Unidad 2. Estructura y normas de laboratorio de cultivos celulares. by Clarissa Lizette Alcalá Romo

2.1 Áreas y su distribución.

clssalcrom — 2023-01-29 04:08:36 UTC

El funcionamiento exitoso de un laboratorio de cultivo depende de varios factores:

Diseño y ubicación, equipamiento adecuado, experiencia y sentido común del personal encargado y entrenamiento del personal. La suma de estos factores apunta a lograr la máxima seguridad para las personas y condiciones apropiadas para los cultivos.

Plano de laboratorio de cultivo celular:

Área de equipos de protección. En esta área se encuentran los equipos de seguridad esenciales personales para los laboratorios de cultivo celular: Lentes protectores, guantes. regaderas, lavadores, extintores, botiquín de primeros auxilios, batas, etc.
Sala de archivos. Todos los documentos que se produzcan o utilicen en el laboratorio deben incluirse en el sistema de control.
Cuarto de cultivos. Dentro del cuarto de cultivo pueden entre-relacionarse 3 áreas: área fría (que debe estar restringida sólo al cultivo celular y debe ubicarse en un lugar aislado, separado del laboratorio de microbiología u otros y del bioterio), el área de almacenaje (que debe estar situada entre la zona de preparación y la zona de cultivo y debe ser de fácil acceso) y el área de lavado/esterilización (deben llevarse a cabo en un área alejada de la zona de trabajo con los cultivos).
Sala quirúrgica: Área en donde se realizarán los procedimientos de disección de órganos o tejidos del animal de estudio, comúnmente se encuentras enseguida de los bioterios.
Bioterio: Se divide en dos cuartos entre-relacionados: el bioterio (es el lugar destinado a la cría y control de los animales de laboratorio utilizados como reactivos biológicos en protocolos experimentales) y el almacén del bioterio (lugar donde se resguardan los materiales de nutrición y conservación de los animales del bioterio).
Cuarto de preparación de cultivo. Este cuarto contiene cámaras de flujo laminar, incubadoras, estufas, mesas de trabajo, cajones con reactivos y materiales a utilizar (por lo general el área es despejada, fluida y continua).

alondraramirez3626 — 2023-01-29 16:36:09 UTC

Hay dos tipos de laboratorios de cultivos celulares, según la patogenicidad de estos:

Laboratorio de cultivo de tejidos sin patógenos: es una sala aislada con suministro de aire climatizado y filtrado (HEPA). Esta entrada de aire produce un aumento de presión atmosférica en el interior del laboratorio (típicamente entre 15-20 Pa) que impide la entrada de contaminantes del exterior (sala limpia).
Laboratorio de cultivo con patógenos: Para evitar la salida accidental de los patógenos se filtra el aire que sale a través de un filtro HEPA y se genera un déficit de presión en el interior (mínimo -15 Pa). Si se determina que es necesario que el aire que entra sea también filtrado se deberán ajustar los caudales de aire para que el balance neto permite mantener una presión negativa en el interior.

Un laboratorio de cultivo celular de contención biológica nivel 2 tiene:

Sala NCB2+: Dispone de equipamiento completo: cabina de bioseguridad, incubador compartimentalizado, congelador de -80ºC para el almacenaje de agentes biológicos, ultracentrífuga para la purificación de los mismos, JULI LG04 para la monitorización de infecciones con GFP, además del pequeño equipamiento necesario para el trabajo con cultivos celulares.
Sala de Líneas Celulares: Contiene 6 cabinas de flujo laminar, 4 incubadores, 2 contadores de células y el material necesario para trabajar en biología celular.
Sala de Cultivos Primarios: Cuenta con 2 cabinas, un incubador, un contador de células y pequeño equipamiento necesario para el trabajo de cultivos.
Sala de Hipoxia: Sala de nivel de contención 2 con filtración HEPA, paredes de PVC en escocia y control de acceso propio. Equipada con una Estación de hipoxia modular y cerrada, con una cámara de trabajo donde se manipulan las muestras, 4 incubadores internos con sensores independientes, una cámara auxiliar con equipamiento y un módulo de compuertas con ciclos de descontaminación para la entrada y salida de material.
Los cultivos permanecen en todo momento en un ambiente controlado y constante al evitar el contacto con la atmósfera exterior que se produce al abrir y cerrar las puertas en los incubadores convencionales.

2.3 Normas básicas

giselaesqueda2996 — 2023-01-29 23:29:36 UTC

Son un conjunto de medidas preventivas destinadas a proteger la salud de los que allí se desempeñan frente a los riesgos propios derivados de la actividad, para evitar accidentes y contaminaciones tanto dentro de su ámbito de trabajo, como hacia el exterior.

Entre las normas básicas encontramos:

Solo puede entrar el personal autorizado.
Lavarse las manos frecuentemente.
Hacer uso de bata, guantes, lentes protectores y una vestimenta adecuada.
Siempre trabajar con material estéril para evitar contaminaciones.
Inactivar cualquier material con hipoclorito después de su uso.
Descontaminar mesas de trabajo antes y después.

2.2 Distribución de equipo

claudiagutierrez0456 — 2023-01-31 13:11:09 UTC

Campana de flujo laminar. Es fundamental mantener el entorno de trabajo del cultivo celular ultralimpio y sin contaminación biológica o de partículas. Por lo tanto, una campana de flujo laminar es un equipo esencial cuando se trabaja con cultivos celulares. El aire filtrado que fluye hacia abajo funciona como una cortina invisible que reduce la posibilidad de que los contaminantes del aire ingresen al espacio de trabajo. Si se requiere seguridad para el usuario, se deben considerar gabinetes de bioseguridad Clase I, II o III.

Baño termostatizado. Un baño de agua ajustado a 37 C se encuentra comúnmente en los laboratorios de cultivo celular para precalentar el medio antes de usarlo y descongelar células y reactivos congelados.

Incubadora. Los cultivos celulares requieren un entorno estrictamente controlado en el que crecer. Las incubadoras permiten las condiciones de crecimiento correctas controlando la temperatura, el grado de humedad y los niveles de CO2.

Congelador y nevera. Los medios de cultivo celular y muchos reactivos deben almacenarse entre 2 y 8 °C, pero la mayoría de los reactivos para cultivos celulares deben almacenarse entre -5 °C y -20 °C. Por lo tanto, es muy importante contar con una nevera y un congelador en el laboratorio de cultivo celular.

Centrifuga. Se necesita una centrífuga capaz de generar una fuerza centrífuga de al menos 200 x g (x gravedad) para sedimentar las células suspendidas durante varios protocolos de cultivo.

Microscopio invertido. Un microscopio invertido es una herramienta esencial para una célula laboratorio de cultivo. La visualización de las células es necesaria para controlar la morfología celular (forma, estructura, forma y tamaño de las células), contar las células e identificarlas. contaminación. Se recomiendan objetivos de 4x 10, 20x y 40x, así como contraste de fase para una mejor visualización.

Botellas y placas de cultivo. Hay disponible material de plástico apto para cultivo (tratado para la fijación de células adherentes) en una variedad de tamaños y configuraciones, como matraces, platos y multipocillo platos. Dependiendo de la aplicación, se utilizarían diferentes recipientes. Para ejemplo, las existencias de células se cultivarán en matraces y los experimentos se realizarán en platos

Referencias bibliográficas:

clssalcrom — 2023-01-31 14:02:24 UTC

Servicio central de soporte de la investigación experimental. Laboratorio de cultivos celulares. Sitio web: https://www.uv.es/uvweb/servicio-central-soporte-investigacion-experimental/es/equipamientos-instalaciones/todos-equipamientos-instalaciones/laboratorio-cultivos-celulares-1285887466621/OCTRecurs.html?id=1286215165082
Servicio central de soporte de la investigación experimental. Sala de hipoxia/hiperoxia. Sitio web: https://www.uv.es/uvweb/servicio-central-soporte-investigacion-experimental/es/equipamientos-instalaciones/todos-equipamientos-instalaciones/sala-hipoxia/hiperoxia-1285887466621/OCTRecurs.html?id=1286215664928#:~:text=Sala%20ubicada%20dentro%20del%20laboratorio,el%20mantenimiento%20de%20los%20cultivos.
Universidad autónoma de Barcelona. Laboratorio de cultivo celular. Recuperado de: https://www.uab.cat/web/control-del-riesgo-biologico/instalaciones-de-biocontencion/laboratorio-cultivos-celulares-1345767063748.html
Stoduco. Laboratorio de cultivos. Recuperado de : https://www.studocu.com/es/document/universidad-pablo-de-olavide/cultivos-celulares/tema-5-laboratorio-de-cultivos-celulares/6537690
Beltrán Vargas., N., & González de la Rosa., C. (2016). Técnicas de cultivos celulares. https://www.cua.uam.mx/pdfs/conoce/libroselec/15Tecnicas_de_Cultivos_Celulares_e_Ingenieria_de_Tejidos.pdf

clssalcrom — 2023-01-31 16:36:06 UTC

Unidad 2: Estructura y normas de laboratorio de cultivos celulares.

Optativa 1. Cultivo celular animal.

Integrantes:

Alcalá Romo Clarissa Lizette
Ramirez Lopez Alondra
Gutierrez Tapia Claudia Nayeli
Esqueda Padilla Gisela

2023-A