Tinciones básicas en el laboratorio by ADALBERTO VALENZO RAMIREZ https://padlet.com/a19663481/s3b6ai1il1ovbrl5 artículo en-us 2021-09-09 23:16:40 UTC 2021-09-15 22:33:57 UTC hello@padlet.com TINCIONES BÁSICAS EN EL LABORATORIO a19663481 https://padlet.com/a19663481/s3b6ai1il1ovbrl5/wish/1729367779 2021-09-09 23:26:47 UTC https://padlet.com/a19663481/s3b6ai1il1ovbrl5/wish/1729367779 INTRODUCCIÓN a19663481 https://padlet.com/a19663481/s3b6ai1il1ovbrl5/wish/1729385946 2021-09-09 23:40:32 UTC https://padlet.com/a19663481/s3b6ai1il1ovbrl5/wish/1729385946 En la valoración de las muestras, es trascendente el poder de resolución del microscopio, el cual se define como la capacidad que posee un objetivo para distinguir la distancia mínima entre dos puntos del objeto para que se puedan visualizar como dos puntos separados. a19663481 https://padlet.com/a19663481/s3b6ai1il1ovbrl5/wish/1729409099 2021-09-09 23:55:50 UTC https://padlet.com/a19663481/s3b6ai1il1ovbrl5/wish/1729409099 El poder de resolución de un objetivo es el responsable de la calidad, claridad, nitidez y fineza detallada de la imagen, y depende dela longitud de onda (λ) del haz de luz utilizado y de la apertura numérica del objetivo empleado. a19663481 https://padlet.com/a19663481/s3b6ai1il1ovbrl5/wish/1729417860 2021-09-10 00:01:42 UTC https://padlet.com/a19663481/s3b6ai1il1ovbrl5/wish/1729417860 Existe una gran variedad de tinciones que pueden ser aplicadas dentro del campo de la microbiología. a19663481 https://padlet.com/a19663481/s3b6ai1il1ovbrl5/wish/1729435879 2021-09-10 00:13:05 UTC https://padlet.com/a19663481/s3b6ai1il1ovbrl5/wish/1729435879 Un colorante es una sustancia capaz de dar color a células, tejidos, fibras, etc. De acuerdo con su origen, se pueden dividir en: colorantes naturales y colorantes artificiales. a19663481 https://padlet.com/a19663481/s3b6ai1il1ovbrl5/wish/1733202520  ]]> 2021-09-12 04:46:14 UTC https://padlet.com/a19663481/s3b6ai1il1ovbrl5/wish/1733202520 Está constituido de un cromóforo: es la capacidad que tiene la molécula para que sus electrones absorban energía o luz visible, se exciten y emitan diversos colores de acuerdo con la longitud de emitida como resultado del cambio en el nivel energético. y de un Auxócromo: tienen la función de intensifi car la formación de colormediante la acción de grupos de átomos no saturados;su función es desplazar a los cromóforos hacia longitudes de ondas largas para aumentar la intensidad. a19663481 https://padlet.com/a19663481/s3b6ai1il1ovbrl5/wish/1733207411 2021-09-12 04:52:59 UTC https://padlet.com/a19663481/s3b6ai1il1ovbrl5/wish/1733207411 Los colorantes tienen las siguientes funciones: 1. Permiten hacer visibles a los objetos microscópicos y transparentes. 2. Revelan su forma y tamaño. 3. Muestran la presencia de estructuras internas y externas. 4. Producen reacciones químicas específicas. a19663481 https://padlet.com/a19663481/s3b6ai1il1ovbrl5/wish/1733220812 2021-09-12 05:12:10 UTC https://padlet.com/a19663481/s3b6ai1il1ovbrl5/wish/1733220812 Las tinciones se pueden clasificar como SIMPLES, cuando toda la muestra se tiñe del mismo color y se utiliza un sólo colorante (azul de lactofenol). TINCIÓN DIFERENCIAL, cuando se visualiza más de un color porque se utiliza más de un colorante (Gram o Ziehl-Neelsen). TINCIÓN ESPECÍFICA, cuando se utilizan anticuerpos marcados con una molécula fluorescente para identificar una estructura celular en particular (inmunocitoquímico) a19663481 https://padlet.com/a19663481/s3b6ai1il1ovbrl5/wish/1733898910 2021-09-12 15:59:49 UTC https://padlet.com/a19663481/s3b6ai1il1ovbrl5/wish/1733898910 Existen dos tipos de fijadores: FÍSICOS: desecación, calor seco, calor húmedo, ultrasonido y microondas. QUÍMICOS: óxido crómico, ácido acético, ácido pícrico, acetona, dicromato de potasio, formaldehído, glutaraldehído, etanol, metanol, paraldehído. a19663481 https://padlet.com/a19663481/s3b6ai1il1ovbrl5/wish/1733906432 2021-09-12 16:06:06 UTC https://padlet.com/a19663481/s3b6ai1il1ovbrl5/wish/1733906432 TINCIÓN DE GRAM a19663481 https://padlet.com/a19663481/s3b6ai1il1ovbrl5/wish/1733910243 2021-09-12 16:09:23 UTC https://padlet.com/a19663481/s3b6ai1il1ovbrl5/wish/1733910243 Es definida como una tinción diferencial, ya que utiliza dos colorantes y clasifica alas bacterias en dos grandes grupos: bacterias Gram negativas y bacterias Gram positivas. Fue desarrollada por el científico danés Hans Christian Gram en 1884. a19663481 https://padlet.com/a19663481/s3b6ai1il1ovbrl5/wish/1733914248 2021-09-12 16:12:52 UTC https://padlet.com/a19663481/s3b6ai1il1ovbrl5/wish/1733914248 A partir de muestras clínicas directas provenientes de sitios estériles se puede saber de manera rápida las características dela muestra y hacer una diferencia de los potenciales microorganismos causantes de una infección. a19663481 https://padlet.com/a19663481/s3b6ai1il1ovbrl5/wish/1733916866 2021-09-12 16:15:07 UTC https://padlet.com/a19663481/s3b6ai1il1ovbrl5/wish/1733916866 Los principios de la tinción de Gram están basados en las características de la pared celular de las bacterias, la cual le confiere propiedades determinantes a cada microorganismo. La pared celular de las bacterias Gram negativas está constituida por una capa fina de peptidoglicano y una membrana celular externa, mientras que las bacterias Gram positivas poseen una pared celular gruesa constituida por peptidoglicano, pero no cuentan con membrana celular externa; así pues, la composición química y el contenido de peptidoglicano en la pared celular de las bacterias Gram negativas y Gram positivas explica y determina las características tintoriales . a19663481 https://padlet.com/a19663481/s3b6ai1il1ovbrl5/wish/1733921288 2021-09-12 16:18:27 UTC https://padlet.com/a19663481/s3b6ai1il1ovbrl5/wish/1733921288 se basa en colocar como colorante primario cristal violeta, el cual tiene afinidad con el peptidoglicano de la pared bacteriana. Posteriormente, se coloca lugol, el cual sirve como mordiente e impide la salida del cristal violeta por la formación de un complejo cristal violeta yodo que satura los espacios del peptidoglicano de la pared bacteriana. En seguida, se coloca una mezcla de alcohol-acetona, la cual deshidrata la pared bacteriana y cierra los poros de la misma. Por último, se coloca safranina,l a cual funciona como un colorante secundario o de contratinción y sirve para teñir las bacterias que no pudieron retener el complejo cristal violeta-yodo. a19663481 https://padlet.com/a19663481/s3b6ai1il1ovbrl5/wish/1733932993 2021-09-12 16:28:20 UTC https://padlet.com/a19663481/s3b6ai1il1ovbrl5/wish/1733932993 Las muestras útiles para su uso son líquidos estériles, biopsias para cultivo, abscesos,hisopados, crecimiento de colonias aisladas en medios de cultivo. Las bacterias Gram positivas se observan de color azul obscuro a morado, mientras que las Gram negativas se observan de color rosa a rojo. a19663481 https://padlet.com/a19663481/s3b6ai1il1ovbrl5/wish/1733943364 2021-09-12 16:38:18 UTC https://padlet.com/a19663481/s3b6ai1il1ovbrl5/wish/1733943364 TINCIÓN DE WRIGHT a19663481 https://padlet.com/a19663481/s3b6ai1il1ovbrl5/wish/1733949627 2021-09-12 16:44:31 UTC https://padlet.com/a19663481/s3b6ai1il1ovbrl5/wish/1733949627 Es una técnica que se emplea generalmente para la diferenciación de elementos celulares de la sangre y es clasificada como una tinción policromática, dado que puede teñir compuestos ácidoso básicos presentes en una célula. Fue desarrollada por el patólogo James Homer Wright en 1902 a partir de la modificación de la ya existente tinción de Romanowsky, utilizada para diferenciar elementos formes de la sangre. a19663481 https://padlet.com/a19663481/s3b6ai1il1ovbrl5/wish/1733954851 2021-09-12 16:49:42 UTC https://padlet.com/a19663481/s3b6ai1il1ovbrl5/wish/1733954851 El reactivo de Wright está compuesto por eosina y azul de metileno, cuando éste se oxida se conoce como azur B a una concentración de 0.8 g/L empleando como solvente alcohol metílico. La eosina es un colorante ácido que tiene afinidad por componentes alcalina. a19663481 https://padlet.com/a19663481/s3b6ai1il1ovbrl5/wish/1733965631 2021-09-12 16:59:09 UTC https://padlet.com/a19663481/s3b6ai1il1ovbrl5/wish/1733965631 La tonalidad resultante de la tinción con eosina es rosada-anaranjada para citoplasmas, y rojo intenso en el caso de los eritrocitos. El típico color de los núcleos celulares, mayoritariamente morado, se basa en la interacción molecular entre eosina y un complejo azul de metileno-DNA. a19663481 https://padlet.com/a19663481/s3b6ai1il1ovbrl5/wish/1733968878 2021-09-12 17:02:12 UTC https://padlet.com/a19663481/s3b6ai1il1ovbrl5/wish/1733968878 Las muestras útiles para su uso son el frotis de sangre periférica y frotis de médula ósea. Los diferentes colores que se observan en la célula provocan el llamado efecto Romanowsky, que tiñe de púrpura a los núcleos y gránulos neutrofílicos y de color rosa al citoplasma. a19663481 https://padlet.com/a19663481/s3b6ai1il1ovbrl5/wish/1733981118 2021-09-12 17:14:42 UTC https://padlet.com/a19663481/s3b6ai1il1ovbrl5/wish/1733981118 TINCIÓN DE ZIEHL-NEELSEN a19663481 https://padlet.com/a19663481/s3b6ai1il1ovbrl5/wish/1733985169 2021-09-12 17:18:29 UTC https://padlet.com/a19663481/s3b6ai1il1ovbrl5/wish/1733985169 Técnica comúnmente usada en el diagnóstico rutinario de tuberculosis. Es una técnica rápida, fácil y de bajo costo, lo que permite que se pueda realizar en casi cualquier laboratorio clínico. Esta tinción permite diferenciar a las bacterias en dos grupos: aquellos que son capaces de resistir la decoloración con alcohol-ácido y aquellos que no lo son. a19663481 https://padlet.com/a19663481/s3b6ai1il1ovbrl5/wish/1733990051 2021-09-12 17:23:44 UTC https://padlet.com/a19663481/s3b6ai1il1ovbrl5/wish/1733990051 La pared celular de las micobacterias es extremadamente compleja en cuanto a su composición bioquímica; dicha característica es la que se ha aprovechado para realizarla tinción de Ziehl-Neelsen. La pared celular está compuesta por ácido mesodiaminopimélico, alanina, ácido glutámico, glucosamida, ácido murámico, arabinosa y galactosa (Figura 4). Los ácidos micólicos junto con lípidos libres (ej.trealosa-6,6´-dimicolato) proveen a la célula de una barrera hidrofóbica. Otros ácidos grasos importantes son: ceras, fosfolípidos, ácidos micoséricos y phtienoico. a19663481 https://padlet.com/a19663481/s3b6ai1il1ovbrl5/wish/1733996223 2021-09-12 17:29:49 UTC https://padlet.com/a19663481/s3b6ai1il1ovbrl5/wish/1733996223 Se basa en colocar carbol-fucsina y calentar la preparación ligeramente para solubilizar las ceras, lípidos y otros ácidos grasos de la pared celular para que permita el paso libre del colorante, el cual tiene una enorme afinidad por los ácidos micólicos presentes en la pared. Al enfriar con agua, los componentes de la pared vuelven a solidificar, resistiendo la acción abrasiva del alcohol-ácido, y el azul de metileno se utiliza como contratinción. a19663481 https://padlet.com/a19663481/s3b6ai1il1ovbrl5/wish/1733999443 2021-09-12 17:32:50 UTC https://padlet.com/a19663481/s3b6ai1il1ovbrl5/wish/1733999443 Las muestras clínicas útiles para su uso son múltiples, como el líquido cefalorraquídeo, líquido pleural, líquido sinovial, líquido pericárdico, biopsias para cultivo, abscesos, aspirados. a19663481 https://padlet.com/a19663481/s3b6ai1il1ovbrl5/wish/1734001223 2021-09-12 17:34:44 UTC https://padlet.com/a19663481/s3b6ai1il1ovbrl5/wish/1734001223 TINCIÓN NEGATIVA a19663481 https://padlet.com/a19663481/s3b6ai1il1ovbrl5/wish/1734002161 2021-09-12 17:35:45 UTC https://padlet.com/a19663481/s3b6ai1il1ovbrl5/wish/1734002161 Fue desarrollada originalmente para microscopia de luz con el fin de rodear y delinear las bacterias no teñidas u otros materiales biológicos. a19663481 https://padlet.com/a19663481/s3b6ai1il1ovbrl5/wish/1734004832 2021-09-12 17:38:49 UTC https://padlet.com/a19663481/s3b6ai1il1ovbrl5/wish/1734004832 Es muy útil, aunque está limitado por la presencia de un fondo oscuro que no permitirá la correcta identificación de forma nítida y detallada de los componentes de dichas estructuras. a19663481 https://padlet.com/a19663481/s3b6ai1il1ovbrl5/wish/1734014045 2021-09-12 17:47:57 UTC https://padlet.com/a19663481/s3b6ai1il1ovbrl5/wish/1734014045 El principio es simple, ya que sólo se requiere depositar una gota de la muestra clínica sobre un portaobjetos, posteriormente se coloca el colorante y se observa al microscopio sin necesidad de fijación, algunas estructuras difundirán el colorante y otras no, lo que permitirá un contraste de las estructuras observadas. Se han utilizado diferentescolorantes: uno de ellos es la mencionada tinta china. a19663481 https://padlet.com/a19663481/s3b6ai1il1ovbrl5/wish/1734015919 2021-09-12 17:49:50 UTC https://padlet.com/a19663481/s3b6ai1il1ovbrl5/wish/1734015919 Es muy barata, ya que no requiere equipos o material costoso para su realización. a19663481 https://padlet.com/a19663481/s3b6ai1il1ovbrl5/wish/1734019257 2021-09-12 17:53:19 UTC https://padlet.com/a19663481/s3b6ai1il1ovbrl5/wish/1734019257 TINCIÓN DE AZUL ALGODÓN DE LACTOFENOL. a19663481 https://padlet.com/a19663481/s3b6ai1il1ovbrl5/wish/1734024467 2021-09-12 17:58:37 UTC https://padlet.com/a19663481/s3b6ai1il1ovbrl5/wish/1734024467 Es de gran importancia en micología para la observación de las diferentes especies de hongos de interés clínico. Se deben utilizar tinciones que logren preservar la integridad de las estructuras fúngicas. a19663481 https://padlet.com/a19663481/s3b6ai1il1ovbrl5/wish/1734028692 2021-09-12 18:02:54 UTC https://padlet.com/a19663481/s3b6ai1il1ovbrl5/wish/1734028692 No es considerada una tinción diferencial, sin embargo, posee características tintoriales que permiten observar cada uno de los componentes fúngicos y apreciar fácilmente las estructuras para una adecuada identificación. El fenol inactiva las enzimas líticas dela célula e impide que ésta se rompa; de igual forma, destruye la flora acompañante e inactiva a la célula, quitándole el grado de patogenicidad. a19663481 https://padlet.com/a19663481/s3b6ai1il1ovbrl5/wish/1734031778 2021-09-12 18:06:08 UTC https://padlet.com/a19663481/s3b6ai1il1ovbrl5/wish/1734031778 El azul de algodón es un colorante ácido, que tiñe el citoplasma y la quitina presente en las células fúngicas, mientras que el glicerol mantiene húmeda la preparación. Una vez preparado el colorante, se debe colocar la muestra microbiológica en un portaobjetos por medio de una impronta (proceso en el cual se coloca una impresión de la muestra sobre una estructura utilizando una cinta adhesiva transparente). a19663481 https://padlet.com/a19663481/s3b6ai1il1ovbrl5/wish/1734034361 2021-09-12 18:08:59 UTC https://padlet.com/a19663481/s3b6ai1il1ovbrl5/wish/1734034361 Preparación de la impronta a19663481 https://padlet.com/a19663481/s3b6ai1il1ovbrl5/wish/1734035618  1. Colocar el material necesario en la campana de seguridad tipo.
2. Seleccionar las colonias para realizar las improntas. 
3. Cortar segmentos de cinta adhesiva transparente aproximadamente de 1 cm2 . 
4. Pegar los segmentos de cinta en un asa micológica. 
5. Poner una gota de azul de algodón en el portaobjetos. 
6. Con el lado adhesivo de la cinta, tocar la parte superior de hongo. 
7. Colocar la cinta sobre la gota de azul de algodón y poner otra gota de azul de algodón. 
8. Poner un cubreobjetos sobre la preparación. 
9. Observar en 40x. ]]> 2021-09-12 18:10:31 UTC https://padlet.com/a19663481/s3b6ai1il1ovbrl5/wish/1734035618