https://padlet.com/elizanavarro/pfk6uixrggl8o7h3 en-us 2021-04-26 22:00:46 UTC 2024-11-12 18:44:31 UTC hello@padlet.com https://media4.giphy.com/media/dWIL4na2N5OtBe8AqN/giphy.gif elizanavarro https://padlet.com/elizanavarro/pfk6uixrggl8o7h3/wish/1461840432 Existe evidencia de que los principios básicos del método de la PCR fueron comprendidos y utilizados en la práctica por algunas personas en 1983, pero el crédito por la conceptualización  y la previsión de sus aplicaciones recae en Kary Mullis, a quien se le otorgó el premio Nobel de Química de 1993 por su conocimiento.]]> 2021-04-26 22:18:08 UTC https://padlet.com/elizanavarro/pfk6uixrggl8o7h3/wish/1461840432 elizanavarro https://padlet.com/elizanavarro/pfk6uixrggl8o7h3/wish/1461871892 2021-04-26 22:35:47 UTC https://padlet.com/elizanavarro/pfk6uixrggl8o7h3/wish/1461871892 elizanavarro https://padlet.com/elizanavarro/pfk6uixrggl8o7h3/wish/1461910547 2021-04-26 22:57:43 UTC https://padlet.com/elizanavarro/pfk6uixrggl8o7h3/wish/1461910547 elizanavarro https://padlet.com/elizanavarro/pfk6uixrggl8o7h3/wish/1461915987 2021-04-26 23:01:14 UTC https://padlet.com/elizanavarro/pfk6uixrggl8o7h3/wish/1461915987 elizanavarro https://padlet.com/elizanavarro/pfk6uixrggl8o7h3/wish/1461971480 2021-04-26 23:34:03 UTC https://padlet.com/elizanavarro/pfk6uixrggl8o7h3/wish/1461971480 elizanavarro https://padlet.com/elizanavarro/pfk6uixrggl8o7h3/wish/1461974760 2021-04-26 23:35:48 UTC https://padlet.com/elizanavarro/pfk6uixrggl8o7h3/wish/1461974760 elizanavarro https://padlet.com/elizanavarro/pfk6uixrggl8o7h3/wish/1461978878  El ingenio de la PCR surge de incorporar simultáneamente un segundo cebador cercano de polaridad opuesta (es decir, complementario a la hebra opuesta a la que se hibrida el primer cebador) y luego someter la mezcla de molde, dos cebadores (a altas concentraciones), ADN polimerasa termoestable, y tampón de polimerasa que contiene dNTP para ciclos repetidos de desnaturalización térmica, hibridación y extensión del cebador. ]]> 2021-04-26 23:38:10 UTC https://padlet.com/elizanavarro/pfk6uixrggl8o7h3/wish/1461978878 elizanavarro https://padlet.com/elizanavarro/pfk6uixrggl8o7h3/wish/1462002725  La desnaturalización y el recocido ocurren como se describió anteriormente, pero con ambos cebadores. Si se permite que la extensión de la polimerasa continúe durante un corto período de tiempo (del orden de 1 minuto por 1000 pares de bases), cada uno de los cebadores se extenderá más allá de la ubicación del otro, creando así un nuevo sitio de apareamiento complementario para el cebador opuesto. ]]> 2021-04-26 23:50:33 UTC https://padlet.com/elizanavarro/pfk6uixrggl8o7h3/wish/1462002725 elizanavarro https://padlet.com/elizanavarro/pfk6uixrggl8o7h3/wish/1462021397  Elevar la temperatura de nuevo a la desnaturalización detiene el proceso de elongación del cebador y desplaza las polimerasas y las hebras recién creadas. A medida que el sistema se enfría de nuevo a la temperatura de hibridación, cada una de las hebras de ADN simples y cortas recién formadas sirve como sitio de hibridación para su cebador de polaridad opuesta.]]> 2021-04-26 23:59:55 UTC https://padlet.com/elizanavarro/pfk6uixrggl8o7h3/wish/1462021397 elizanavarro https://padlet.com/elizanavarro/pfk6uixrggl8o7h3/wish/1462068503  La repetición de los pasos térmicos de desnaturalización, hibridación y extensión del cebador conduce a una norte aumento exponencial ( donde norte es el número de ciclos térmicos) en el número de este producto definido, lo que permite niveles fenomenales de "amplificación de secuencia". ]]> 2021-04-27 00:20:06 UTC https://padlet.com/elizanavarro/pfk6uixrggl8o7h3/wish/1462068503 elizanavarro https://padlet.com/elizanavarro/pfk6uixrggl8o7h3/wish/1462076364 Dentro de los 40 ciclos térmicos de una reacción de PCR idealizada, una única molécula de ADN molde genera aproximadamente 10 amplicones, más que suficiente para pasar de un objetivo invisible a un producto teñido con colorante fluorescente claramente visible. ]]> 2021-04-27 00:23:05 UTC https://padlet.com/elizanavarro/pfk6uixrggl8o7h3/wish/1462076364 elizanavarro https://padlet.com/elizanavarro/pfk6uixrggl8o7h3/wish/1462084908 2021-04-27 00:26:20 UTC https://padlet.com/elizanavarro/pfk6uixrggl8o7h3/wish/1462084908 crystalpineda1028 https://padlet.com/elizanavarro/pfk6uixrggl8o7h3/wish/1462774042 Quizás no sea sorprendente que haya muchas complejidades técnicas detrás de esta descripción engañosamente simple. El diseño del cebador debe tener en cuenta aspectos como las estructuras secundarias del ADN, la singularidad de la secuencia y la similitud de T entre los cebadores.]]> 2021-04-27 05:15:58 UTC https://padlet.com/elizanavarro/pfk6uixrggl8o7h3/wish/1462774042 crystalpineda1028 https://padlet.com/elizanavarro/pfk6uixrggl8o7h3/wish/1462783482 En general, el proceso de PCR funciona mejor cuando los cebadores están a distancias cortas entre sí (de 100 a 500 pares de bases), pero las reacciones bien optimizadas han tenido éxito a distancias de decenas de kilobases.]]> 2021-04-27 05:19:59 UTC https://padlet.com/elizanavarro/pfk6uixrggl8o7h3/wish/1462783482 crystalpineda1028 https://padlet.com/elizanavarro/pfk6uixrggl8o7h3/wish/1462802675 Se pueden emplear técnicas de “arranque en caliente”, frecuentemente a través de la modificación covalente de la polimerasa, para asegurar que no ocurra un apareamiento y extensión de cebadores inadecuados antes del primer paso de desnaturalización, evitando así la producción de productos incorrectos.]]> 2021-04-27 05:27:37 UTC https://padlet.com/elizanavarro/pfk6uixrggl8o7h3/wish/1462802675 crystalpineda1028 https://padlet.com/elizanavarro/pfk6uixrggl8o7h3/wish/1462809182 2021-04-27 05:30:38 UTC https://padlet.com/elizanavarro/pfk6uixrggl8o7h3/wish/1462809182 crystalpineda1028 https://padlet.com/elizanavarro/pfk6uixrggl8o7h3/wish/1462811226 El emparejamiento de la PCR con un paso preliminar de transcripción inversa (ya sea con cebado aleatorio o usando uno de los cebadores de PCR para dirigir la actividad de la ADN polimerasa dependiente de ARN [transcriptasa inversa]) permite que las plantillas de ARN se conviertan en ADNc y luego se sometan a una PCR regular , en una variación conocida como PCR de transcripción inversa (RT-PCR). En general, la discusión posterior utiliza el término PCR para referirse tanto a la PCR como a la RT-PCR.]]> 2021-04-27 05:31:31 UTC https://padlet.com/elizanavarro/pfk6uixrggl8o7h3/wish/1462811226 crystalpineda1028 https://padlet.com/elizanavarro/pfk6uixrggl8o7h3/wish/1462815935 La detección de productos de PCR se puede realizar de varias formas. Las “técnicas de punto final” posteriores a la reacción incluyen electroforesis en gel y tinción con colorante específico de ADN. ]]> 2021-04-27 05:33:39 UTC https://padlet.com/elizanavarro/pfk6uixrggl8o7h3/wish/1462815935 crystalpineda1028 https://padlet.com/elizanavarro/pfk6uixrggl8o7h3/wish/1462817129 2021-04-27 05:34:13 UTC https://padlet.com/elizanavarro/pfk6uixrggl8o7h3/wish/1462817129 crystalpineda1028 https://padlet.com/elizanavarro/pfk6uixrggl8o7h3/wish/1462821314 La
hibridación de productos de PCR en microarrays o arreglos de perlas en
suspensión se puede usar para detectar amplicones específicos cuando más de
una secuencia de producto puede salir de un ensayo.

]]> 2021-04-27 05:36:09 UTC https://padlet.com/elizanavarro/pfk6uixrggl8o7h3/wish/1462821314 crystalpineda1028 https://padlet.com/elizanavarro/pfk6uixrggl8o7h3/wish/1462824406 Estos, a su vez, utilizan una variedad de métodos para el marcado de amplicones, que incluyen quimioluminiscencia, fluorescencia y técnicas electroquímicas. Alternativamente,
las metodologías de PCR en tiempo real emplean alguna forma de detectar directamente la producción en curso de amplicones en el recipiente de reacción, más comúnmente mediante el monitoreo de un cambio de fluorescencia directo o indirecto relacionado con la producción de amplicones por métodos ópticos. Estos métodos permiten que el recipiente de reacción permanezca sellado durante todo el proceso.]]> 2021-04-27 05:37:31 UTC https://padlet.com/elizanavarro/pfk6uixrggl8o7h3/wish/1462824406 crystalpineda1028 https://padlet.com/elizanavarro/pfk6uixrggl8o7h3/wish/1462828544 Conceptualmente, el método más simple para la detección de PCR en tiempo real se basa en el uso de tintes que se unen selectivamente y se vuelven fluorescentes en presencia de ADN de doble hebra, como SYBR green. La producción de un producto de PCR durante el termociclado conduce a un aumento exponencial en la cantidad de producto bicatenario presente en los pasos térmicos de recocido y extensión de cada ciclo. ]]> 2021-04-27 05:39:23 UTC https://padlet.com/elizanavarro/pfk6uixrggl8o7h3/wish/1462828544 crystalpineda1028 https://padlet.com/elizanavarro/pfk6uixrggl8o7h3/wish/1462831330 Un problema potencial con este enfoque es que los tintes indicadores no son específicos de secuencia, por lo que cualquier producto espurio producido por la reacción puede dar lugar a señales positivas falsas. ]]> 2021-04-27 05:40:39 UTC https://padlet.com/elizanavarro/pfk6uixrggl8o7h3/wish/1462831330 crystalpineda1028 https://padlet.com/elizanavarro/pfk6uixrggl8o7h3/wish/1462835483 Varios enfoques alternativos utilizan reporteros de fluorescencia basados en sondas, que evitan esta posible señal inespecífica. Los enfoques basados en sondas funcionan mediante la aplicación de un proceso llamado transferencia de energía resonante de fluorescencia (FRET). En términos simples, FRET ocurre cuando dos fluoróforos están muy próximos y la longitud de onda de emisión de uno (el informador) coincide con la longitud de onda de excitación del otro (el extintor). Los fotones emitidos en la longitud de onda de emisión del tinte informador son capturados efectivamente por el tinte apagador cercano y reemitidos a la longitud de onda de emisión del apagador. 


]]> 2021-04-27 05:42:32 UTC https://padlet.com/elizanavarro/pfk6uixrggl8o7h3/wish/1462835483 elizanavarro https://padlet.com/elizanavarro/pfk6uixrggl8o7h3/wish/1466159270 2021-04-27 19:32:06 UTC https://padlet.com/elizanavarro/pfk6uixrggl8o7h3/wish/1466159270 elizanavarro https://padlet.com/elizanavarro/pfk6uixrggl8o7h3/wish/1466165919  La transferencia de energía resonante de fluorescencia (FRET) ocurre solo cuando los fluoróforos informador y extintor están muy cerca uno del otro, lo que lleva a la detección de luz en el extintor. ]]> 2021-04-27 19:33:46 UTC https://padlet.com/elizanavarro/pfk6uixrggl8o7h3/wish/1466165919 elizanavarro https://padlet.com/elizanavarro/pfk6uixrggl8o7h3/wish/1466212920  Si el informador y el extintor no están colocalizados, la estimulación del informador conduce en cambio a la detección de luz en la frecuencia de emisión del informador. ]]> 2021-04-27 19:45:31 UTC https://padlet.com/elizanavarro/pfk6uixrggl8o7h3/wish/1466212920 elizanavarro https://padlet.com/elizanavarro/pfk6uixrggl8o7h3/wish/1466220241  Colocando los fluoróforos informadores y desactivadores en sondas de ácido nucleico monocatenarias complementarias al amplicón esperado, se pueden diseñar diferentes variaciones de este método de modo que la aparición de FRET pueda usarse para monitorizar la producción de amplicones específicos de secuencia. ]]> 2021-04-27 19:47:27 UTC https://padlet.com/elizanavarro/pfk6uixrggl8o7h3/wish/1466220241 cesarolivera https://padlet.com/elizanavarro/pfk6uixrggl8o7h3/wish/1466222878  Las aplicaciones del proceso de PCR son increíblemente diversas. La simple aparición o no aparición de un amplicón en una reacción adecuadamente controlada puede tomarse como evidencia de la presencia o ausencia, respectivamente, de la plantilla diana del ensayo. Esto conduce a aplicaciones médicas como la detección de agentes de enfermedades infecciosas a sensibilidades, especificidades y velocidades mucho mayores que los métodos alternativos. ]]> 2021-04-27 19:48:12 UTC https://padlet.com/elizanavarro/pfk6uixrggl8o7h3/wish/1466222878 elizanavarro https://padlet.com/elizanavarro/pfk6uixrggl8o7h3/wish/1466273050  Los biólogos evolutivos han hecho uso de la PCR para amplificar el ADN de muestras bien conservadas, como insectos encerrados en ámbar de millones de años, con secuenciación posterior y análisis filogenético, obteniendo resultados fascinantes sobre la continuidad y evolución de la vida en la Tierra. ]]> 2021-04-27 20:02:09 UTC https://padlet.com/elizanavarro/pfk6uixrggl8o7h3/wish/1466273050 josuermadrigal https://padlet.com/elizanavarro/pfk6uixrggl8o7h3/wish/1466602133  tiene aplicaciones útiles, como en la búsqueda de una muestra de una secuencia desconocida que se sospecha que es similar a una conocida ]]> 2021-04-27 21:59:18 UTC https://padlet.com/elizanavarro/pfk6uixrggl8o7h3/wish/1466602133 josuermadrigal https://padlet.com/elizanavarro/pfk6uixrggl8o7h3/wish/1466606405  Descubrimiento de nuevas especies de virus, cuando se emplean cebadores que coinciden con una especie de virus similar. 



]]> 2021-04-27 22:01:34 UTC https://padlet.com/elizanavarro/pfk6uixrggl8o7h3/wish/1466606405 josuermadrigal https://padlet.com/elizanavarro/pfk6uixrggl8o7h3/wish/1466623961  Durante una clonación dirigida por PCR de un gen o región de interés, los desajustes planificados en la secuencia del cebador y los T s ligeramente reducidos pueden usarse para introducir mutaciones deseadas en un proceso llamado mutagénesis dirigida al sitio 
 ]]> 2021-04-27 22:10:35 UTC https://padlet.com/elizanavarro/pfk6uixrggl8o7h3/wish/1466623961 josuermadrigal https://padlet.com/elizanavarro/pfk6uixrggl8o7h3/wish/1466656155 Proporcionado a los forenses criminales herramientas lo suficientemente poderosas para identificar individuos a partir de ADN residual en evidencia de la escena del crimen tan pequeña como colillas de cigarrillos, huellas dactilares manchadas o un solo cabello 


]]> 2021-04-27 22:28:04 UTC https://padlet.com/elizanavarro/pfk6uixrggl8o7h3/wish/1466656155 josuermadrigal https://padlet.com/elizanavarro/pfk6uixrggl8o7h3/wish/1467366262 2021-04-28 03:26:33 UTC https://padlet.com/elizanavarro/pfk6uixrggl8o7h3/wish/1467366262 elizanavarro https://padlet.com/elizanavarro/pfk6uixrggl8o7h3/wish/1467367110 2021-04-28 03:26:58 UTC https://padlet.com/elizanavarro/pfk6uixrggl8o7h3/wish/1467367110 josuermadrigal https://padlet.com/elizanavarro/pfk6uixrggl8o7h3/wish/1467370279 2021-04-28 03:28:30 UTC https://padlet.com/elizanavarro/pfk6uixrggl8o7h3/wish/1467370279 elizanavarro https://padlet.com/elizanavarro/pfk6uixrggl8o7h3/wish/1467375321 2021-04-28 03:30:56 UTC https://padlet.com/elizanavarro/pfk6uixrggl8o7h3/wish/1467375321 elizanavarro https://padlet.com/elizanavarro/pfk6uixrggl8o7h3/wish/1467384251 2021-04-28 03:35:19 UTC https://padlet.com/elizanavarro/pfk6uixrggl8o7h3/wish/1467384251 elizanavarro https://padlet.com/elizanavarro/pfk6uixrggl8o7h3/wish/1467398206 .]]> 2021-04-28 03:42:21 UTC https://padlet.com/elizanavarro/pfk6uixrggl8o7h3/wish/1467398206 elizanavarro https://padlet.com/elizanavarro/pfk6uixrggl8o7h3/wish/1467409280 2021-04-28 03:48:50 UTC https://padlet.com/elizanavarro/pfk6uixrggl8o7h3/wish/1467409280