Protocolo para la obtención de ADN genómico by Briana Betancourt https://padlet.com/brianabetancourt3/c3fj7bxe4nbmk6bh en-us 2023-12-05 04:02:25 UTC 2023-12-05 04:22:03 UTC hello@padlet.com 1. Colocar la muestra en un mortero que haya sido precongelado previamente a -80°C, brianabetancourt3 https://padlet.com/brianabetancourt3/c3fj7bxe4nbmk6bh/wish/2813882852 2023-12-05 04:03:38 UTC https://padlet.com/brianabetancourt3/c3fj7bxe4nbmk6bh/wish/2813882852 2. Antes de que descongele la muestra, adicionar sobre ella 10 volúmenes del buffer de lisis previamente precalentado. Homogenizar un par de veces antes de que descongele completamente. brianabetancourt3 https://padlet.com/brianabetancourt3/c3fj7bxe4nbmk6bh/wish/2813884713


]]> 2023-12-05 04:06:25 UTC https://padlet.com/brianabetancourt3/c3fj7bxe4nbmk6bh/wish/2813884713 3.- Homogenizar y transferir a un tubo nuevo, incubar a 90oC por 10 minutos, un par de veces durante el proceso. Adicionar 1/10 de volumen de SDS al 10%, homogenizar e incubar por 5 minutos más. Transcurrido ese tiempo se permite que la muestra se enfríe atemperatura ambiente brianabetancourt3 https://padlet.com/brianabetancourt3/c3fj7bxe4nbmk6bh/wish/2813885278


]]> 2023-12-05 04:07:24 UTC https://padlet.com/brianabetancourt3/c3fj7bxe4nbmk6bh/wish/2813885278 4. Adicionar 0.5 volúmenes de la mezcla previamente enfriada de fenol-cloroformoalcohol isoamílico (25:24:1 v/v), homogenizar y centrifugar a 14,000 rpm por 15 minutos a 4˚ C brianabetancourt3 https://padlet.com/brianabetancourt3/c3fj7bxe4nbmk6bh/wish/2813890674 2023-12-05 04:15:41 UTC https://padlet.com/brianabetancourt3/c3fj7bxe4nbmk6bh/wish/2813890674 5. Transferir el sobrenadante a un tubo nuevo y agregar 0.1 volúmenes de acetato de sodio 3M (pH 5.2), 0.5 volúmenes de fenol-cloroformo (5:1 v/v), homogenizar y centrifugara 14,000 rpm por 10 minutos a temperatura ambiente. brianabetancourt3 https://padlet.com/brianabetancourt3/c3fj7bxe4nbmk6bh/wish/2813891113


]]> 2023-12-05 04:16:20 UTC https://padlet.com/brianabetancourt3/c3fj7bxe4nbmk6bh/wish/2813891113 6. Transferir el sobrenadante a un tubo nuevo y adicionar 0.65 volúmenes de la mezcla de Etanol-Metanol-Ácido acético glacial (9:3:1 v/v). Agitar y centrifugar a 13,000 rpm por 5 minutos a temperatura ambiente. Para mejorar el rendimiento se recomienda antes decentrifugar incubar por una hora a -20oC. brianabetancourt3 https://padlet.com/brianabetancourt3/c3fj7bxe4nbmk6bh/wish/2813891967


]]> 2023-12-05 04:17:32 UTC https://padlet.com/brianabetancourt3/c3fj7bxe4nbmk6bh/wish/2813891967 7.- Tirar el sobrenadante. Lavar con 1 mililitro de la mezcla de Etanol-Agua-MetanolAcetato de sodio 3M, pH 5.2 (30:9:5:1). Agitar y centrifugar a 13,000 rpm por 5 minutos. Descartar el sobrenadante. Si persisten algunas sales se puede dar un lavado adicional con 1 mililitro de etanol al 70%. brianabetancourt3 https://padlet.com/brianabetancourt3/c3fj7bxe4nbmk6bh/wish/2813892275 2023-12-05 04:17:55 UTC https://padlet.com/brianabetancourt3/c3fj7bxe4nbmk6bh/wish/2813892275 8.- Secar la pastilla y disolver en agua grado biología molecular (de 20 a 100 µL dependiendo del tamaño de la pastilla formada) brianabetancourt3 https://padlet.com/brianabetancourt3/c3fj7bxe4nbmk6bh/wish/2813892655


]]> 2023-12-05 04:18:26 UTC https://padlet.com/brianabetancourt3/c3fj7bxe4nbmk6bh/wish/2813892655