Proceso de clonación de un gen by NANCY CECILIA ORTEGA MARTINEZ https://padlet.com/nancyortega/t4snid1za0sffbw3 en-us 2021-11-29 06:14:42 UTC 2023-02-27 01:50:38 UTC hello@padlet.com Trabajando con plásmidos. nancyortega https://padlet.com/nancyortega/t4snid1za0sffbw3/wish/1917215855 2021-11-29 06:35:22 UTC https://padlet.com/nancyortega/t4snid1za0sffbw3/wish/1917215855 2.1.-Diseño de oligonucleótidos para PCR nancyortega https://padlet.com/nancyortega/t4snid1za0sffbw3/wish/1917230184 Se empleara la herramienta Primer3Plus diseñe primers para la amplificación del gen completo.

]]> 2021-11-29 06:47:40 UTC https://padlet.com/nancyortega/t4snid1za0sffbw3/wish/1917230184 11.3 Cultivar colonias y purificar plásmido nancyortega https://padlet.com/nancyortega/t4snid1za0sffbw3/wish/1917230327 Te dejo un ejemplo de la purificación (aquí se utilizan proteínas) pero hay pasos que son similares a la purificación de un plásmido.]]> 2021-11-29 06:47:48 UTC https://padlet.com/nancyortega/t4snid1za0sffbw3/wish/1917230327 2.2.-Diseño de oligonucleótidos para PCR nancyortega https://padlet.com/nancyortega/t4snid1za0sffbw3/wish/1917230523 Para conocer los sitos de corte de las enzimas de restricción es necesario dirigirnos a la pagina de Biolabs ya que por medio de su catalogo de enzimas de restricción, podemos conocer sitios de corte e incluso la recomendación de cuantos nucleótidos podríamos utilizar o añadir a nuestra secuencia para el diseño de primers.

]]> 2021-11-29 06:48:00 UTC https://padlet.com/nancyortega/t4snid1za0sffbw3/wish/1917230523 Extracción de un plásmido nancyortega https://padlet.com/nancyortega/t4snid1za0sffbw3/wish/1917230690 2021-11-29 06:48:08 UTC https://padlet.com/nancyortega/t4snid1za0sffbw3/wish/1917230690 Y si aun no quedo claro Diseño de oligonucleótidos para PCR... nancyortega https://padlet.com/nancyortega/t4snid1za0sffbw3/wish/1917230904 Te dejo un PDF. que seguro será mas fácil de comprender. ]]> 2021-11-29 06:48:19 UTC https://padlet.com/nancyortega/t4snid1za0sffbw3/wish/1917230904 2.-Diseño de oligonucleótidos para PCR nancyortega https://padlet.com/nancyortega/t4snid1za0sffbw3/wish/1917234868 Se tienen que identificar los sitios de corte de la secuencia de nuestro gen , para ello se utilizara la  herramienta NEBcutter V2.0 en la cual verificaremos que no se tenga sitios de corte.]]> 2021-11-29 06:51:38 UTC https://padlet.com/nancyortega/t4snid1za0sffbw3/wish/1917234868 PLASMIDO nancyortega https://padlet.com/nancyortega/t4snid1za0sffbw3/wish/1917271402 2021-11-29 07:20:31 UTC https://padlet.com/nancyortega/t4snid1za0sffbw3/wish/1917271402 CLONACION nancyortega https://padlet.com/nancyortega/t4snid1za0sffbw3/wish/1917285965 Video 5: Clonación y transformación - YouTube]]> 2021-11-29 07:30:40 UTC https://padlet.com/nancyortega/t4snid1za0sffbw3/wish/1917285965 1.- Secuencia del gen nancyortega https://padlet.com/nancyortega/t4snid1za0sffbw3/wish/1917296463 Para comenzar es necesario tener la secuencia de nuestro gen de interés.
>EHI_155580
ATGGAATATCAGGGATTTTATAATTTACC
TTCCCCTTTATGTCCTGAGTTTAAAGAAA
TGGCTTTAGATATCTATATGAATCAAAAA
TATTTATTATATAATTTGAATCAAAATAA
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Posteriormente  se diseñaran los primers para clonar nuestro gen. ]]> 2021-11-29 07:37:46 UTC https://padlet.com/nancyortega/t4snid1za0sffbw3/wish/1917296463 3.- Aislamiento de DNA genómico nancyortega https://padlet.com/nancyortega/t4snid1za0sffbw3/wish/1917366314 Aislamiento de DNA genómico de un cultivo bacteriano o de hongos - YouTube]]> 2021-11-29 08:22:23 UTC https://padlet.com/nancyortega/t4snid1za0sffbw3/wish/1917366314 4.- Cuantificación del DNA nancyortega https://padlet.com/nancyortega/t4snid1za0sffbw3/wish/1917374627 Cuantificación de DNA - YouTube]]> 2021-11-29 08:27:41 UTC https://padlet.com/nancyortega/t4snid1za0sffbw3/wish/1917374627 5.- Amplificación del gen por PCR nancyortega https://padlet.com/nancyortega/t4snid1za0sffbw3/wish/1917397914 PCR Amplification of cheek cell DNA - YouTube]]> 2021-11-29 08:42:45 UTC https://padlet.com/nancyortega/t4snid1za0sffbw3/wish/1917397914 5.1.- Amplificación del gen por PCR ¿No quedo claro?. nancyortega https://padlet.com/nancyortega/t4snid1za0sffbw3/wish/1917406858 Te dejo una lectura por aquí.

Amplificación del ADN mediante la técnica de la PCR (blogdelaboratorio.com)

]]> 2021-11-29 08:48:33 UTC https://padlet.com/nancyortega/t4snid1za0sffbw3/wish/1917406858 5.2 Amplificación del gen por PCR nancyortega https://padlet.com/nancyortega/t4snid1za0sffbw3/wish/1917419214
Recuerda que para realizar nuestra amplificación es IMPORTANTE  nuestra temperatura de alineamiento durante la reacción de PCR  y se recomienda que a dicha temperatura de alineamiento le restes -5°C.
Para obtener tanto la temperatura media de nuestras enzimas de restricción como la temperatura de alineamiento la compañía ThermoFisher nos ofrece una calculadora donde podremos hacer los cálculos. 

]]> 2021-11-29 08:56:24 UTC https://padlet.com/nancyortega/t4snid1za0sffbw3/wish/1917419214 6.- Electroforesis nancyortega https://padlet.com/nancyortega/t4snid1za0sffbw3/wish/1917430444 Electroforesis de ADN en gel de agarosa (IQOG-CSIC) - YouTube]]> 2021-11-29 09:04:29 UTC https://padlet.com/nancyortega/t4snid1za0sffbw3/wish/1917430444 7.- Purificación del plásmido y del inserto del gel de agarosa. nancyortega https://padlet.com/nancyortega/t4snid1za0sffbw3/wish/1917438743 2021-11-29 09:10:14 UTC https://padlet.com/nancyortega/t4snid1za0sffbw3/wish/1917438743 6.1 .- Restricción de plásmido y producto de PCR nancyortega https://padlet.com/nancyortega/t4snid1za0sffbw3/wish/1917459092 enzimas restricción plásmido DNA recombinante biología molecular biology - YouTube]]> 2021-11-29 09:22:51 UTC https://padlet.com/nancyortega/t4snid1za0sffbw3/wish/1917459092 7.1- Purificación del plásmido y del inserto del gel de agarosa nancyortega https://padlet.com/nancyortega/t4snid1za0sffbw3/wish/1917477467 Purificación de ADN plasmídico paso a paso - YouTube]]> 2021-11-29 09:34:54 UTC https://padlet.com/nancyortega/t4snid1za0sffbw3/wish/1917477467 8.- Cuantificación del plásmido e inserto nancyortega https://padlet.com/nancyortega/t4snid1za0sffbw3/wish/1917492694 Para comprender mejor esta cuantificación.
Lee la siguiente lectura.
Quantification of Plasmid-Mediated Antibiotic Resistance in an Experimental Evolution Approach | Protocol (Translated to Spanish) (jove.com)

]]> 2021-11-29 09:44:30 UTC https://padlet.com/nancyortega/t4snid1za0sffbw3/wish/1917492694 9.- Electroforesis del plásmido e inserto restringido nancyortega https://padlet.com/nancyortega/t4snid1za0sffbw3/wish/1917496652 2021-11-29 09:47:00 UTC https://padlet.com/nancyortega/t4snid1za0sffbw3/wish/1917496652 10.-Ligación nancyortega https://padlet.com/nancyortega/t4snid1za0sffbw3/wish/1917497903 Simply Cloning - Chapter 6 - Ligation - YouTube]]> 2021-11-29 09:47:52 UTC https://padlet.com/nancyortega/t4snid1za0sffbw3/wish/1917497903 10.1.- Ligación nancyortega https://padlet.com/nancyortega/t4snid1za0sffbw3/wish/1917516306 UNA REVISIÓN GENERAL SOBRE CLONACIÓN MOLECULAR | GoldBio
Para aclarar tus dudas aquí te dejo un poco mas de información.
SABIAS QUE... Hoy en día hay compañías que fabrican y vender los kit de ligamiento (Kit Pro Ligation-Free Cloning) permite el ensamblaje robusto de múltiples fragmentos de DNA en un solo paso.
Una de estas compañías es PROBIOTEK.

]]> 2021-11-29 10:00:12 UTC https://padlet.com/nancyortega/t4snid1za0sffbw3/wish/1917516306 11.- Transformar nancyortega https://padlet.com/nancyortega/t4snid1za0sffbw3/wish/1917518909 2021-11-29 10:02:08 UTC https://padlet.com/nancyortega/t4snid1za0sffbw3/wish/1917518909 nancyortega https://padlet.com/nancyortega/t4snid1za0sffbw3/wish/1917537765 La 𝗰𝗹𝗼𝗻𝗮𝗰𝗶ó𝗻 𝗺𝗼𝗹𝗲𝗰𝘂𝗹𝗮𝗿 es un... - ID-Core Biotechnology | Facebook]]> 2021-11-29 10:13:40 UTC https://padlet.com/nancyortega/t4snid1za0sffbw3/wish/1917537765 11.1.- Transformar nancyortega https://padlet.com/nancyortega/t4snid1za0sffbw3/wish/1917541082 Aquí te  dejo mas información sobre la transformación.
Transformación y selección bacteriana (artículo) | Khan Academy]]> 2021-11-29 10:15:18 UTC https://padlet.com/nancyortega/t4snid1za0sffbw3/wish/1917541082 11.2 Cultivar colonias y purificar plásmido nancyortega https://padlet.com/nancyortega/t4snid1za0sffbw3/wish/1917550702 2021-11-29 10:21:44 UTC https://padlet.com/nancyortega/t4snid1za0sffbw3/wish/1917550702 12.- Restricción de plásmidos para análisis de candidatos nancyortega https://padlet.com/nancyortega/t4snid1za0sffbw3/wish/1917567488 2021-11-29 10:33:27 UTC https://padlet.com/nancyortega/t4snid1za0sffbw3/wish/1917567488 12.1 Selección de Candidato que corresponde al plásmido con el inserto nancyortega https://padlet.com/nancyortega/t4snid1za0sffbw3/wish/1917585554  a) Secuenciación
¿Qué es?
Método de Sanger, En 1975, Frederick Sanger desarrolló el método de secuención del ADN | Ramtec Perfiles (wordpress.com)]]> 2021-11-29 10:37:36 UTC https://padlet.com/nancyortega/t4snid1za0sffbw3/wish/1917585554 12.2 Selección de Candidato que corresponde al plásmido con el inserto nancyortega https://padlet.com/nancyortega/t4snid1za0sffbw3/wish/1917588978 b) Aislar a la bacteria

]]> 2021-11-29 10:40:08 UTC https://padlet.com/nancyortega/t4snid1za0sffbw3/wish/1917588978 12. 3 Selección de Candidato que corresponde al plásmido con el inserto nancyortega https://padlet.com/nancyortega/t4snid1za0sffbw3/wish/1917595869 c) Purificar el plásmido
Hay compañías como la de Beckman Coulter
que se dedican a elaborar plásmidos purificadores ]]> 2021-11-29 10:45:03 UTC https://padlet.com/nancyortega/t4snid1za0sffbw3/wish/1917595869 12.4 Selección de Candidato que corresponde al plásmido con el inserto nancyortega https://padlet.com/nancyortega/t4snid1za0sffbw3/wish/1917599937 e) Ensayos funcionales

]]> 2021-11-29 10:47:52 UTC https://padlet.com/nancyortega/t4snid1za0sffbw3/wish/1917599937 nancyortega https://padlet.com/nancyortega/t4snid1za0sffbw3/wish/1917604841 Datos curiosos que te pueden interesar. ]]> 2021-11-29 10:51:13 UTC https://padlet.com/nancyortega/t4snid1za0sffbw3/wish/1917604841