• sangue

• saliva

• células epiteliais

Entretanto Manuel Pavão, surgiu para reinvidicar a herança, afirmando ser meio-irmão.

• O pó adere às substâncias oleosas deixadas pelas cristas dérmicas dos dedos.

• Após a revelação, a impressão foi recolhida com fita própria e analisada com lupa.

• Foram comparadas com as impressões digitais dos três suspeitos.
  

As impressões digitais são únicas e inalteráveis ao longo da vida, servindo como prova individualizada de contacto com objetos.

• O teste Phadebas® contém microesferas de amido ligadas a um corante azul.

• Na presença de α-amilase, o amido é digerido e o corante é libertado, formando uma mancha azul.

• Um resultado positivo permite prosseguir com a extração de DNA.

• Estes testes detetam a presença de sangue, mas não confirmam se é humano.

• Bluestar®: Luminol reage com hemoglobina e emite luz azul (quimililuminescência).

• Kastle-Meyer: Reação química com peróxido de hidrogénio causa coloração rosa, confirmando a presença de sangue.

• Testes positivos justificam a realização de testes de confirmação.

• Utilização de soros Anti-A, Anti-B e Anti-Rh.

• Observação de aglutinamento permite identificar se o sangue é A, B, AB ou O e se é Rh+ ou Rh-.

• Permite excluir ou associar amostras aos suspeitos ou à vitima.

• Impede a degradação do DNA em altas temperaturas.

• Remove iões metálicos que interferem na PCR.

• É eficaz, seguro e não utiliza reagentes tóxicos.

• A260/A280 deve ser ~1.8 para o DNA ser considerado "puro"

• Se < 1.8 pode indicar contaminação com proteínas ou fenóis.

• Se > 1.8 pode indicar contaminação por RNA.

• Quantificação importante para definir o volume a utilizar na PCR.

• 2 impressões digitais detetadas na faca: uma no cabo e uma na lâmina

• O DNA mitocondrial é mais resistente à degradação, ideal para vestígios antigos.

• Herdado exclusivamente pela mãe, permitindo traçar a linhagem materna.

• Dois pares de primers foram utilizados para amplificar diferentes segmentos da HV1.

• Resultado: Positivo (formação de cor rosa)

• Fragmentos mais pequenos deslocam-se mais rapidamente.

• A presença de bandas confirma a amplificação bem-sucedida.

• Resultado: Positivo (quimiluminescência azul visível)

• Permite comparar os perfis mitocondriais da vítima com os dos supeitos.

• No caso do suspeito 3 (meio-irmão), verifica-se compatibilidade mitocondrial, uma vez que este tipo de DNA herdado exclusivamente da mãe. Se forem filhos do mesmo pai, os perfis mitocondriais devem ser diferentes, ajudando a confirmar ou excluir o parantesco alegado.

Suspeito 1 (mulher – gangue do ouro) - O⁻

Suspeito 2 (homem do gangue do ouro) - AB⁺

Suspeito 3 (meio-irmão) - O⁻

Evidência 2 (Calças) - O⁻

Evidência 3 (Faca) - A⁺

• A faca tem sangue A⁺, que coincide com o grupo sanguíneo da vítima

• As calças têm sangue O⁻, que não corresponde à vítima, mas é compatível com dois suspeitos, o 1 (mulher – gangue do ouro) e o 3 (meio-irmão)

A tipagem sanguínea sozinha não permite distingui-los.

• 147 µg/mL - ponta de cigarro

• 177 µg/mL - faca

• 2,91 µg/mL - calças

Todos com pureza inferior a 1.80, pelo que pode considerar-se que o DNA se encontrava contaminado com proteínas, não sendo indicado para o desenvolvimento do PCR.

Embora o DNA mitocondrial tenha sido amplificado com sucesso, não foi possível concluir a comparação genética. Por isso, não foi possível confirmar o grau de parentesco entre a vítima e o suspeito 3, nem determinar a quem pertencia o sangue encontrado nas calças.

Este caso mostrou a importância de combinar diferentes tipos de evidência para reconstruir um crime, mesmo quando há limitações técnicas.

No entanto, decidiu-se utilizar 55 °C como temperatura de annealing, já que o ideal é que este valor seja superior a 50 °C para garantir maior especificidade na ligação dos primers. Contudo, durante a programação do termociclador, a temperatura já estava definida para 50 °C.