Per dimostrare che i brodi organici, una volta sterilizzati, non entrano in fermentazione se si evita di farli entrare in contatto con le spore batteriche, Pasteur condusse un importante esperimento usando palloni con un collo sottile, lungo e ricurvo, da lui appositamente ideato. Facendo bollire il brodo dentro il pallone, si sviluppa del vapore che sterilizza il collo; quando il pallone si raffredda, il vapore che lo occupa si contrae, richamando l'aria dall'esterno, ma il collo ad S costituisce una trappola per le spore. E il brodo nel pallone, dopo oltre cento anni, è ancora rimasto inalterato! Se invece si rompe il collo, il brodo fermenta presto, perchè i germi non sono più bloccati. |

Queste caratteristiche strutturali distinguono i batteri Gram-positivi dall'altro grande gruppo di batteri, i batteri Gram-negativi, così chiamati per l'incapacità di trattenere la colorazione di cristalvioletto. Questi ultimi microrganismi, al contrario, trattengono altre colorazioni di contrasto (safranina o fucsina) e appaiono di colore rosso o rosa. Il diverso comportamento rispetto alla colorazione di Gram è dovuto al fatto che i batteri Gram-negativi presentano uno strato di peptidoglicano decisamente più sottile. Inoltre il peptidoglicano si trova localizzato tra due membrane cellulari: una membrana cellulare interna e una membrana esterna batterica.
GRAM NEGATIVI
Si definiscono Gram-negativi quei batteri che rimangono colorati di rosa dopo aver subito la colorazione di Gram. Si contrappongono ai batteri Gram-positivi, che invece rimangono colorati in blu-violetto all'inizio del procedimento di Gram.

Colorazione di Gram[modifica | modifica wikitesto]

Suddividere i batteri in funzione della colorazione che presentano dopo essere stati soggetti al metodo di Gram è il modo più utilizzato per distinguere i batteri, anche se ciò non comporta alcun grado di parentela tra le diverse specie batteriche.

I Gram negativi si contraddistinguono, come detto, perché non mantenengono la colorazione dopo il trattamento con il metodo di Gram. Dapprima trattate con cristalvioletto, le colture batteriche vengono lavate con un mordenzante, il liquido di Lugol. Poi si utilizza un decolorante, per esempio alcol etilico. Se i batteri, dapprima colorati di viola o blu, dopo trattamento con decolorante perdono la colorazione, allora vengono definiti Gram negativi. Ciò è dovuto al fatto che i Gram negativi possiedono una sottile parete cellulare, costituita da non più del 5% da peptidoglicano (a differenza dei gram-positivi dove il peptidoglicano rappresenta circa il 50% - 90% della parete stessa) che permette al colorante di penetrare e colorare la cellula, permettendo di seguito anche al decolorante di penetrare e decolorare la cellula. È questa sostanzialmente la differenza più grande che caratterizza e differenzia i Gram positivi dai Gram negativi. 

Si definiscono Gram-positivi quei batteri che rimangono colorati di blu o viola dopo aver subito la colorazione di Gram. Si contrappongono ai batteri Gram-negativi, che invece subiscono la decolorazione. I batteri Gram-positivi sono in grado di trattenere la colorazione del cristalvioletto a causa dello strato di peptidoglicano presente nella loro parete cellulare.

Queste caratteristiche strutturali distinguono i batteri Gram-positivi dall'altro grande gruppo di batteri, i batteri Gram-negativi, così chiamati per l'incapacità di trattenere la colorazione di cristalvioletto. Questi ultimi microrganismi, al contrario, trattengono altre colorazioni di contrasto (safranina o fucsina) e appaiono di colore rosso o rosa. Il diverso comportamento rispetto alla colorazione di Gram è dovuto al fatto che i batteri Gram-negativi presentano uno strato di peptidoglicano decisamente più sottile. Inoltre il peptidoglicano si trova localizzato tra due membrane cellulari: una membrana cellulare interna e una membrana esterna batterica.

I Gram-positivi si contraddistinguono, come detto, per mantenere la colorazione dopo trattamento con il metodo di Gram. Dapprima trattate con cristalvioletto, le colture batteriche vengono lavate con un mordenzante, il liquido di Lugol. Poi si utilizza un decolorante, per esempio alcol etilico. Se i batteri rimangono colorati di viola o blu anche dopo essere stati trattati con il decolorante, vengono definiti Gram positivi. Ciò è dovuto al fatto che i Gram positivi possiedono una spessa parete cellulare esterna, che permette al colorante di penetrare e colorare la cellula, mentre impedisce al decolorante di penetrare e decolorare la cellula. È questa sostanzialmente la differenza più grande che caratterizza e differenzia i Gram positivi dai Gram negativi

Egli preparò degli infusi e li sterilizzò facendoli bollire per più di un'ora. Alcuni di questi infusi erano contenuti in recipienti di vetro sigillati alla fiamma. Spallanzani notò che in questi contenitori non si verificava crescita batterica (l'infuso non si intorbidiva né era possibile osservare microrganismi al microscopio). Questo lavoro lo fece conoscere in tutta Europa.

Gli studi fisiologici

Nel 1768 si interessò della circolazione sanguigna e su questo argomento pubblicò Dell'azione del cuore nei vasi sanguigni.

Tra il 1777 e il 1780 approfondì il problema della riproduzione e fin dal 1777 ottenne la prima fecondazione artificiale, usando uova di rana e rospo. Raccolse i risultati dei propri esperimenti in Dissertazioni di fisica animale e vegetale. Si dedicò, inoltre, a ricerche inerenti alladigestione e alla respirazione.

Le sue ricerche di fisiologia gastroenterologica furono fondamentali nel dimostrare come il processo digestivo non consista solo nella semplice triturazione meccanica del cibo, ma anche in un processo di azione chimica a livello gastrico, necessario per permettere l'assorbimento dei nutrienti.

Firma di Louis Pasteur

Grazie alle sue scoperte e alla sua attività di ricerca è universalmente considerato il fondatore della moderna microbiologia. Ha inoltre operato nel campo della chimica, e di lui si ricorda la teoria sull'enantiomeria dei cristalli. Occasionalmente si occupò anche di fisica.

È significativo rilevare che tutte le grandi scoperte dello scienziato francese vengono realizzate affrontando i problemi più gravi, a metà dell'Ottocento, dell'agricoltura, dell'industria agraria, dell'allevamento. La successione delle stesse scoperte corrisponde ad una successione di studi su problemi agricoli, agroindustriali, veterinari:

Firma di Louis Pasteur

Grazie alle sue scoperte e alla sua attività di ricerca è universalmente considerato il fondatore della moderna microbiologia. Ha inoltre operato nel campo della chimica, e di lui si ricorda la teoria sull'enantiomeria deicristalli. Occasionalmente si occupò anche difisica.

Lazzaro Spallanzani (Scandiano, 12 gennaio1729 – Pavia, 11 febbraio 1799) è stato ungesuita e naturalista italiano. Considerato il "padre scientifico" della fecondazione artificiale, è ricordato soprattutto per aver confutato la teoria della generazione spontanea con un esperimento che verrà successivamente ripreso e perfezionato daLuigi Pasteur.
La sua opera resta legata ad esperienze e scoperte di eccezionale importanza, che portarono a negare in primo luogo la generazione spontanea negli infusori. Scoprì inoltre il succo gastrico, compì studi notevoli sulla fecondazione ed ammise per via sperimentale l'esistenza degli scambi gassosi respiratori nel sangue. Assai notevoli anche i suoi studi sulla respirazione.

Esempi di batteri Gram positivi e Gram negativi

batteri gram-positivi
Clostridium botulinum
Clostridium difficile
Clostridium tetani
Corynebacterium diphtheriae
Listeria monocytogenes
Mycobacterium leprae
Mycobacterium tuberculosis
Staphylococcus aureus
Staphylococcus epidermidis
Streptococcus pneumoniae
Streptococcus pyogenes | batteri gram-negativi
Bartonella bacilliformis
Leptospira interrogans
Morganella morganii
Neisseria gonorrhoeae
Proteus mirabilis
Proteus vulgaris
Providencia rettgeri
Pseudomonas aeruginosa
Salmonella paratyphi
Salmonella typhiShigella boydii
Shigella dysenteriae
Shigella flexneri
Shigella sonnei
Treponema pallidum
Treponema pertenue
Vibrio cholerae
Yersinia pestis
Bordetella pertussis
Brucella abortus bovis
Brucella abortus suis
Brucella melitensis
Escherichia coli
Francisella tularensis
Haemophilus ducreyi
| batteri gram-negativi
Haemophilus influentiae
Haemophilus parainfluentiae Klebsiella pneumoniae
Legionella dumoffii
Legionella micdade
iLegionella pneumophila
Legionella pittsburgensis
Leptospira interrogans
Morganella morganii
Neisseria gonorrhoeae
Proteus mirabilis
Proteus vulgaris
Providencia rettgeri
Pseudomonas aeruginosa
Salmonella paratyphi
Salmonella typhi
Shigella boydii
Shigella dysenteriae
Shigella flexneri
Shigella sonnei
Treponema pallidum
Treponema pertenue
Vibrio cholerae
Yersinia pestis Materiale occorrente :Ansavetrini portaoggettibeco bunsenbacchetta di vetrocolorante Cristal violettoacqua distillatasoluzione di Lugolalcool al 95%colorante Fucsinasospensione batterica di Escherichia Coli e di Lactobacillicoltura di amilobacter ottenuta dal terreno in presenza di un pezzetto di patataMicroscopio |

ProcedimentoPrendiamo, con un’ansa, degl’Escherichia Coli da una piastra e li appoggiamo su di un vetrino portaoggetti; con un altro vetrino spandiamo i batteri in modo da formare una sottile pellicola e la lasciamo ad asciugare all’aria; dopo questa operazione fissiamo i batteri passando il vetrino, con l’ausilio di una pinza, sul beco bunsen; coloriamo con colorante Cristal violetto, per circa 30 secondi, appoggiando il vetrino su di un vassoio e su di una bacchetta di vetro; laviamo con acqua distillata e copriamo il tutto con la soluzione di Lugol per circa 30 secondi; laviamo con acqua distillata e decoloriamo con l’alcool al 95% per 10-20 secondi; laviamo ancora con acqua; coloriamo con il colorante Fucsina per 30 secondi; lavare con acqua; tamponare l’eccesso di liquidi e coprire con vetrino coprioggetti. Queste operazioni le svolgiamo sia per gli Escherichia Coli, sia per i Lactobacilli. Dopo tutto ciò andiamo ad osservare al microscopio ottico.

2 minuti in soluzione fenicata di violetto di genziana;
eliminare il colorante;1    minuto in soluzione di Lugol;eliminare la soluzione;alcuni minuti in alcool etilico 90%,finché il preparato non stinge più;3 minuti in soluzione diluita di fucsina fenica­ta; eliminare il colorante;lavare in acqua corrente, essiccare, osservare al microscopio.  | 

Osservazioni
Osserviamo i preparati al microscopio notiamo che gli Escherichia Coli sono colorati di rosa mentre i Lactobacilli sono colorati di bluConclusioni
Dalle osservazioni concludiamo che: la parete degli Escherichia coli si è legata labilmente al cristal violetto e perciò si è decolorata in presenza di alcool per colorarsi poi con la fuxina presentando il colore rosa; i Lactobacilli hanno una parete che si è legata stabilmente al cristal violetto e non si è decolorata il presenza di alcool presentando perciò una colorazione bleu.

Escherichia Coli: è un bacillo Gram negativo |

Streptococco: è un cocco Gram positivo | 

L'Amilobacter è un bacillo Gram negativo che vive nel terreno

Alexander Fleming nasce il 6 agosto 1881 a Lochfield in Scozia. A cinque anni inizia a frequentare una scuola di campagna, situata vicino alla sua fattoria. Dagli 8 ai 10 anni frequenta la scuola di Darvel, città vicina, e successivamente a dodici l'Accademia di Kilmarnock, importante città della contea d'Ayr. A tredici anni e mezzo si trasferisce a Londra, dove lo aspettano alcuni fratelli, e insieme a Robert segue i corsi della Polytechnic School.

Dalla guerra del Transvaal agli studi di medicina[modifica | modifica wikitesto]

Nell'anno 1900 scoppia la guerra del Transvaal, nell'odierno Sudafrica. Alec (Alexander) ed i fratelli John e Robert, si arruolano come volontari nei London Scottish, reggimento composto esclusivamente da Scozzesi. Ma il numero dei soldati è superiore alle richieste, e i Fleming non partono per la guerra. In questo ambiente militare Alexander dimostra la sua bravura nello sport: è un valente nuotatore, un eccellente giocatore di pallanuoto e un ottimo tiratore. Abilità che gli permettono di entrare nell'Inoculation Departement, dove lavora per gran parte della sua vita. Alexander ha 20 anni quando muore suo zio John, da cui riceve un'eredità di 250 sterline che decide di spendere per studiare medicina. Per entrare necessita di un diploma speciale per chi non ha frequentato le scuole secondarie. Studia e supera brillantemente l'esame, tanto da risultare il migliore in tutto il Regno Unito (luglio 1901). Sceglie di frequentare la scuola del Saint Mary's Hospital, un giovane ospedale nel quartiere di Paddington, nel quale entra nell'ottobre del 1901. È uno studente brillante, primo nella maggior parte delle materie, molto preparato seppur non dotato di una vasta cultura, limitazione che compensa con l'ampia abilità di ragionamento e la spiccata intelligenza del naturalista. All'inizio si profila per lui una carriera da chirurgo, avendo superato il relativo esame ed acquistato il titolo di Fellow Royal College of Surgeons. Ma ben presto un fatto irrilevante, la sua bravura nel tiro, devia la sua strada.

Fleming e Wright, l'Inoculation Department[modifica | modifica wikitesto]

Fleming su un francobollo a lui dedicato

È il 1902 quando Sir Almroth Wright, celebre batteriologo, crea l'Inoculation Department al Saint Mary Hospital. Fleming ci entra nel 1906, in modo fortuito: uno dei discepoli di Wright, il dottor John Freeman, vuole far risorgere lo shooting club dell'ospedale, e gli viene suggerito Alexander.

Avvicinatosi allo scozzese, riesce a farlo deviare dal suo corso di studi di chirurgia al department, anche cercando di condividere con lui l'ammirazione per Wright. Il Department è una piccola struttura, in cui i giovani medici scelti da Wright (chiamato "il Vecchio") operano sia come clinici che come ricercatori. Qui i malati vengono sottoposti all'inoculazione, ovvero quella che noi chiamamo vaccinazione, in quel periodo considerata l'unica vera arma contro le malattie. Ma il gruppo di Wright vuole fare di più: dalla vaccinazione preventiva vuole passare a quella terapeutica. Al dipartimento, Little Flem si rilevò un ottimo elemento: esperto e ingegnoso, i pochi strumenti da laboratorio a sua disposizione si piegavano alla sua volontà, così da diventare oggetti particolari e complicati; nello stile di scrittura elegante e chiaro, riuscì persino a essere lodato dal suo capo. E proprio con Wright che lo scozzese avrà un rapporto particolare e profondo, nato dal loro contrasto caratteriale ma anche dalla reciproca stima. In quegli anni Fleming incominciò a frequentare il Chelsea Arts Club, e lo continuerà a fare per il resto della sua vita. Nel 1908 Fleming supera gli ultimi anni di medicina, classificandosi primo. Nel 1909 l'Inoculation Department diventa una struttura indipendente e viene ingrandito e migliorato grazie alle sovvenzioni di alcuni ammiratori ricchi e potenti di Wright. Sempre nello stesso anno, con l'invenzione da parte di Paul Ehrlich del Salvarsan, un derivato dell'arsenico particolarmente potente, iniziava il periodo della chemioterapia. Nonostante questo, il gruppo del department era ostinato alla ricerca di una cura che facesse affidamento alle naturali difese del corpo umano, ed era scettico verso le sostanze chimiche. Nonostante i vari successi del gruppo, la ricerca del "Proiettile Magico", ovvero un rimedio più potente possibile contro i microbi ma anche non tossico per il corpo umano, era ancora all'inizio.

La prima guerra mondiale[modifica | modifica wikitesto]

Nell'aprile del 1914 Fleming lascia i London Scottish, poiché i loro periodi di istruzione militare non erano più compatibili con il lavoro in ospedale. Ironia della sorte, pochi mesi dopo scoppia la Prima guerra mondiale. Wright fu nominato colonnello e fu mandato in Francia per creare un laboratorio e un centro di ricerche a Boulogne-sur-Mer, portando con sé anche Alex, che aveva 2 stellette di tenente RAMC (Royal Army Medical Corps). Il lavoro che lo aspetta sarà titanico, nonostante la vaccinazione antitifica che Wright riuscì a imporre all'esercito: casi di setticemia, tetano, gangrena. In tempi di pace, la chirurgia era ormai diventata sterile grazie alle operazioni di antisepsi easepsi inventate da Lister; ma quelli non erano tempi di pace. I corpi feriti dei soldati brulicavano di batteri e sporcizia, brandelli di vestiti e residui bellici e nonostante il pesante uso di antisettici, gli uomini morivano. I tessuti morti delle ferite erano un terreno di coltura ideale per i microbi e bisognava asportarli; questo era possibile con quelle superficiali, ma la maggior parte erano ferite profonde. In questi casi si utilizzavano pesantemente acido fenico,acido borico e acqua ossigenata: si sapeva che avevano un'efficacia solo parziale, ma la maggior parte dei medici preferiva questo che non utilizzare niente. Fleming fece esperimenti e dimostrò che gli antisettici avevano un'efficacia praticamente nulla in caso di ferite profonde: non potendosi diffondere, non riuscivano ad arrivare ai batteri che si insediavano nelle anfrattuosità della carne dilaniata. Quello che si poteva fare, secondo Fleming e Wright, era invece stimolare l'arrivo delle difese naturali del corpo e scoprirono che quest'azione la davano delle soluzioni ipertoniche, come quelle di ipoclorito di sodio. I risultati furono soddisfacenti e vennero pubblicati, non senza qualche obiezione: in particolare ci fu contrasto fra Wright e Sir William Watson Cheyen, presidente del Collegio Reale dei Chirurghi, in disaccordo su come vennero giudicati gli antisettici ormai cari a questi medici. Il 23 dicembre 1915, durante un periodo di licenza, Alexander si sposa con Sarah Marion Mc Elroy, capo-infermiera di una clinica privata nel cuore di Londra. Nel novembre 1918 la guerra finì e, nel gennaio 1919, Fleming fu smobilitato e poté così riprendere le sue ricerche.

La scoperta del Lisozima[modifica | modifica wikitesto]

Nel 1922, in modo casuale, scopre il lisozima: qualche settimana dopo aver messo del suo muco nasale su una capsula di Petri, nota che delle colture di microbi si erano sviluppate su tutta la piastra tranne che sulla sua secrezione. Esperimenti successivi fatti con altro muco o con lacrime gli dimostrarono che era presente in questi liquidi una sostanza ad azione antibatterica, molto superiore a quella del siero di origine animale. Le caratteristiche di questi liquidi erano dovuti ad un enzima, che "lisava" (dal greco Lysis, dissoluzione) certi microbi: da qui il nome lisozima. Lo scozzese trovò l'enzima in molti tessuti e umori, umani come animali o vegetali: esso sembrava l'antisettico naturale, la prima difesa della cellula contro i microbi, il mezzo con cui gli esseri viventi potevano sopravvivere senza essere continuamente attaccati da malattie. Fleming avrebbe voluto isolare l'enzima puro, ma il gruppo al department non aveva né un chimico né un biochimico (problema che si riscontrerà anche in seguito con la penicillina). Fleming presentò i suoi risultati: nel dicembre 1922 espose i suoi studi al Medical Research Club, ma ottennero un'accoglienza glaciale. Sempre con argomento il lisozima, Alexander preparò una comunicazione che Wright presentò alla Royal Society of Medicine, e dal '22 al '27 pubblicò altri 5 studi. Il lisozima si rivelò presto non potente come creduto da Fleming: devastante sui batteri innocui, perdeva efficacia sui batteri patogeni. Così la sua ricerca continuò. Studiò il mercurocromo, antisettico efficace ma troppo tossico per l'uomo. Il 18 marzo 1924 nasce il suo primo figlio, Robert.

La scoperta della Penicillina[modifica | modifica wikitesto]

La scoperta della Penicillina da parte di Fleming fu preceduta da alcuni studi sulle muffe nei decenni precedenti. Il primo report scientifico sulla capacità delle muffe di distruggere i batteri fu pubblicato da John Burton al St. Mary's Hospital di Londra nel 1870[2]. Nel 1895 il capitano medico della Regia Marina Militare Italiana Vincenzo Tiberio pubblicò sugli Annali di Igiene Sperimentale, una rivista pubblicata in italiano, quindi poco diffusa[3], il suo lavoro sulle proprietà antibatteriche delle muffe, tra cui il Penicillium glaucum[4]. Tiberio sperimentò l'azione battericida degli estratti acquosi delle colture sia in vivo, su cavie e conigli, sia in coltura su stafilococco, sul batterio del tifo, carbonchio e colera. Nel 1896 Bartolomeo Gosio isolò da una coltura di Penicillium glaucum, o forse di Penicillium brevicompactum, una sostanza cristallina con proprietà fenoliche che inibiva la crescita in coltura del bacillo dell'antrace[5]. Alexander Fleming nel 1928, con grande fortuna, si imbatté in una capsula di Petri particolare: era macchiata di muffa come tante altre nel suo laboratorio, ma attorno a essa le colonie batteriche si erano dissolte. L'efficacia del fungo fu provata su vari tipi di batteri e i risultati furono più che soddisfacenti sia per range di efficacia (distruggeva gli streptococchi, i stafilococchi, i bacilli della difterite e del carbonchio, ma era inefficace sui batteri del tifo) sia per forza (avevano effetto soluzioni diluite fino a 1/500). La muffa miracolosa fu identificata inizialmente come penicillium rubrum (ma due anni più tardi si scoprì che era in realtà penicillium notatum): da qui il nomepenicillina. Nonostante lo straordinario potere di antibiosi della penicillina, essa presentava un grande problema: era difficile da produrre e, se vi si riusciva, le quantità erano scarse. Come per il lisozima, inoltre, Fleming avrebbe desiderato isolare il principio attivo, la penicillina pura, e non il filtrato grezzo; ma l'assenza di chimici glielo impedì. Sempre nel 1928 fu nominato professore di batteriologia all'Università di Londra. Il ricercatore presentò i risultati sulla penicillina il 13 febbraio 1929 al Medical Research Club, ottenendo la stessa accoglienza ricevuta col lisozima. Con l'avvento dei sulfamidici, la penicillina venne “messa da parte”: avrebbe avuto la sua rivalsa solo qualche anno più tardi, grazie agli studi di alcuni ricercatori di Oxford. I sulfamidici, chiamati così perché derivati dalla sulfamide, erano stati creati dalla Bayer, che comunicò i suoi risultati al mondo nel 1935. L'imponente funzione di batteriostasi dei sulfamidici era efficace a concentrazioni basse rispetto a quelle che sarebbero state tossiche per l'uomo, benché essi divenissero inefficaci in presenza di una concentrazione troppo elevata di microbi. Fleming, come tanti altri ricercatori, li studiò, pur sempre convinto della superiorità della penicillina.

Il gruppo di Oxford[modifica | modifica wikitesto]

A Oxford c'era un gruppo di ricercatori della Sir William Dunn School, di cui i maggiori erano Howard Florey, australiano, ed Ernst Boris Chain, ebreo tedesco, cittadino britannico dal 1939. Senza i loro studi, probabilmente la penicillina di Fleming non si sarebbe mai imposta. I loro studi iniziali erano sul lisozima, ma nel 1936 si imbatterono negli studi di Fleming sulla prodigiosa sostanza. Il loro gruppo di ricerca riuscì a isolare della penicillina parzialmente purificata, mille volte più attiva di quella grezza e 10 volte più potente del sulfamidico. Sperimentarono la sostanza su degli animali e nel 1940 pubblicarono i loro risultati sul The Lancet. Alexander ne fu piacevolmente sorpreso e nello stesso anno andò ad Oxford per conoscere il gruppo. Dopo gli esperimenti sugli animali, passarono all'uomo: nel febbraio 1941 un poliziotto di Oxford stava morendo di setticemia. La penicillina quasi lo salvò, ma le esigue riserve della sostanza impedirono un completo trattamento, e in marzo il paziente morì. La straordinaria potenza dell'antibiotico spinse Chain e Florey a cercare i mezzi per produrla in quantità. Non potendo contare sulle industrie chimiche europee, occupate per il conflitto mondiale, Florey andò negli Stati Uniti, contattando il governo. Lì, dopo lunghe ricerche portate avanti da ricercatori delle università, di alcune case farmaceutiche e con il sostegno dell'esercito statunitense, fu messo a punto un metodo di produzione su larga scala, basato sull'utilizzo del corn steep liquor (CSL o acqua di macerazione), sottoprodotto della fabbricazione dell'amido, e su un ceppo di Penicillium estremamente produttivo.

Il Virus del mosaico del tabacco è l'agente eziologico dell'omonima malattia, che colpisce molte specie tra cui la barbabietola da zucchero, il cetriolo, il mais, la patata, ilpisello, il pomodoro e il tabacco. È un virus altamente infettivo che si trasmette per contatto senza il concorso di vettori.

Il mosaico del tabacco si manifesta con la formazione di macchie di colore giallo o verde sulle foglie della pianta. Si presentano spesso anche deformazione o increspamento della foglia. La distruzione dei cloroplasti e l'alterazione dell'attività degli enzimi che regolano la fotosintesi bloccano la crescita della pianta e ne provocano il conseguente deperimento.

Spesso è indicata con l'abbreviazione TMVdall'inglese tobacco mosaic virus.

Quelle del mosaico del tabacco sono state le prime formazioni virali ad essere osservate dall'uomo nel 1892, ad opera dello scienziato russo Dmitrij Iosifovic Ivanovskij. Saranno classificate come virus nel 1898 dal botanico olandese Martinus Willem Beijerinck il quale, usando esperimenti di filtrazione su foglie di tabacco infette, riuscì a dimostrare che il mosaico del tabacco è causato da un agente infettivo di dimensioni inferiori a quelle di unbatterio.

Beijerinck chiama tali agenti vira, particelle subcellulari capaci di riprodursi infettando una cellula ospite.

Il mosaico del tabacco si manifesta con la formazione di macchie di colore giallo o verde sulle foglie della pianta. Si presentano spesso anche deformazione o increspamento della foglia. La distruzione dei cloroplasti e l'alterazione dell'attività degli enzimi che regolano la fotosintesi bloccano la crescita della pianta e ne provocano il conseguente deperimento.

Spesso è indicata con l'abbreviazione TMV dall'inglese tobacco mosaic virus.

Quelle del mosaico del tabacco sono state le prime formazioni virali ad essere osservate dall'uomo nel 1892, ad opera dello scienziato russo Dmitrij Iosifovic Ivanovskij. Saranno classificate come virus nel 1898 dal botanico olandese Martinus Willem Beijerinck il quale, usando esperimenti di filtrazione su foglie di tabacco infette, riuscì a dimostrare che il mosaico del tabacco è causato da un agente infettivo di dimensioni inferiori a quelle di un batterio.

Beijerinck chiama tali agenti vira, particelle subcellulari capaci di riprodursi infettando una cellula ospite

La malattia causata da queste particelle colpisce varie specie vegetali (oltre al tabacco, anche la barbabietola da zucchero, il cetriolo, il mais, la patata, il pisello, il pomodoro, ...) ed è chiamata mosaico perché si manifesta con delle macchie sulla superficie delle foglie. 

Nel 1898 il botanico e microbiologo olandese Martinus Willem Beijerinck (1851-1931), con degli esperimenti di filtrazione condotti su foglie di tabacco infette, dimostrò che a causare di questa malattia dovevano essere particelle di dimensioni inferiori a quelle batterichea, che chiamò virus. 

Le particelle virali di TMV furono osservate per la prima volta nel 1939 come sottili bastoncelli cilindrici lunghi circa 300 nm, con il microscopio elettronico a trasmissione.

La struttura molecolre del TMV fu ricostruita nel 1958 con metodi cristallografici da vari ricercatori, tra cui Rosalind Franklin, che ipotizzò correttamente che i cilindri fossero costituiti da un assemblaggio elicoidale di proteine contenente al suo interno un singolo filamento di acido ribonucleico (RNA).

Il rivestimento proteico del TMV è formato da circa 2130 copie di una proteina di dimensioni relativamente piccole. La molecola di RNA, colorata in arancione nell'immagine principale, codifica per le quattro molecole proteiche che cooperano all'intero ciclo vitale del virus: due per la replicazione dello stesso RNA, una per il suotrasporto da cellula a cellula nel corso dell'infezione, e quella dei "mattoncini" che formano il capside raffigurato nell'immagine di dettaglio

Fra gli esempi di provirus si citano i retrovirus e i profagi. Per es., quando un retrovirus invade una cella, l'RNA del retrovirus è trascritto in DNA dalla transcriptasi inversa quest'ultimo DNA viene poi inserito nel genoma della cellula ospitante da una integrasi
STORIA PROVIRUS
Nel 1961 fu osservato che l'informazione del Virus del sarcoma di Rous (RSV) fosse contenuta nell'RNA, e non nel DNA come previsto dal "dogma" della genetica. Le cellule trasformate dall'RSV mantenevano tuttavia le proprie caratteristiche stabilmente attraverso numerosi cicli mitotici. Ciò spinse Howard Temin a ipotizzare nel 1962 che l'RNA dell'RSV fosse trasformato in qualche modo in DNA e integrato nel cromosoma della cellula ospitante. Per analogia con quanto si conosceva dei profagi lisogeni, Temin battezzò l'ipotetico agente "provirus" in realtà a quell'epoca non era ancora nota l'esistenza della transcrittasi inversa. Nel 1965 ad André Lwoff venne assegnato il premio Nobel per la medicina per i suoi studi sulla lisogenia dei profagi e per aver previsto l'esistenza di meccanismi simili nelle cellule eucarioti. Il concetto di integrazione del genoma virale nelle cellule somatiche dell'ospitante fu dimostrato solo nel 1968 ...

Il morbo divenne noto all'opinione pubblicacome morbo della mucca pazza (in inglese MCD, mad cow disease). La BSE faceva parte di un gruppo di malattie denominate encefalopatie spongiformi trasmissibili (TSE) che colpivano diverse specie animali, compreso l'uomo. Dalla scoperta della malattia, numerose ricerche e prevenzioni sono state svolte accuratamente a partire dall'esordio dell'epidemia, che ha portato all'eradicazione totale della malattia.

La malattia di Creutzfeldt-Jakob (MCJ), originariamente descritta negli anni venti delXX secolo da Hans Gerhard Creutzfeldt edAlfons Maria Jakob, era una malattia neurodegenerativa rara, che conduceva ad una forma di demenza progressiva fatale.[1]

La sindrome clinica è caratterizzata da deficit polisettoriali prevalentemente corticali con perdita di memoria, cambiamenti dipersonalità, allucinazioni, disartria, mioclono, rigidità posturale e convulsioni. A livello istologico si assiste alla formazione di microvacuolazioni del tessuto cerebrale che assume una struttura di tipo spugnoso, dovute alla progressiva perdita di neuronicausata da alterazione di una proteina di membrana, espressa prevalentemente in cellule del sistema nervoso e del sistema reticolo-endoteliale, il prione. Il prione nella sua forma alterata (PrPSc) dimostra capacità infettive, potendo cioè propagarsi agendo sulla forma nativa (PrPc).

L'incidenza della MCJ si è mantenuta relativamente costante negli ultimi 80 anni, nell'ordine di 1-2/1.000.000/anno. Ottiene gli onori della cronaca dopo la descrizione dei primi casi di una forma variante, ancor più rara, legata all'epidemia di encefalopatia spongiforme bovina, la cosiddetta malattia della "mucca pazza".[2][3]

La sindrome clinica è caratterizzata da deficit polisettoriali prevalentemente corticali con perdita di memoria, cambiamenti dipersonalità, allucinazioni, disartria, mioclono, rigidità posturale e convulsioni. A livello istologico si assiste alla formazione di microvacuolazioni del tessuto cerebrale che assume una struttura di tipo spugnoso, dovute alla progressiva perdita di neuronicausata da alterazione di una proteina di membrana, espressa prevalentemente in cellule del sistema nervoso e del sistema reticolo-endoteliale, il prione. Il prione nella sua forma alterata (PrPSc) dimostra capacità infettive, potendo cioè propagarsi agendo sulla forma nativa (PrPc).

L'incidenza della MCJ si è mantenuta relativamente costante negli ultimi 80 anni, nell'ordine di 1-2/1.000.000/anno. Ottiene gli onori della cronaca dopo la descrizione dei primi casi di una forma variante, ancor più rara, legata all'epidemia di encefalopatia spongiforme bovina, la cosiddetta malattia della "mucca pazza"

Sterilizzazione per calore secco

La sterilizzazione per calore secco si impiega generalmente per polvere, olei e altri materiali sensibili al calore umido. Il calore secco richiede temperature più elevate e tempi di applicazione più lunghi per raggiungere lo stesso risultato. I metodi per calore secco includono cottura, fiamma diretta e incinerazione.

Il calore secco funziona denaturizandoenzima e acidi nucleici per ossidazione. Per via della denaturazione di enzimi e acidi nucleici effettivamente saranno stati uccisi i microorganismi. Ricordi che è funzione sia della temperatura che del tempo. Uno dei principali problemi dei metodi per calore secco è che il processo di sterilizzazione non fornisce una distribuzione di temperatura uniforme. Questi sterilizzatori hanno spesso un ventilatore per combattere questo problema. Se sta sterilizzando polvere è possibile che i medesimi si dispersino. Questo metodo è ottimo per vetro e metallo. Sulla lista si possono trovare i tempi e le temperature:

Sterilizzazione per radiazione

I metodi per radiazione includono esposizione ai raggi ultravioletta o radiazione ionizzanti ad alta energia, ad esempio raggi gamma bensì che elettroni ad alta velocità. Perciò i metodi per radiazione incorporano forme di radiazione ionizzanti e non ionizzanti.

I raggi X e i raggi gamma possiedono alta energia e hanno la capacità di strappare via gli elettroni dalle molecole effettivamente ionizzando. Così i raggi X e i raggi gamma sono forme di sterilizzazione per radiazione. Queste forme ad alta energia provocano che le molecole liberino radicali liberi d'idrogeno, radicali idrossilo, radicali idrossilo e perossidi. Questi radicali sono capaci di causare gravi danni intracellulari.

La radiazione ultravioletta ha poca energia e non riesce ad ionizzare le molecole. Nonostante queste assorbono radiazioni d'onda de UV e provocano che gli elettroni vengano eccitati a livelli superiori di energia che eventualmente potrebbero distruggere la struttura cellulare. La radiazione UV spesso si usa in ospedali per uccidere dei microorganismi durante e dopo i processi chirurgici e prevenire la propagazione della malattia. I fasci di elettroni e i raggi gamma sono impiegati spesso per sterilizzare prodotti farmaceutici.

Metodi chimici

I metodi chimici impiegano prodotti chimici in forma liquida o gassosa. Durante il processo si espongono gli oggetti a gas come l'ossido di etilene, formaldeide, glutaraldeide, ossido di propilene o acido peracetico. Ci concentreremo sull'ossido di etilene e l'acido peracetico.

Sterilizzazione con ossido di etilene

Il metodo gassoso più comune è per via dell'ossido di etilene. Si tratta di un etere ciclico che agisce come agente alchilante. L'ossido di etilene è infiammabile ed esplosivo e per questo deve essere operato con precauzione. Si usa spesso con gas inerti come il diossido di carbonio per prevenire incendi ed esplosioni. Questo gas spesso viene impiegato per sterilizzare strumenti chirurgici, guanti, siringhe in plastica, aghi usa e getta, set di tubi o unità di analisi. L'intervallo di tempo di sterilizzazione varia fra 2 e 6 ore a temperatura di 55ºC.

Sterilizzazione con acido peracetico

L'acido peracetico è un riconosciuto ossidante biocida. È conveniente per eliminare contaminanti per superfici di materiale chirurgico come le proteine. Esistono sterilizzatori con acido peracetico controllati mediante microprocessori. Il meccanismo d'azione non è conosciuto bene e l'informazione disponibile è limitata. Si pensa che causa la denaturazione delle proteine e distrugga effettivamente le pareti cellulari.

Prima dell'adozione del sistema HACCP le verifiche venivano effettuate a valle del processo produttivo, con analisi della salubrità del prodotto finito, pronto per la vendita al consumatore, e spesso il prodotto era consumato prima dell'individuazione dell'irregolarità. Inoltre, per le analisi, veniva effettuato il campionamento (analisi di un lotto tramite prelievo di un campione) ed il risultato del campione analizzato non era sempre un risultato significativo (l'eventuale contaminazione non si distribuisce omogeneamente nel lotto).

Dopo l'emanazione del D.Lgs. 155/1997, poi abrogato dal d.lgs. 193/2007 in attuazione del regolamento CE 852/2004, è stato introdotto in Italia il sistema HACCP che, promuovendo il concetto di prevenzione, analizza i possibili pericoli verificabili in ogni fase del processo produttivo e nelle fasi successive come lo stoccaggio, il trasporto, la conservazione e la vendita o somministrazione al consumatore.

In altri termini questo controllo si prefigge di monitorare tutta la filiera del processo di produzione e distribuzione degli alimenti; lo scopo è quello di individuare le fasi del processo che possono rappresentare un punto critico (per esempio: la distribuzione di prodotti surgelati, dove la temperatura di conservazione non deve salire oltre i -18 °C, rimanendo costante dalla produzione alla consumazione).

Il sistema pone un importante accento sulla qualità alimentare, in particolare riguardo a salubrità e sicurezza; concetto che va oltre la semplice soddisfazione del cliente, ma punta piuttosto alla tutela della salute pubblica.

Come processo collaterale, la conservazione si prefigge lo scopo di preservare le proprietà tecnologiche del prodotto destinato alla trasformazione fisica o al trasporto. In questo ambito la conservazione è una tecnologia secondaria adottata come fase integrata a supporto di un processo di trasformazione che esula da fini temporali. Un esempio emblematico è la conservazione del latte destinato alla caseificazione: la carica patogena del latte, in questo caso, ha un'importanza secondaria in quanto sarà abbattuta dal processo della caseificazione; tuttavia la carica microbica avrà effetto sul valore merceologico della materia prima; in questo caso, la refrigerazione, ad esempio, ha lo scopo di limitare le perdite di valore tecnologico del prodotto durante le fasi di sosta nell'azienda agraria, trasporto al caseificio e stoccaggio in attesa del processo di caseificazione.

Lo sforzo principale è rivolto a fermare o quantomeno a rallentare il deterioramento delle sostanze e quindi a prevenire i fenomeni di avvelenamento alimentare. Ai metodi tradizionali quali il raffreddamento e la messa sotto sale si affiancano, specie nella produzione di formaggi e vini, processi più moderni che prevedono l'aggiunta di microorganismi catalizzatori come i lieviti. Oltre al valore nutritivo, nei processi di conservazione si presta attenzione anche all'aspetto e al sapore, specie nelle economie di mercato in cui tali parametri forniscono valore aggiunto agli alimenti.

Prima dell'adozione del sistema HACCP le verifiche venivano effettuate a valle del processo produttivo, con analisi della salubrità del prodotto finito, pronto per la vendita al consumatore, e spesso il prodotto era consumato prima dell'individuazione dell'irregolarità. Inoltre, per le analisi, veniva effettuato il campionamento (analisi di un lotto tramite prelievo di un campione) ed il risultato del campione analizzato non era sempre un risultato significativo (l'eventuale contaminazione non si distribuisce omogeneamente nel lotto).

Dopo l'emanazione del D.Lgs. 155/1997, poi abrogato dal d.lgs. 193/2007 in attuazione del regolamento CE 852/2004, è stato introdotto in Italia il sistema HACCP che, promuovendo il concetto di prevenzione, analizza i possibili pericoli verificabili in ogni fase del processo produttivo e nelle fasi successive come lo stoccaggio, il trasporto, la conservazione e la vendita o somministrazione al consumatore.

acqua grezza per ottenere un'acqua che sia idonea al normale consumo domestico o per l'irrigazione dei campi e anche per usi industriali (es. per l'utilizzo da parte di stabilimenti a scopo alimentare). Con il graduale esaurirsi delle 

sorgenti naturali di acqua potabile (acque profonde), si sta sempre più ricorrendo all'acqua di origine superficiale (mari, fiumi, laghi naturali e artificiali). Queste fonti di approvvigionamento, a causa delle caratteristiche specifiche dell'acqua e/o del grado di inquinamento, devono essere sottoposte a cicli di trattamenti di potabilizzazione necessari a modificarne le caratteristiche e migliorarne la qualità.

 Sovente questo accade anche per le acque profonde con un alto contenuto di sostanze organiche ed un'elevata contaminazione microbica, soprattutto se sono presenti batteri di origine fecale. Per il trattamento delle acque di mare vedere dissalazione.  La depurazione si attua facendo passare le acque grezze (provenienti da fiumi o laghi) attraverso svariati tipi di impianti di rimozione del materiale organico ed inorganico. I metodi di rimozione utilizzati possono essere di natura fisica, chimico-fisica e biologica in funzione del tipo di sostanze da eliminare dall'acqua grezza in ingresso all'impianto~

Prima dell'adozione del sistema HACCP le verifiche venivano effettuate a valle del processo produttivo, con analisi della salubrità del prodotto finito, pronto per la vendita al consumatore, e spesso il prodotto era consumato prima dell'individuazione dell'irregolarità. Inoltre, per le analisi, veniva effettuato il campionamento (analisi di un lotto tramite prelievo di un campione) ed il risultato del campione analizzato non era sempre un risultato significativo (l'eventuale contaminazione non si distribuisce omogeneamente nel lotto).

Dopo l'emanazione del D.Lgs. 155/1997, poi abrogato dal d.lgs. 193/2007 in attuazione del regolamento CE 852/2004, è stato introdotto in Italia il sistema HACCP che, promuovendo il concetto di prevenzione, analizza i possibili pericoli verificabili in ogni fase del processo produttivo e nelle fasi successive come lo stoccaggio, il trasporto, la conservazione e la vendita o somministrazione al consumatore.

Alcuni organismi, come ad esempio i batteri o i protozoi, sono costituiti da una singola cellula e definiti unicellulari. Gli altri, come l'uomo [formato da circa 100.000 miliardi (1014) di cellule], sono invece pluricellulari. I principali organismi pluricellulari appartengono tipicamente ai regni animale, vegetale e dei funghi.

Le cellule degli organismi unicellulari presentano caratteri morfologici solitamente uniformi. Con l'aumentare del numero di cellule di un organismo, invece, le cellule che lo compongono si differenziano in forma, grandezza, rapporti e funzioni specializzate, fino alla costituzione di tessuti ed organi

Il criterio per la distinzione dall'altro dominio, iprocarioti, è la presenza di un nucleo cellulareben definito e isolato dal resto della cellulatramite una membrana, contenente la maggior parte del materiale genetico rappresentato dal DNA (una parte minore è contenuta nei mitocondri).

Gli acidi nucleici sono macromolecole aperiodiche a debole reazione acida deputate alla conservazione e al trasporto dell'informazione genetica. Gli acidi nucleici sono macromolecole polimeriche lineari le cui unità ripetitive sono i nucleotidi Questi ultimi sono formati da uno zucchero, una base azotata e alcuni gruppi fosfati. Gli acidi nucleici vengono prodotti a partire dai nucleotidi per disidratazione . I legami tra i tre gruppi che formano un nucleotide sono un legame fosfoestereo tra il carbonio e il gruppo fosfato, un legame tra il gruppo fosfato e il carbonio  del nucleotide seguente. La base azotata è esterna allo scheletro formato dagli altri due gruppi e si dice che "si affacci" all'interno della catena. La catena ha forma di elica per i legami difosfato che si formano nella sua struttura secondaria. La ricerca sulla struttura degli acidi nucleici ebbe inizi più lenti di quella sulle proteine, soprattutto perché gli acidi nucleici non si trovano, come invece alcune proteine fibrose, in uno stato relativamente puro. Il loro nome li definisce come contenuti nel nucleo delle cellule. Furono trovati abbondanti dapprima nel lievito e poi nel timo, ghiandola endocrina attiva fino all'adolescenza. L'associazione tra il periodo dell'adolescenza e la formazione di proteine fu messa in evidenza nel lavoro di T. Casperssen negli anni 30. Il fatto che assorbivano luce ultravioletta e assumevano certi colori rivelò la loro presenza in vaste quantità nei cromosomi, già noti per essere associati alle trasformazioni genetiche e alla riproduzione. Chimicamente, sono polimeri di unità di base dette nucleotidi, formati da una base azotate  legata a uno zucchero pentoso (ribosio nell'acido ribonucleico, RNA, desossiribosio, nell'acido desossiribonucleico, DNA) e a un gruppo fosfato che fa da ponte tra i pentosi di due nucleotidi successivi.Il loro difficile studio strutturale fu iniziato nel 1932 da W. T. Astbury, dopo che erano stati isolati e dopo che si era trovato che potevano essere dissolti in un liquido glutinoso, che poteva essere ridotto in filamenti rivelando una struttura polimerica fibrosa. Astbury dimostrò che - i quattro nucleotidi, le purine, adenina e guanina, e le pirimidine, citosina e timina (uracile nel RNA), si disponevano come monete ad angolo retto rispetto all'asse del filo. S. Furberg dimostrò che il cerchio delle molecole di zucchero era sistemato ad angolo retto in modo da poter essere raggiunto attraverso gli zuccheri dai fosfati per formare un polimero. Quando le analisi chimiche di E. Chargaff dimostrarono che il numero di purine e pirimidine era esattamente equilibrato.F. H. C. Crick e Watson enunciarono la loro famosa ipotesi secondo la quale l'organizzazione non è a elica singola ma doppia, dato che la purina di una catena si unisce con la pirimidina in un unico avvolgimento con essa. Wilkins e Rosalind Franklin fecero in seguito una verifica analizzando le con i raggi X. Sebbene anche gli acidi nuclei contengano tutti e quattro i nucleotidi, il loro ordine preciso è quello che costituisce la caratteristica di ogni specifico acido nucleico ed è trasmesso quasi automaticamente quando una nuova ma identica molecola di acido nucleico viene deposta sull'elica della vecchia. Il panorama di questa struttura molecolare degli acidi nucleici contiene tutto quanto è necessario, in linea di principio, per permettere che un nastro, il quale porti e trasmetta informazioni, possa essere costruito nella parte più interna di ogni cellula o particella virale 

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Gentile MARIA SERRONE, siamo lieti di invitarLa a partecipare a LetsApp 2017, il percorso didattico gratuito, pluridisciplinare e certificato che Samsung Electronics Italia, in collaborazione con ilMIUR, dedica a tutte le classi della Scuola Secondaria di Secondo Grado.
LetsApp è un corso di 10 lezioni per imparare a progettare, programmare e promuovere una nuova App.
Al termine del percorso verrà rilasciato un attestato che potrà valere come Credito Formativo e/o come testimonianza di ore dedicate all'Alternanza Scuola Lavoro. Non perda tempo! Faccia iscrivere subito i suoi studenti al portale gratuito www.letsapp.it (l’iscrizione è personale, per ricevere l’attestato nominativo è necessario che lo studente si iscriva e completi il percorso).In questo modo potranno accedere alle 10 lezioni individuali online e alle 4 schede didattiche a supporto dell’iniziativa.
Inoltre, alle prime 20 scuole della sua Regione che effettueranno la candidatura, sarà riservata l’opportunità di ricevere gratuitamente in tre/quattro classi la visita di un espertodel Samsung LetsApp Team che supporterà gli studenti, illustrando passo per passo le tappe del percorso. L’incontro avrà la durata di circa un'ora per classe.Per candidarsi a ricevere la visita dell’esperto a scuola compili il form che trova al seguente link www.scuola.net/letsapp/ Al termine del percorso LetsApp, i gruppi che avranno proposto le idee più innovative e più utili a soddisfare un bisogno della scuola o della comunità potranno concorrere e aspirare ai numerosi premi che Samsung mette in palio.Il Primo gruppo classificato avrà la possibilità di visitare il Campus Samsung in Corea e ricevere ulteriori 5 giorni di formazione confrontandosi con studenti provenienti da tutto il mondo.
I gruppi secondi, terzi, quarti e quinti classificati, riceveranno rispettivamente le seguenti dotazioni tecnologiche Samsung: Secondo classificato: 5 Gear VR + 5 S7; Terzo classificato: 5 Gear S3; Quarto classificato: 5 Tab A; Quinto classificato: 5 Gear Fit
tutti i gruppi vincitori, saranno invitati a partecipare all’evento nazionale dihackathon che verrà organizzato dal MIUR e da Samsung Italia. Le scuole dei 5 gruppi riceveranno un attestato di eccellenza per la qualità dei progetti ideati e realizzati dai propri studenti.I docenti tutor dei gruppi vincitori riceveranno i medesimi premi disposti per gli studenti ed uno specifico attestato per il supporto fornito al lavoro svolto. Per qualunque informazione o chiarimento non esiti a rivolgersi al numero verde 800.28.66.69, attivo dal lunedì al venerdì dalle ore 09.00 alle ore 13.00 e dalle ore 14.00 alle ore 18.00, o all’indirizzo email infoletsapp@lafabbrica.net La aspettiamo su www.letsapp.it!

Cordialmente,Centro Coordinamento LetsApp