A prova da catalase dando positiva indica que a bactéria é do grupo Staphylococcus. Dessa forma, seguimos para o teste da coagulase para identificação das espécies.

Para comprovar que é o S. aureus, faremos a semeadura da amostra em ágar sal manitol.

Logo, seguiremos a rota de testes dos estreptococcos gama hemolíticos.

(esquecemos de tirar foto)

A prova da catalase dando positiva indica que a bactéria é do grupo Staphylococcus. Dessa forma, seguimos para o teste da coagulase para identificação das espécies.

O objetivo desse teste é diferenciar as espécies de Enterococcus dos Estreptococcus do grupo D não enterocócitos.

Em seguida, a suspensão bacteriana foi inoculada na superfície da placa de ágar Mueller Hinton com o auxílio de um swab.

O resultado é dado medindo o tamanho do halo formado:

Igual ou menor que 15 mm: resistente.

Igual ou maior que 16 mm: sensível.

Dessa forma, a bactéria presente é do gênero staphylococcus (cresceu em ágar (MSA)).

Porém, com o resultado da coagulase negativa, é necessário realizar o teste de sensibilidade à novobiocina.

Conclusão: com esse resultado e com os resultados anteriores, presença de staphylococcus aureus.

Observa-se um meio de cultura preto (produto de hidrolise da esculina), evidenciando a "positividade" para o teste de bile esculina, pois sua cor natural é marrom claro.

Porém o resultado positivo da bile esculina pode ser referente a uma bactéria tanto do grupo dos Estreptococcus e Enterococcus do grupo D quanto Estreptococcus do grupo D não Enterocócitos.

Logo, para diferencia-los precisa fazer o teste do caldo de NaCl 6,5%.

Quando o resultado é negativo a placa fica com uma coloração rosa/avermelhada.

(esquecemos de tirar foto)

O resultado corrobora com o achado nos testes anteriores.

Observa-se predominância de cocos gram-positivos em cachos característicos do grupo Staphylococcus.

(esquecemos de tirar foto)

A coagulase negativa indica que não é o S. aureus, a cultura em ágar sal manitol vai garantir maior certeza á esse achado.

OBS: o teste em ágar não deu certo (como o previsto). Para resolver o problema, fizemos também em ágar sangue, que permitiu a visualização e a medição do halo.

O teste de Tolerância ao Sal 6,5% NaCl é positivo quando o meio líquido em que foi semeada a amostra muda de límpido para turvo, evidenciando o crescimento bacteriano. A positividade desse teste indica que a bactéria pertence ao grupo Estreptococcus do grupo D não Enterococcus.

Seletivo: Os corantes eosina e azul de metileno inibem o crescimento de bactérias Gram-positivas, favorecendo o crescimento de bactérias Gram-negativas, como os bacilos entéricos. 

Diferencial: meio contém lactose e sacarose como fontes de carbono. 

Colônias coloridas: As bactérias que fermentam a lactose (como a E. coli) produzem ácidos e o pH do meio diminui, resultando na coloração azul-escura ou esverdeada brilhante ou rosa. 

Colônias incolores: As bactérias que não fermentam a lactose produzem colônias incolores.

Seletivo: Os corantes eosina e azul de metileno inibem o crescimento de bactérias Gram-positivas, favorecendo o crescimento de bactérias Gram-negativas, como os bacilos entéricos. 

Diferencial: meio contém lactose e sacarose como fontes de carbono. 

Colônias coloridas: As bactérias que fermentam a lactose (como a E. coli) produzem ácidos e o pH do meio diminui, resultando na coloração azul-escura ou esverdeada brilhante. 

Colônias incolores: As bactérias que não fermentam a lactose produzem colônias incolores.

Seletivo: Os corantes eosina e azul de metileno inibem o crescimento de bactérias Gram-positivas, favorecendo o crescimento de bactérias Gram-negativas, como os bacilos entéricos. 

Diferencial: meio contém lactose e sacarose como fontes de carbono. 

Colônias coloridas: As bactérias que fermentam a lactose (como a E. coli) produzem ácidos e o pH do meio diminui, resultando na coloração azul-escura ou esverdeada brilhante. 

Colônias incolores: As bactérias que não fermentam a lactose produzem colônias incolores. 

Seletividade: Os sais biliares presentes no meio inibem o crescimento da maioria das bactérias Gram-positivas, favorecendo o desenvolvimento de bactérias Gram-negativas. 

Diferenciação: O ágar HE contém lactose, sacarose e salicina como carboidratos fermentáveis. 

Fermentadores de carboidratos: Produzem ácidos, que mudam o pH e fazem as colônias aparecerem amarelas/laranjas. 

Não fermentadores de carboidratos: Manteêm o pH original e as colônias aparecem verdes ou transparentes. 

Produção de Sulfeto de Hidrogênio (H₂S): O citrato de ferro(III) e o tiossulfato de sódio reagem para produzir H₂S. 

Bactérias que produzem H₂S formam colônias com centros pretos ou completamente pretas. 

Cor da colônia: As bactérias que não fermentam a lactose, como Salmonella e Shigella, produzem colônias incolores. As que produzem lactose ficam vermelhas.

Produção de H2S: A inclusão de citrato férrico e tiossulfato de sódio permite identificar as bactérias que produzem sulfeto de hidrogênio (H₂S). Estas produzem colônias com um centro preto

A cor vermelha/rosa do ágar indica que a bactéria fermenta lactose.

A coloração rosada das colônias indica que a bactéria é fermentadora de lactose.

Resultado esse que corrobora com as placas de ágar mcConkey e CLED.

A coloração amarelada/alaranjada da placa indica que a bactéria não fermenta lactose.

Resultado esse que corrobora com a placa de mcConkey.

O meio contém citrato de sódio (carbono), sais de amônio (nitrogênio) e o indicador de pH azul de bromotimol (verde).

O resultado positivo surge quando a bactéria utiliza o citrato, produzindo subprodutos alcalinos que aumentam o pH. O meio muda de cor de verde para azul.

Caso a bactéria não utilize o citrato, não há crescimento e o meio permanece verde.

É um teste essencial para diferenciar bacilos Gram-negativos, como na distinção entre E. coli (negativa) e Klebsiella/Enterobacter (positivas).

O resultado positivo é indicado por mudanças de cor ou crescimento diferenciado: cor amarela (fermentação de açúcares), cor negra (produção de H2S, cor azul (urease positiva), turvação difusa (motilidade), ou cor púrpura na base (Lisina positiva). O resultado negativo é, geralmente, permanencia cor original do meio (azul-esverdeada) e o crescimento restrito à linha de inoculação.

Ele é utilizado para a triagem rápida de colônias isoladas, embora não forneça a identificação final e precisa da espécie bacteriana.

É muito usado para a triagem rápida de colônias puras de bacilos Gram-negativos.

Possibilita a identificação de motilidade onde quado positivo o crescimento é difuso (turvação) e negativo o crescimento é restrito à picada.

Possibilita a identificação da descarboxilação da lisina: positivo a cor é púrpura (lisina descarboxilada) e quando negativo a cor é amarela (lisina não utilizada).

Possibilita a identificação da produção de indol onde adiciona-se o Reagente de Kovacs após a incubação. O resultado positivo é indicado pela formação de um anel de cor rosa ou vermelha na superfície, indicando a produção de indol a partir do triptofano e o resultado negativo é a cor inalterada do reativo ,amarela.

O meio virgem possui uma cor púrpura-lilás (devido ao indicador de pH púrpura de bromocresol).

Para motilidade o resultado positivo é indicado pelo crescimento difuso do microrganismo, que se espalha para fora da linha de picada, turvando o meio. O resultado negativo é apontado quando o crescimento é restrito apenas à linha de inoculação, deixando o meio transparente.

Na descarboxilação de ornitinas a bactéria primeiro fermenta a dextrose do meio, que o acidifica e o torna amarelo . Se a bactéria produzir a enzima ornitina descarboxilase, ela quebra o aminoácido ornitina, liberando uma amina (putrescina) que alcaliniza o meio, fazendo-o retornar à cor púrpura/lilás ,positivo. Se não houver descarboxilação, a cor amarela persiste.

Para o texte de indol adiciona-se o Reativo de Kovacs após a incubação. O resultado positivo é indicado pela formação de um anel de cor rosa ou vermelha na superfície, indicando a produção de indol a partir do triptofano e o resultado negativo é a cor inalterada do reativo ,amarela.

É empregado na diferenciação e identificação de microrganismos, principalmente a ordem Enterobacterales e, notavelmente, a bactéria Listeria monocytogenes. O teste é crucial porque a capacidade de fermentar a ramnose varia entre espécies, auxiliando na distinção dentro de grupos bacterianos.

A fermentação da ramnose pela bactéria produz ácidos orgânicos, o que abaixa o pH do meio. A mudança de pH é detectada pelo indicador, resultando na viragem da cor púrpura para amarela.

Quando o microrganismo é incapaz de fermentar a ramnose, e o meio mantém sua cor original púrpura.

O meio contém glicose, peptona e um tampão fosfato. O caldo inoculado é incubado e, posteriormente, dividido em dois tubos para a realização dos testes do Vermelho de Metila (VM) e Voges-Proskauer (VP).

Teste do Vermelho de Metila (VM): Este teste avalia a capacidade do microrganismo de produzir e manter altos níveis de ácidos estáveis (como ácido láctico, acético e fórmico) após a fermentação da glicose. Adiciona-se o indicador Vermelho de Metila.

VM Positivo: O meio fica com coloração vermelha 

VM Negativo: O meio fica amarelo ou acastanhado 

Teste de Voges-Proskauer (VP): Este teste detecta a presença de acetoína (acetilmetilcarbinol), um produto intermediário da via de fermentação da glicose conhecida como via butilenoglicólica. Adicionam-se os reagentes de Barritt (alfa-naftol e hidróxido de potássio).

VP Positivo: Ocorre o desenvolvimento de uma coloração vermelha-rósea (ou vinho) na superfície do meio, indicando a presença de acetoína.

VP Negativo: A coloração permanece amarela ou inalterada/acastanhada.

Geralmente, há uma relação inversa entre os resultados de VM e VP: organismos VM Positivos tendem a ser VP Negativos, e vice-versa.

É usado na identificação e diferenciação de bactérias da família Enterobacteriaceae, testando a capacidade do microrganismo de produzir a enzima fenilalanina desaminase. Esta enzima é característica de gêneros como Proteus, Providencia e Morganella, e sua detecção ajuda a diferenciar estes grupos de outras Enterobactérias.

O resultado positivo ocorre se a bactéria produzir a enzima fenilalanina desaminase, que remove o grupo amina da fenilalanina, gerando ácido fenilpirúvico. Este ácido reage com o cloreto férrico, resultando na formação de uma coloração verde musgo brilhante.

Se a bactéria não produzir a enzima, o meio não sofre alteração de cor após a adição do cloreto férrico. O meio permanece com a cor amarelada/translúcida que é a cor do reagente.

Fermentação da Glicose: Uma reação positiva para a fermentação da glicose é observada pela mudança da cor do meio para amarelo na base do tubo. A amostra A1 obteve resultado positivo (+), o que confirma sua capacidade de fermentar a glicose.

Produção de Gás a partir da Glicose: A presença de bolhas ou rachaduras no meio de cultura indica a produção de gás. A amostra A1 mostrou um resultado positivo (+), demonstrando que a fermentação da glicose foi acompanhada pela produção de gás.

Produção de H₂S (Sulfeto de Hidrogênio): Um resultado positivo é caracterizado pelo enegrecimento do meio na base do tubo. A amostra A1 teve um resultado negativo (-), o que significa que não houve produção de H₂S.

Hidrólise de Ureia: Para este teste, a mudança de cor para azul na base do tubo sinalizaria um resultado positivo. O resultado negativo (-) da amostra A1 indica que a bactéria não possui a enzima urease.

A turvação do meio, que se espalha para além da linha de inoculação, indica motilidade bacteriana. O resultado positivo (+) confirma que a bactéria é móvel.

A formação de um anel vermelho no ápice do tubo após a adição de um reativo (Kovacs) é esperada para um resultado positivo. A amostra A1 apresentou resultado positivo (+) para a produção de indol.

Indol: O resultado é positivo quando aparece um "anel" de coloração vermelha ou rosada na parte superior do tubo. A amostra 2 não apresentou essa característica. Portanto, resultado negativo, indicando que a bactéria não tem a capacidade de produzir indol.

A amostra 2 apresentou o desenvolvimento da coloração verde garrafa no ápice do tubo. Sendo assim, o resultado é positivo, indicando que a bactéria possui a enzima triptofano desaminase.

Fermentação da Glicose:

A fermentação de glicose na amostra 2 encontra-se mascarada. No entanto, houve crescimento, uma vez que a cor do meio se alterou. Caso não tivesse crescimento, o meio ficaria da cor inalterada, ou seja, na cor verde. Portanto, o resultado positivo, confirmando a capacidade da bactéria de fermentar a glicose.

Produção de gás:

A amostra 2 formou-se bolhas no meio de cultura, indicando a produção de gás pela bactéria. Portanto, resultado é positivo.

Produção de H₂S:

A amostra 2 apresentou enegrecimento do meio na base do tubo. Portanto, resultado positivo, indicando que houve produção de H₂S.

Hidrólise de ureia:

A amostra 2 apresentou na base do tubo uma coloração mais escura, indicando que a bactéria possui a enzima urease. Portanto, resultado positivo.

Motilidade: A turvação do meio da amostra 2, além da linha de inoculação, indica que a bactéria é móvel. Portanto, resultado positivo.

Na amostra 3 não apresentou uma coloração de um verde garrafa, neste caso resultado negativo.

Fermentação de Glicose:

A fermentação de glicose na amostra 3 encontra-se mascarada. No entanto, houve crescimento, uma vez que a cor do meio se alterou. Caso não tivesse crescimento, o meio ficaria da cor inalterada, ou seja, na cor verde. Portanto, o resultado positivo, confirmando a capacidade da bactéria de fermentar a glicose.

Produção de gás:

A amostra 3 formou-se bolhas no meio de cultura (com uma coloração até amarelada) indicando a produção de gás pela bactéria. Portanto, resultado é positivo.

Produção de H₂S:

A amostra 3 apresentou enegrecimento do meio na base do tubo. Portanto, resultado positivo, indicando que houve produção de H₂S.

Hidrólise de ureia:

A amostra 3 não apresentou uma mudança de coloração no fundo do tubo, indicando que a bactéria não possui a enzima urease. Portanto, resultado negativo.

Indol: O resultado é positivo quando aparece um "anel" de coloração vermelha ou rosada na parte superior do tubo. A amostra 3 não apresentou essa característica. Portanto, resultado negativo, indicando que a bactéria não tem a capacidade de produzir indol.

Coloração da amostra 3 (púrpura). Portanto, resultado positivo, indicando que a bactéria possui a enzima ornitina descarboxilase.

Motilidade: A turvação do meio da amostra 3, além da linha de inoculação, indica que a bactéria é móvel. Portanto, resultado positivo.