-          Síntesis de Fluoresceinboronato (Fl-B): sonda fluorescente.

-          Análisis de reactividad de Fl-B con oxidantes biológicos: H2O2, ácido hipocloroso (HOCl) y peroxinitrito.

• velocidad para la reacción del peroxinitrito fue más rápida que para el resto de los oxidantes.

• principal proceso de oxidación del Fl-B tiene lugar con el peroxinitrito, reacción directa.

1-      ¿Sobre qué muestra se trabajó? ¿Se procesa de alguna manera?

Aplicado para la detección de peroxinitrito generado endógenamente por células endoteliales y en parásitos fagocitados por macrófagos. Se hicieron estudios de cinética: flujo intracelular real de peroxinitrito en células.

2-      ¿Qué sonda de utilizó?

Fluoresceinboronato (Fl-B): sonda fluorescente.

3-      ¿Cómo se utilizó la sonda?

Celulas endoteliales se incuban con Fl-B (50 μM) durante 30 minutos, se lavan para eliminar la sonda no incorporada y se sustituyen por una solución.

Curso temporal de la oxidación de Fl-B se monitorizó en un lector de placas de fluorescencia a 37 °C a λex=492 nm y λem=515 nm.

Células estimuladas con ionomicina para generar peroxinitrito

Gracés et al 2021

Modelo:

Homogenato,

Mitocondrias y

Células A549

de pulmón de ratas administradas con AgNP (nanopartículas de plata) a través de gotas nasales.

Qué y cómo se midió:

En homogenato de tejido y células A549

*Actividad de NOX por quimioluminiscencia con lucigenina

En mitocondrias y células a549

*Producción de H2O2

(HRP con sonda Amplex para mitocondrias

y con por espectroscopía de fluorescencia

utilizando sonda Amplex Red/peroxidasa de rábano picante (HRP) para céluldas A549)

-Citoquinas inflamatorias como tnf-alfa e IL6 en plasma por Elisa

• La activación de leucocitos por citometría de flujo, la actividad respiratoria en leucocitos y la producción intracelular de NO

• NO-hemoglobina, analizaron NO en sangre por EPR

• Midieron nitritos y nitratos en plasma y homogenizado de tejido por reacción de Griess

• Midieron contractibilidad cardiaca, extraen el corazón, lo perfunden y analizan el estado contráctil antes y después de un estímulo betaadrenergico.

• Cuantificación del ARNm de las citocinas en el corazón

  por RT-qPCR

• analizaron la histología del miocardio por microscopia óptica y se analizó por microscopía electrónica

• Se realizaron análisis a nivel mitocondrial previamente aislamiento de la organela, como:

• Consumo de O2 mitocondrial utilizando un electrodo de O2 tipo Clark para Respirometría de alta resolución

• Tasa de producción de ATP mitocondrial utilizando un lector de luciferina/luciferasa de microplacas

• Se midió la eficiencia del proceso de fosforilación oxidativa (relación P/O),

  calculando el número de moléculas de ADP fosforiladas por átomo de O2

• El potencial de membrana interna mitocondrial s mediante citometría de flujo usando sonda catiónica potenciométrica

  Yoduro de 3,3′-dihexiloxacarbocianina (DiOC6)

• Las actividades mitocondrial fue analizada por la actividad de la NADH-citocromo c reductasa (complejo I-III) y la succinato citocromo c reductasa (complejo II-III) fueron

  medido por un ensayo colorimétrico y la actividad de la citocromo oxidasa (complejo IV) por espectrofotometría

• se analizo la tasa de producción de H2O2 mediante espectroscopía de fuorescencia utilizando la peroxidasa Amplex Red (HRP)

Mi nombre es María del Carmen Baez, docente e investigadora de la FCM, UNC. Mi trabajo de investigación es en Síndrome Metabólico experimental, analizo parámetros de estrés oxidativo y enzimas antioxidates, realizamos microscopia optica para ver lesión en los tejidos de aorta e hígado y microcopia electrónica de mitocondrial para analizar morfología. Ahora estamos dosificando compuestos bioactivos herbales como tratamiento natural para esta patología.

Benjamín Meléndez