• A MSP facilitou a detecção da hipermetilação do promotor em ilhas CpG em linhagens celulares e amostras clínicas;

  
  

• A metilação de DNA é um mecanismo epigenético crucial na regulação da expressão gênica.

  
  

• A metilação aberrante está frequentemente associada a processos patológicos, como o câncer;

  
  

• A capacidade da MSP de diferenciar citosina metilada de não metilada depende:

  
  

• Do tratamento do DNA com bissulfito de sódio, que retém as marcas de metilação das citosinas + amplificação específica desse DNA modificado usando conjuntos de primers complementares apenas aos alelos anteriormente metilados ou não metilados.

(A) Esta amostra é composta apenas de células normais (Branco). Essas células normais geralmente têm promotores não metilados (U) para o gene supressor de tumor.

(B) Ambos os alelos das células normais são não metilados, enquanto ambos os alelos das células tumorais são metilados.

(C) Apenas um alelo das células tumorais é metilado.

(D) Esta amostra contém principalmente células tumorais e mostrará um forte sinal de metilação.

• O DNA genômico é tratado com bissulfito de sódio, que converte citosinas não metiladas em uracil.

• As citosinas metiladas permanecem inalteradas.

2. Design de primers específicos

• São desenhados dois pares de primers:

• Primers para DNA metilado (M);

• Primers para DNA não metilado (U);

3. Amplificação por PCR

• O DNA tratado é amplificado em duas reações separadas, usando os primers específicos para DNA metilado e não metilado.

• O produto amplificado é analisado por eletroforese em gel de agarose ou por técnicas quantitativas, como PCR em tempo real.

4. Análise de Resultados

• A presença ou ausência de produtos amplificados indica se a região alvo está metilada ou não:

• Produto na reação com primers “M” ou primers “U”.

• Erros na conversão com bissulfito podem comprometer a detecção.

Informação Limitada:

• O MSP fornece apenas informações qualitativas;

• Criação do qMSP - quantitativo;

Necessidade de Design Preciso:

• Depende de primers ideais para garantir especificidade.