001_1조 by 김경헌 https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4 en-us 2024-09-27 03:18:06 UTC 2025-09-22 05:17:16 UTC hello@padlet.com rlarudgjs6767 https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3141697918 Amy가 홍천 외각의 맛나 식당에서 저녁을 먹었다

]]> 2024-09-27 03:51:44 UTC https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3141697918 rlarudgjs6767 https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3141698930 Amy는 저녁을 먹은 직후 호흡곤란으로 병원에 입원하였고 죽었다

]]> 2024-09-27 03:52:35 UTC https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3141698930 Amy의 사망원인 rlarudgjs6767 https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3141700190 Anaphylatic shock가 사인일 것이라는 소견서를 받았다


Amy가 옥수수/땅콩 떡에 대해 알러지 반응을 보였다


]]> 2024-09-27 03:53:37 UTC https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3141700190 rlarudgjs6767 https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3141701451 홍천의 최박사가 연구소장으로 있는 옥수수 연구소가 있다

genetically modified corn이 연구목적으로 재배되고 있다


]]> 2024-09-27 03:54:45 UTC https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3141701451 rlarudgjs6767 https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3141702175 식당 주인이 연구소 포장에 근접한 밭에서 옥수수를 직접 재배하고 있다

]]> 2024-09-27 03:55:23 UTC https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3141702175 rlarudgjs6767 https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3141704790 연구소가 옥수수를 형질 전환 할 때 vector(pCAMBIA 1300)의 multiple cloning site에 들어있던 Bacillus 유래의 cry gene expression cassette를 사용하고 있다

]]> 2024-09-27 03:57:19 UTC https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3141704790 가설1 yuzinnne https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3141713276 식당주인밭에 있는 옥수수에 Cry1Ia12 단백질을 발현하는 Cry gene expression cassette가 홍천의 최박사 연구소의 옥수수 밭으로부터 도입되었다.

]]> 2024-09-27 04:05:06 UTC https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3141713276 Cry1Ia12 단백질의 알러지 반응 가능성 존재 rlarudgjs6767 https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3141776441 Anaphylaxis

Cry1Ac 단백질이 mice에게 소량씩 투여될 경우 Anaphylaxis를 일으킨다.

]]> 2024-09-27 04:56:46 UTC https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3141776441 가설2 yuzinnne https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3153058191 식당 옥수수에서 Cry1Ia12 단백질이 발현되었다

]]> 2024-10-04 04:30:23 UTC https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3153058191 표본추출 rlarudgjs6767 https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3160604913 선택한 추출법 : 계통추출법


-> 확률 표본 추출 방법 중에 표본 오차를 줄이고 무작위성을 높이기 좋은 방법이기 때문

]]> 2024-10-09 07:51:41 UTC https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3160604913 1. DNA EXTRACTION sjkim052534 https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3163133668 DNA extraction kit를 사용해 각 sample의 DNA를 추출한다.

]]> 2024-10-10 13:38:49 UTC https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3163133668 PCR materials sjkim052534 https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3163215833

  • Foward ,Reverse primer

  • DNA template

  • Taq PCR PreMix

  • D.WTaq

  • Micropipette, tip

  • PCR기기

    • ]]>     2024-10-10 14:21:21 UTC https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3163215833     Cry1Ia12의 Dna sequence sjkim052534 https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3163222724 ]]> 2024-10-10 14:24:47 UTC https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3163222724 Primer design sjkim052534 https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3163237083 IDT를 통해 주문


    Forward : 11,600원


    Reverse : 12,760원

    ]]>     2024-10-10 14:32:27 UTC https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3163237083     product length sjkim052534 https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3166393070 -> 838bp



    ]]>     2024-10-13 04:11:22 UTC https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3166393070     4. DNA sequencing yuzinnne https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3173772694 PCR로 증폭시킨 DNA가 cry expression gene인지 확인

    ]]>     2024-10-17 06:21:45 UTC https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3173772694     2. Bradford Assay yuzinnne https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3173773864 단백질 정량

    -> 농도를 이미 알고 있는 단백질을 표준 물질로 하여 standard curve를 그려 각 sample 단백질 양을 계산할 수 있다.

    ]]>     2024-10-17 06:22:28 UTC https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3173773864     가설1 rlarudgjs6767 https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3173774244 식당주인밭에 있는 옥수수에 Cry1Ia12 단백질을 발현하는 Cry gene expression cassette가 홍천의 최박사 연구소의 옥수수 밭으로부터 도입되었다.


    -> PCR을 통해 유전자 발현 유무 확인

    ]]>     2024-10-17 06:22:44 UTC https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3173774244     PCR kit rlarudgjs6767 https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3175430558 Dyne Taq (Standard PCR)

    58,000원

    ]]>     2024-10-18 02:56:57 UTC https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3175430558     Sequencing 업체 : 마크로젠 sjkim052534 https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3188858801 -> 국내에서 sequencing에 경쟁력이 있는 회사이며, 가격도 6500원으로 합리적이기 때문


    ]]>     2024-10-27 06:45:08 UTC https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3188858801     1. Protein extraction yuzinnne https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3188957056 각각의 옥수수 sample에서 실험에 사용할 단백질을 추출한다.

    ]]>     2024-10-27 10:26:12 UTC https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3188957056     가설1 yuzinnne https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3193980284 식당주인밭에 있는 옥수수에 Cry1Ia12 단백질을 발현하는 Cry gene expression cassette가 홍천의 최박사 연구소의 옥수수 밭으로부터 도입되었다.


    -> PCR을 통해 식당 옥수수에 cry 발현 유전자 존재 유무 확인

    ]]>     2024-10-30 07:08:32 UTC https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3193980284     Sample yuzinnne https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3193985963

    실험군

    : 식당 옥수수 밭의 옥수수


    대조군

    positive control (형질전환 O)

    : 연구소의 형질전환 옥수수


    negative control (형질전환 X)

    : 시중에서 판매하는 식당 옥수수와 같은 품종의 일반 옥수수


    -> 각 25개

    총 75개 sample

    ]]>     2024-10-30 07:12:36 UTC https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3193985963     cry protein 발현 유무 검증 yuzinnne https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3193987263 2024-10-30 07:13:31 UTC https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3193987263 목차 yuzinnne https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3193991319

  • 상황 설명

  • 알고있는 사실

  • 가설 설정

  • 가설 검증 실험

    - PCR

    - Western Blot

  • 결론

  • 참고문헌

    • ]]>     2024-10-30 07:16:02 UTC https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3193991319     상황 설명 yuzinnne https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194000082 Mr.Craig(34세)는 딸 Amy(3세 여아)와 함께 강원도 홍천 외각의 '맛나 식당'에서 저녁을 먹었고 딸 Amy는 저녁을 먹은 직후 과민성 알러지 반응을 일으키며 사망하였다.


    -> Mr.Craig는 맛나식당에서 재배 중인 옥수수 밭 인근에 형질전환 옥수수를 재배중인 연구소가 있다는 사실을 알게 되었고, 이 형질전환 옥수수로부터 온 꽃가루가 맛나식당 밭의 옥수수에 수정되어 cry 단백질이 발현되었다고 주장

    ]]>     2024-10-30 07:22:01 UTC https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194000082     가설2 yuzinnne https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194003414 식당 옥수수에서 Cry1Ia12 단백질이 발현되었다.


    -> Western Blot을 통해 식당 옥수수에 cry 단백질 존재 유무 확인

    ]]>     2024-10-30 07:24:25 UTC https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194003414     가설2 yuzinnne https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194021760 식당 옥수수에서 Cry1Ia12 단백질이 발현되었다.


    -> Western Blot을 통해 식당 옥수수에 cry 단백질 존재 유무 확인

    ]]>     2024-10-30 07:35:28 UTC https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194021760     가설1 검증 과정 yuzinnne https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194030054

  • genomic DNA extraction

  • primer 제작 및 주문

  • PCR

  • DNA sequencing

    • ]]>     2024-10-30 07:41:21 UTC https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194030054     DNA extraction materials yuzinnne https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194035225

  • 샘플 옥수수

  • 핀셋

  • 튜브

  • 액체질소

  • 막자사발

  • micropipette, tip

  • water bath, centrifuge

  • DNA extraction kit

    • ]]>     2024-10-30 07:45:26 UTC https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194035225     DNA extraction protocol yuzinnne https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194049347 2024-10-30 07:55:19 UTC https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194049347 2. primer 제작 및 주문 yuzinnne https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194058941 cry expression gene sequence를 파악 -> 유전자 내 특정 서열로 primer 제작

    ]]>     2024-10-30 08:03:11 UTC https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194058941     3. PCR yuzinnne https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194060332 -> Conventional PCR을 이용해 target DNA를 증폭


    : cry expression gene이 식당 밭에 있는 옥수수에 들어있는지 확인하기 위함

    ]]>     2024-10-30 08:04:29 UTC https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194060332     PCR 과정 yuzinnne https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194077132

    1. Denaturation (94℃ 1분)

      : DNA를 두 가닥으로 나누어줌

    2. Annealing (55℃ 1분)

      : primer가 DNA의 특정 부위에 붙음

    3. Extension (72℃ 50초)

      : 새로운 DNA 가닥을 합성


    -> 30 cycle 진행

    ]]>     2024-10-30 08:19:12 UTC https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194077132     PCR protocol yuzinnne https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194078206

  • Pre-denaturation (94℃ 5분) - 1 cycle

  • Denaturation (94℃ 1분) - 30 cycle

  • Annealing (55℃ 1분) - 30 cycle

  • Extension (72℃ 50초) - 30 cycle

  • Final extension (72℃ 4분) - 1 cycle


    • ]]>     2024-10-30 08:20:22 UTC https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194078206     가설2 검증 과정 yuzinnne https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194122521

  • sample protein extraction

  • 단백질 정량

    - Bradford assay

  • Western blot

    • ]]>     2024-10-30 09:04:10 UTC https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194122521     Protein extraction materials yuzinnne https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194128161

  • 각 옥수수 sample

  • 핀셋

  • 액체질소

  • 막자사발

  • tube

  • pipette

  • RIPA lysis buffer

    • ]]>     2024-10-30 09:09:53 UTC https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194128161     Protein extraction protocol yuzinnne https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194145294

  • 각각의 옥수수 sample을 준비한다.

  • 각 sample을 액체질소에 넣었다 뺀 후 막자사발에 갈아 가루로 만든다.

    (protein은 상온에 오래 노출되면 좋지 X)

  • 파쇄한 가루를 20ml 1X Protein extraction buffer(RIPA buffer)에 넣는다.

  • 10000Xg에서 10분간 centrifuge(4℃) 후 pipette으로 상등액만 취한다.

  • 상등액을 차가운 tube에 옮긴 후 protease inhibitor cocktail을 첨가해 -70℃에서 보관한다.


    • - 단백질은 가능한 저온에서 처리하고 보관한다. (효소활성 억제)

    - 가능한 빠른 시간 내에 처리한다.

    - 장기보존의 경우 동결보존한다.

    - protease inhibitor를 꼭 첨가한다.

    - 적당한 pH에서 보존한다.

    ]]>     2024-10-30 09:26:01 UTC https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194145294     Western blot 과정 yuzinnne https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194231449

  • SDS-PAGE

  • Transfer

  • Blocking

  • 항원-항체 반응

  • Detection

    • ]]>     2024-10-30 10:21:57 UTC https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194231449     3-1. SDS-PAGE yuzinnne https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194263357 전기영동을 통해 단백질을 크기별로 분리한다.

    ]]>     2024-10-30 10:52:34 UTC https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194263357     SDS-PAGE materials yuzinnne https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194263907

  • 5% stacking gel

  • 8% separating gel

    : cry 단백질은 648 aa -> 1 aa는 대략 110 Da이므로 cry단백질은 대략 71.3kDa이기 때문에 8% gel이 적당함



    • ]]>     2024-10-30 10:52:53 UTC https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194263907     SDS PAGE protocol yuzinnne https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194284407 2024-10-30 11:13:26 UTC https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194284407 3-2. Transfer yuzinnne https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194286766 전기영동으로 분리된 단백질에 항체가 붙을 수 있도록 분리한 단백질을 membrane으로 이동시켜 준다.

    ]]>     2024-10-30 11:15:42 UTC https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194286766     Transfer materials yuzinnne https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194287471

  • NC membrane

  • SDS PAGE가 끝난 gel

  • Transfer buffer

    - 25 mM Tris

    - 192 mM Glycine pH8.3

    - 20% Methanol

  • Ponceau S 염색액

  • filter paper

  • transfer cassette

  • pipette

  • roller

    • ]]>     2024-10-30 11:16:28 UTC https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194287471     Transfer membrane yuzinnne https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194292750 membrane의 종류에는 NC, PVDF, Nylon이 있다. 이 중 가격이 저렴하고 과정이 번거롭지 않은 NC membrane을 사용하기로 했다.


    NC membrand은 표면적이 넓어 한 번에 많은 antibody가 흡착할 수 있고, 가격이 경제적이다. 또 methanol로 전처리하는 과정이 필요없다.

    ]]>     2024-10-30 11:21:40 UTC https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194292750     Transfer 방식 yuzinnne https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194454190 wet vs semi-dry vs dry

    세 가지 방법 중 wet 방법 사용


    -> wet 방식은 transfer 과정 중에 온도 조절이 가능하고 보다 정확한 결과를 얻을 수 있다.

    semi-dry 방식은 빠른 시간 안에 할 수 있어 효율은 좋지만 background가 많이 발생할 수 있고, 일부 단백질은 잘 transfer되지 않는다.

    ]]>     2024-10-30 13:20:58 UTC https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194454190     Transfer protocol yuzinnne https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194531699 2024-10-30 14:06:11 UTC https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194531699 3-3. Blocking yuzinnne https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194548146 단백질이 transfer 되지 않은 부분이 오염되거나 다른 단백질이 antibody에 붙을 수 없도록 skimmed milk 또는 BSA 로 blocking 해주는 과정


    -> 단백질이 안 붙어있는 membrane부분에 blocking buffer 속 단백질이 달라붙는 것

    = nonspecific한 항체의 binding을 차단하기 위한 코팅 과정



    ]]>     2024-10-30 14:14:48 UTC https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194548146     Blocking materials yuzinnne https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194551979

  • skim milk

  • TBST buffer

  • 10mM Tris-HCl pH 7.4

  • 100mM NaCl, (단백질 안정화)

  • 0.1%(V/V) Tween 20(단백질 간 nonspecific interaction 막음)

    • ]]>     2024-10-30 14:16:43 UTC https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194551979     Blocking protocol yuzinnne https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194555598

    1. 5% skim milk에 transfer가 완료된 membrane을 넣고 상온에서 1시간 정도 shaking하며 incubation한다.


    2. Membrane을 TBST buffer에 5분간 washing하는 과정을 3회 반복한다.

    ]]>     2024-10-30 14:18:45 UTC https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194555598     계통추출법 yuzinnne https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194581149 2024-10-30 14:33:09 UTC https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194581149 3-4. 항원-항체 반응 yuzinnne https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194586393 표적 단백질에 특이적으로 결합하는 능력을 가진 항체인 1차 항체와 반응시켜, 1차 항체가 표적 단백질에 결합하게 한다.

    이후, 표적 단백질에 결합하지 않은 여분의 1차 항체를 씻어 낸 다음, 1차 항체에 특이적으로 결합하는 2차 항체를 1차 항체에 결합시킨다.


    ]]>     2024-10-30 14:36:03 UTC https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194586393     3. Western blot yuzinnne https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194588493 -> 단백질 사이의 특이적인 상호작용을 이용하여 특정 단백질을 검출하는 방법


    : 표적 단백질 (cry 단백질)을 검출 -> 식당 옥수수에 cry 단백질이 존재하는지 확인하기 위함

    ]]>     2024-10-30 14:37:24 UTC https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194588493     항원-항체 반응 materials yuzinnne https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194596527

  • Primary antibody

  • Secondary antibody

  • Antibody Dilution Buffer

  • TBST buffer

  • Developing solution

    • ]]>     2024-10-30 14:42:08 UTC https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194596527     항원-항체 반응 protocol yuzinnne https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194597302 2024-10-30 14:42:27 UTC https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194597302 Primary antibody yuzinnne https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194597570 Cry1Ia antibody


    • 가격 : 233,000원

    • Target : Cry1Ia

    • Host : Rabbit

    • Isotype : IgG

    • Form : Liquid

    • 용도 : ELISA, Western Blot

    • Size : 50ul

    ]]>     2024-10-30 14:42:39 UTC https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194597570     Secondary antibody yuzinnne https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194598168

  • 가격 : 314,000원

  • Target species : Rabbit

    • Host : Goat

    • Target isotype : IgG

    • Conjugation : HRP

    • 용도 : IM, ELISA, ICC, IHC-Fr, IHC-P, WB

    ]]>     2024-10-30 14:43:00 UTC https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194598168     Monoclonal Ab vs Polyclonal Ab yuzinnne https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194625534 -> 정확한 binding이 필요하므로 monoclonal 사용


    국내 업체 중 'BIONEER'에서 monoclonal 항체를 제작해주기 때문에 주문 제작할 예정

    ]]>     2024-10-30 14:59:28 UTC https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194625534     3-5. Detection yuzinnne https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194647972 1차 혹은 2차 항체에 결합된 물질 or 효소에 따라 적절한 방법을 이용하여 항체를 검출

    -> 항체에 결합된 표적 단백질을 검출



    ]]>     2024-10-30 15:13:26 UTC https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194647972     Detection protocol yuzinnne https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194650328 2024-10-30 15:14:53 UTC https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194650328 Detection yuzinnne https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194657806 HRP가 ECL의 luminol을 산화시켜 방출되는 빛을 detect한다.


    ]]>     2024-10-30 15:19:19 UTC https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194657806     Detection materials yuzinnne https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194664360

  • ECL 시약

  • pipette

  • 투명시트 보호필름

  • 가위

  • 테이프

  • 카세트

    • ]]>     2024-10-30 15:23:17 UTC https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194664360     Western Blot 결과 yuzinnne https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194769033 항체와의 반응이 일어났다면

    -> Cry 단백질이 발현되었다


    항체와의 반응이 일어나지 않는다면

    -> Cry 단백질이 발현되지 않았다.

    ]]>     2024-10-30 16:30:14 UTC https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194769033     PCR 결과 yuzinnne https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194772634 sequencing 결과 Cry gene이 존재한다면

    -> 가설 2 진행


    sequencing 결과 Cry gene이 존재하지 않는다면

    -> 식당 옥수수에는 cry 단백질 발현 유전자가 존재하지 않으므로 cry 단백질도 존재하지 않고, 따라서 Amy의 죽음과는 무관할 수도 있다.

    ]]>     2024-10-30 16:32:38 UTC https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194772634     결론 yuzinnne https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194777802 가설1과 가설2가 모두 참인 것으로 실험 결과가 나타난다면 Mr.Craig의 주장 중 Cry 단백질이 식당 옥수수에 발현되었을 것이라는 내용이 사실로 증명된다.


    -> 이 결과는 Amy의 사망 원인을 밝혀내기 위한 중요한 단서가 될 수 있다.

    ]]>     2024-10-30 16:35:42 UTC https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194777802     참고문헌 yuzinnne https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194782394 https://mj-lahong.tistory.com/151 표본추출법 종류 설명

    https://www.kci.go.kr/kciportal/ci/sereArticleSearch/ciSereArtiView.kci?sereArticleSearchBean.artiId=ART002629074

    https://ko.wikipedia.org/wiki/%EC%A4%91%ED%95%A9%ED%9A%A8%EC%86%8C_%EC%97%B0%EC%87%84_%EB%B0%98%EC%9D%91

    https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4759279/#B54

    Synthetic construct Cry1Ia12 delta endotoxin gene, partial cds - Nucleotide - NCBI

    PrimerQuest - design qPCR assays | IDT

    https://www.bioneer.co.kr/

    All about Conventional PC.. : 네이버블로그

    DNA 정제_1 (DNA extraction) : 네이버 블로그

    https://genome.cshlp.org/content/23/2/300.full

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    https://idisk.kribb.re.kr:5991/api.link/3d_baLMMHrreR-QD_A~~.pdf

    https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2939432/

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    https://www.abcam.com/products/secondary-antibodies/goat-rabbit-igg-hl-hrp-ab6721.html

    https://www.arp1.com/cry1ia-antibody-csb-pa673817za01bdc.html 

    https://m.blog.naver.com/summerh_/221122051482 

    KWCh1iqAqgEAAYASAAEgKDEvD_BwE

    https://www.origene.com/support/learning-resources/protocols/antibodyprotocol?gad_source=1&gclid=EAIaIQobChMIsqWIgtCTggMVT

    ]]>     2024-10-30 16:38:45 UTC https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194782394     Bradford assay 사용 이유 yuzinnne https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194794636 -> Lowry 방법보다 빠르고 정확하며 BCA 방법보다 간단하다는 장점이 있다. 또 SDS나 Triton X-100과 같은 detergent와 호환이 가능하여 보편적으로 많이 이용된다.


    ]]>     2024-10-30 16:46:01 UTC https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194794636     Bradford assay meterials yuzinnne https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194795323

  • Coomassie Brilliant Blue  G-250 dye

    • Phosphoric Acid 85% EP

    • Bovine Albumin Fraction V (7.5% solution)

    • Ethyl Alchol 95% EP

    • BSA


    ]]>     2024-10-30 16:46:35 UTC https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194795323     단백질 정량 yuzinnne https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194822597 Western blot 전 단백질을 정량하는 이유



    • 단백질을 정량하면 각 sample에 동일한 양의 단백질을 loading할 수 있어 실험 결과의 재현성과 신뢰도를 높일 수 있다.

    • 정량화된 단백질을 사용함으로써 샘플 간 발현 차이를 비교할 수 있으며, 발현량 차이에 따른 신호 강도의 차이가 실제 단백질 발현 차이임을 확인할 수 있다.

    • western blot을 하기 위해서는 일정 농도 이상의 단백질이 필요하기 때문에 western blot 전 sample 단백질의 농도를 계산할 필요가 있다.




    ]]>     2024-10-30 17:05:55 UTC https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194822597     Bradford assay protocol yuzinnne https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194825496 2024-10-30 17:08:07 UTC https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194825496 Bradford assay 원리 yuzinnne https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194855768 Coomassie Blue G-250의 dye를 이용해 흡광도 차이를 확인해서 단백질의 농도를 측정하는 방법이다.


    염색약과 단백질이 결합하여 복합체를 이루게 되면서 용액이 푸른색으로 변하고, 그 흡광도를 측정한다. 이때 standard 물질인 BSA를 기준으로 하여 sample에 단백질이 얼만큼 들어있는지를 측정하고 농도를 계산할 수 있다.



    ]]>     2024-10-30 17:30:16 UTC https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3194855768     견적서 yuzinnne https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3196526112 2024-10-31 16:48:58 UTC https://padlet.com/rlarudgjs6767/taiq57efaxv5gwq4/wish/3196526112