ELISA by Taous TERBOUCHE https://padlet.com/t_terbouche/pwx6uhwz0i7l en-us 2017-12-08 09:01:02 UTC 2018-01-29 18:38:17 UTC hello@padlet.com Réalisation d'une version de substitution du test ELISA t_terbouche https://padlet.com/t_terbouche/pwx6uhwz0i7l/wish/225587326 2018-01-29 12:53:38 UTC https://padlet.com/t_terbouche/pwx6uhwz0i7l/wish/225587326 Matériel t_terbouche https://padlet.com/t_terbouche/pwx6uhwz0i7l/wish/225588265 Barrette de 8 puits 

Solution mère d'anticorps anti-antigène, 1 mL  (C1)  solution d’empois amidon à 100g/l et sulfate de cuivre 4%

Sérum témoin (non immunisé) (T)  eau distillée 

Sérum à tester(X) fait à partir de C1

Solution d'anticorps conjugués de détection(AC) eau distillée.

Solution de lavage tween (lav) eau distillée

Solution de tampon PBS (tp) eau distillée

Solution de substrat de l'enzyme peroxydase, le TMB(TMB)  soude 4%

Micropipette et des cônes
Tubes
Papier essuie-tout

]]> 2018-01-29 12:56:30 UTC https://padlet.com/t_terbouche/pwx6uhwz0i7l/wish/225588265 Préparation de la solution mère t_terbouche https://padlet.com/t_terbouche/pwx6uhwz0i7l/wish/225594412 Pour la préparation de la solution mère d'anticorps anti-antigène, il s agit d’une solution d’empois amidon à 100g/l et sulfate de cuivre 4%. 

 on fait la solution d’empois dans la solution de sulfate de cuivre. Il faut préparer d’abord la solution de sulfate de cuivre, la faire chauffer, à la première ébullition ajouter le lait d’amidon (amidon mélangé avec un peu d’eau : cela évite ensuite les grumeaux dans la solution) et laisser bouillir quelques minutes puis laisser refroidir : nous obtenons une solution épaisse bleutée.

REMARQUE/
La solution d’empois d’amidon est épaisse , elle reste ainsi au fond du puits et ne tombe pas lors des différents lavages (si on reste délicat). Le sulfate de cuivre permet avec la soude d’avoir une réaction colorée.]]> 2018-01-29 13:13:22 UTC https://padlet.com/t_terbouche/pwx6uhwz0i7l/wish/225594412 Préparation sérum témoin (T) t_terbouche https://padlet.com/t_terbouche/pwx6uhwz0i7l/wish/225595176   il s’agit simplement d’eau distillée : il faut ajouter  du colorant alimentaire pour avoir la même couleur que la solution mère d'anticorps anti-antigène.]]> 2018-01-29 13:15:26 UTC https://padlet.com/t_terbouche/pwx6uhwz0i7l/wish/225595176 Réalisation de la gamme étalon t_terbouche https://padlet.com/t_terbouche/pwx6uhwz0i7l/wish/225596325  à partir de 1mL de la solution d'anticorps anti-antigène (C1), réaliser une dilution en cascade d’un facteur ½ à chaque étape, c'est à dire prélever 0,5 mL de la solution d'anticorps anti-antigène et compléter avec 0,5 mL de tampon PBS (tp), dans des tubes, de C2 à C6.]]> 2018-01-29 13:18:05 UTC https://padlet.com/t_terbouche/pwx6uhwz0i7l/wish/225596325 Protocole en image t_terbouche https://padlet.com/t_terbouche/pwx6uhwz0i7l/wish/225596968  Repérer les puits et déposer dans 80 µL du sérum à tester, du sérum témoin et des anticorps anti-antigène à différentes concentrations, en prélevant avec la même micropipette des concentrations les plus faibles vers les concentrations les plus fortes.

Laisser incuber 2 minutes à température ambiante. Il est évident qu’attendre ne sert à rien mais on voulait garder la même méthode que dans le vrai tp elisa sauf que l’on a reduit à 2 min au lieu des 15 min

Pour vider la barrette, la retourner très délicatement  (sans taper) sur du papier essuie-tout pour éliminer l’excès de produits et éviter la contamination. Geste rapide !!! mais tout en délicatesse sinon tout les produits se vident des puits.

 Si nécessaire tamponner avec du papier essuie–tout  pour enlever d’éventuelles gouttelettes


Laver les puits 

Remplir tous les puits avec la solution de lavage(jusqu'à obtention d'une goutte en surface) et vider comme précédemment.

Mettre dans tous les puits 40 µL de la solution d'anticorps conjugués de détection 

aisser incuber 2 minutes.
Vider les puits et les laver.
Mettre dans les puits 80 µL de substrat de l’enzyme peroxydase, le TMB.

  Observer les colorations. Résultats obtenus au laboratoire

Résultats d’élèves 
avec 2 sujets à tester différents   (on donne aux élèves un sujet à tester mais il est soit négatif soit positif mais avec une concentration différente)

 



]]> 2018-01-29 13:19:28 UTC https://padlet.com/t_terbouche/pwx6uhwz0i7l/wish/225596968 Résultat en image t_terbouche https://padlet.com/t_terbouche/pwx6uhwz0i7l/wish/225606010 http://svt.discipline.ac-lille.fr/ressources/lycee/terminale/le-maintien-de-lintegrite-de-lorganisme/images/elisa.jpg

http://svt.discipline.ac-lille.fr/ressources/lycee/terminale/le-maintien-de-lintegrite-de-lorganisme/images/elisa-019.jpg/@@images/63899c52-8fb9-4b65-8027-eaccade81f20.jpeg]]> 2018-01-29 13:39:29 UTC https://padlet.com/t_terbouche/pwx6uhwz0i7l/wish/225606010 Résultat en image 1 marolland https://padlet.com/t_terbouche/pwx6uhwz0i7l/wish/225784224 2018-01-29 18:29:29 UTC https://padlet.com/t_terbouche/pwx6uhwz0i7l/wish/225784224 Vidéo sur ELISA + questions marolland https://padlet.com/t_terbouche/pwx6uhwz0i7l/wish/225785890 2018-01-29 18:32:01 UTC https://padlet.com/t_terbouche/pwx6uhwz0i7l/wish/225785890