Prion by Brenda Henriques

Proteína prion

brendahenriques_bh — 2019-02-02 22:38:16 UTC

PRP 27-30: Núcleo resistente à protease do PrPSC, a isoforma anormal de proteínas priônicas (PRIONS). O PrP 27-30 é produzido por proteólise limitada do terminal N de PrPSc.

Objetivo

brendahenriques_bh — 2019-02-03 00:24:36 UTC

Para examinar a possibilidade de que a formação de PrPSc envolva a conversão de a-hélices em prPC em p-folhas, nós desenvolvemos
um protocolo de purificação de PrPC utilizando procedimentos não desnaturantes. Conforme relatado aqui, determinamos o
estruturas de ambos, prPC e PrPSC. Nossos resultados sugerem que
o evento fundamental na formação do PrPSC, bem como
A propagação da infectividade do pri é a conversão de um-hélices
em PrPC em p-folhas.

CD

brendahenriques_bh — 2019-02-04 16:55:35 UTC

O dicroísmo circular (CD) é um método muito útil para estudar rapidamente o estado dobrado de uma proteína purificada [9], avaliar o efeito de mutações na conformação ou estabilidade da proteína [10], estudar interações de proteínas [11] ou acompanhar mudanças conformacionais. durante processos de desdobramento e agregação de proteínas.
O CD resulta da luz polarizada circularmente direita e esquerda, diferencialmente absorvida, de moléculas quirais em solução [13]. Para estudar a estrutura da proteína, a CD é informativa essencialmente na região de UV distante (180–260 nm) para análise de estrutura secundária e na região próxima de UV (250–350 nm) para informações sobre estrutura terciária [12]. A ligação peptídica é o cromóforo mais importante responsável pela absorção na região do ultravioleta, devido às suas transições eletrônicas n → π * (≈190 nm) e π → π * (≈222 nm).
Dependendo se o backbone de proteína é
dobradas como uma α-hélice, folha β ou como uma bobina aleatória, isso resultará em uma sobreposição distinta dos orbitais moleculares envolvidos e seus níveis de energia, resultando assim em assinaturas espectroscópicas bastante distintas para os diferentes tipos de estrutura secundária. Portanto, uma impressão digital espectral de CD característica é obtida para os diferentes tipos de estrutura secundária regular [13]. Tipicamente, proteínas dobradas com alto grau de ordem apresentam grandes sinais distintivos de CD, enquanto, em contraste, proteínas desdobradas apresentam sinais baixos ou nulos. Assim, mudanças na intensidade da DC podem ser usadas para acompanhar as alterações conformacionais da proteína durante a desnaturação térmica ou química ou na interação com um ligante.
Os processos amilï¿½des tambï¿½ podem ser monitorizados por esta tï¿½nica devido ï¿½ conversï¿½ do estado nativo da proteï¿½a numa estrutura rica em folha? Monitorizada pela formaï¿½o de uma banda negativa centrada a 220 nm, caracterï¿½tica de fibrilha amilï¿½de. A absorção na região do ultravioleta (UV) surge principalmente de cadeias laterais de resíduos aromáticos e pontes dissulfeto, sendo, portanto, uma ferramenta valiosa para obter informações sobre as mudanças nas interações terciárias. Mudanças conformacionais em proteínas contendo cofatores absorventes em ambientes quirais, como heam, flavinas ou piridoxal-5'-fosfato, também podem ser investigadas via mudanças no sinal CD dos co-fatores [13]. Em resumo, o CD é um método altamente potente para monitorar o estado dobrado de uma proteína em solução que requer baixas quantidades de materiais (<50 µg de proteína para caracterização de CD UV) e é, portanto, o método espectroscópico de escolha para caracterizar a estrutura proteica e conformacional. alterar. Um número de excel
revisões emprestadas em CD de proteína estão disponíveis

FTIR

brendahenriques_bh — 2019-02-04 16:55:48 UTC

A espectroscopia de infravermelho com transformada de Fourier (FTIR) é um método espectroscópico muito poderoso para a análise estrutural de biomoléculas que detecta as bandas de absorção associadas com frequências vibracionais de ligação molecular [15]. As proteínas têm uma banda vibracional proeminente e sensível na região de 1700-1600 cm − 1 (a banda amida I), que resulta das vibrações de estiramento C = O da ligação peptídica, que respondem pela maior parte da absorção vibracional. Lamentavelmente, a banda de proteína amida I se sobrepõe à forte banda de absorção de flexão de água, que mascara o sinal da proteína.
Esta limitação pode, no entanto, ser ultrapassada através da realização de medições em tampões contendo D2O e / ou concentrações elevadas de proteína. As proteínas também exibem picos centrados em 1550 cm-1 (a banda da amida II), que correspondem às vibrações de flexão de NH e alongamento de CN e a 1400-1200 cm-1 (a banda de amida III) resultante de - alongamento CN CN e vibrações de flexão NH. A banda amida I de proteínas é sensível ao tipo de estrutura secundária. Em geral, as conformações dobradas exibem uma banda amida estruturada I que pode ser deconvoluída em múltiplas bandas associadas a diferentes tipos de estruturas secundárias.

Proteína

brendahenriques_bh — 2019-02-04 16:56:00 UTC