniendo en cuenta la degradación del benceno, el aumento de la biomasa del organismo.

Se debe tener en cuenta que la 4 aminoantipirina es un método colorimétrico que sirve para la detección de benceno en una muestra, esta reacciona en presencia de ferrocianuro potásico y la espectrofotometría se realiza a 510 nm para su detección. El análisis de resultados se basa en los parámetros calculados del comportamiento del sistema para determinar la velocidad de crecimiento exponencial del alga, de la bacteria, la constante de saturación de las mismas, la tasa de defunción y por último el rendimiento del crecimiento del alga al consumo del Benceno. 

De acuerdo con lo anterior se puede afirmar que los efectos negativos que presentan los elementos contaminantes en la muestra de agua, toda vez que es causante de desequilibrios en el proceso de germinación, esto se confirma cuando a mayor presencia del contaminante, menor germinación de las semillas se presenta, además de la inhibición de elongación de la radícula y el hipocótilo en las mayores concentraciones.