PROTOCOLO PARA LA OBTENCIÓN DE ADN GENÓMICO by Maria Guadalupe Hernández Torres https://padlet.com/htmaria010997/ADNGENOMICO El ADN genómico es el conjunto de ADN que comprende el genoma de un organismo, es el ADN cromosómico nuclear que ha sido aislado directamente de células o tejidos. en-us 2020-12-21 03:59:51 UTC 2026-01-24 04:56:42 UTC hello@padlet.com https://padlet.net/icons/png/1f9ec.png 1. Colocar la muestra en un mortero que haya sido precongelado previamente a -80°C,agregar nitrógeno líquido y moler hasta obtener un polvo fino. htmaria010997 https://padlet.com/htmaria010997/ADNGENOMICO/wish/1035209065 2020-12-21 04:08:58 UTC https://padlet.com/htmaria010997/ADNGENOMICO/wish/1035209065 2. Antes de que descongele la muestra, adicionar sobre ella 10 volúmenes del buffer de lisis previamente precalentado. Homogenizar un par de veces antes de que descongele completamente. htmaria010997 https://padlet.com/htmaria010997/ADNGENOMICO/wish/1035214082 2020-12-21 04:13:05 UTC https://padlet.com/htmaria010997/ADNGENOMICO/wish/1035214082 3.- Homogenizar y transferir a un tubo nuevo, incubar a 90oC por 10 minutos, mezclar un par de veces durante el proceso. Adicionar 1/10 de volumen de SDS al 10%, homogenizare incubar por 5 minutos más. Transcurrido ese tiempo se permite que la muestra se enfríe atemperatura ambiente. htmaria010997 https://padlet.com/htmaria010997/ADNGENOMICO/wish/1035215279 2020-12-21 04:14:16 UTC https://padlet.com/htmaria010997/ADNGENOMICO/wish/1035215279 4. Adicionar 0.5 volúmenes de la mezcla previamente enfriada de fenol-cloroformoalcohol isoamílico (25:24:1 v/v), homogenizar y centrifugar a 14,000 rpm por 15 minutos a4oC. htmaria010997 https://padlet.com/htmaria010997/ADNGENOMICO/wish/1035216904 2020-12-21 04:15:48 UTC https://padlet.com/htmaria010997/ADNGENOMICO/wish/1035216904 5. Transferir el sobrenadante a un tubo nuevo y agregar 0.1 volúmenes de acetato desodio 3M (pH 5.2), 0.5 volúmenes de fenol-cloroformo (5:1 v/v), homogenizar y centrifugara 14,000rpm por 10 minutos a temperatura ambiente. htmaria010997 https://padlet.com/htmaria010997/ADNGENOMICO/wish/1035219534 2020-12-21 04:18:03 UTC https://padlet.com/htmaria010997/ADNGENOMICO/wish/1035219534 6. Transferir el sobrenadante a un tubo nuevo y adicionar 0.65 volúmenes de la mezclade Etanol-Metanol-Ácido acético glacial (9:3:1 v/v). Agitar y centrifugar a 13,000 rpm por 5minutos a temperatura ambiente. Para mejorar el rendimiento se recomienda antes decentrifugar incubar por una hora a -20oC. htmaria010997 https://padlet.com/htmaria010997/ADNGENOMICO/wish/1035221469 2020-12-21 04:19:48 UTC https://padlet.com/htmaria010997/ADNGENOMICO/wish/1035221469 7.- Tirar el sobrenadante. Lavar con 1 mililitro de la mezcla de Etanol-Agua-MetanolAcetato de sodio 3M, pH 5.2 (30:9:5:1). Agitar y centrifugar a 13,000 rpm por 5 minutos. htmaria010997 https://padlet.com/htmaria010997/ADNGENOMICO/wish/1035222859 2020-12-21 04:21:03 UTC https://padlet.com/htmaria010997/ADNGENOMICO/wish/1035222859 8.- Secar la pastilla y disolver en agua grado biología molecular (de 20 a 100 µLdependiendo del tamaño de la pastilla formada) htmaria010997 https://padlet.com/htmaria010997/ADNGENOMICO/wish/1035223725 2020-12-21 04:21:52 UTC https://padlet.com/htmaria010997/ADNGENOMICO/wish/1035223725