PCR de Punto final by https://padlet.com/yoselinsandoval1/ahgix5f4dhqz23s0 La PCR amplifica el DNA de manera exponencial, duplicando el número de moléculas diana con cada ciclo de amplificación. Cuando se desarrolló por primera vez, los científicos razonaron que el número de ciclos y la cantidad de producto final de la PCR podrían usarse para calcular la cantidad inicial de material genético en comparación con un estándar conocido. Para abordar la necesidad de una cuantificación sólida, se desarrolló la técnica de PCR en tiempo real. Actualmente, una aplicación principal de la PCR de punto final es amplificar DNA específico para secuenciar, clonar y usar en distintas técnicas de biología molecular. en-us 2022-02-19 01:51:51 UTC 2022-02-20 02:59:21 UTC hello@padlet.com https://padlet-uploads.storage.googleapis.com/1589419522/b6103e692c061a2ed1a3a60d2c021787/rt_pcr_lab.png yoselinsandoval1 https://padlet.com/yoselinsandoval1/ahgix5f4dhqz23s0/wish/2056887793 2022-02-20 00:01:51 UTC https://padlet.com/yoselinsandoval1/ahgix5f4dhqz23s0/wish/2056887793 Usos y aplicaciones yoselinsandoval1 https://padlet.com/yoselinsandoval1/ahgix5f4dhqz23s0/wish/2056887851 Todo investigador que trabaje con moléculas de ADN conoce esta técnica. Y es que la PCR es una técnica imprescindible en múltiples ámbitos. Por ejemplo, en investigación bioquímica y médica, la PCR permite preparar fragmentos de ADN para su clonación en plásmidos bacterianos o virus para utilizarlos como vectores, paso imprescindible en el desarrollo de terapias génicas. Además, en Medicina, esta técnica es utilizada para diagnosticar enfermedades hereditarias. ¡Incluso se utiliza para identificar patógenos!

Por si fuera poco, la PCR es una técnica importantísima en las pruebas de paternidad y en los análisis forenses de la policía científica.

]]> 2022-02-20 00:02:04 UTC https://padlet.com/yoselinsandoval1/ahgix5f4dhqz23s0/wish/2056887851 yoselinsandoval1 https://padlet.com/yoselinsandoval1/ahgix5f4dhqz23s0/wish/2056905306 Material 
  • Micropipetas 
  • Puntas para PCR 
  • Autoclave
  • Tubos para PCR 
  • Gradilla para tubos de PCR 
  • Termociclador 

Reactivos 
  • Buffer de Reacción Taq 10X 
  • dNTPs
  • Primers
  • ADN estándar
  • Agua libre de Nucleasas 
  • Taq Polimerasa

Procedimiento
NOTA: Antes de comensar es recomendable preparar la reacción sobre hielo y precalentar el termociclador a 95 ° C. Todos los materiales deben estar esteriles (autoclave) y limpios.

  • Prepare los tubos que habrá de utilizar para su PCR en una gradilla. NOTA: Preferentemente NO etiquete la tapa del tubo ya que se puede borrar, mejora etiquete en los costados. 
  • Realice los cálculos de para preparar las reacciones necesarias. 
  • Coloque en cada tubo los primers que ha de usar como el de la secuencia problema y control de carga ej.: B-actina, GAPDH, betaína, etc. 
  • Agregue cada componente de la tabla 1 en orden descendente en un tubo y marque el tubo como MasterMix. NOTA: coloque la polimerasa al final. Saque del congelador la enzima y regresela inmediatamente después. 
  • Coloque una cantidad proporcional en cada tubo y pongola en el termociclador (figura 1) ya programado con las condiciones de la PCR (ver tablas abajo). 
  • Al terminar su PCR analice su producto en un gel de agarosa.


]]> 2022-02-20 00:55:10 UTC https://padlet.com/yoselinsandoval1/ahgix5f4dhqz23s0/wish/2056905306 Sensibilidad de la PCR : se ha demostrado que el ensayo PCRMPB70 incrustado en tejido fresco tiene buena sensibilidad y especificidad; por lo tanto, tiene el potencial de usarse como una prueba rápida adicional para el diagnóstico de la tuberculosis bovina. La rapidez del diagnóstico es importante en al menos dos situaciones: cuando los productores están a la espera de los resultados para enviar las canales retenidas al matadero o cuando el productor y el veterinario oficial deben decidir aplicar una medida de cuarentena definitiva o liberar una precaución de cuarentena, o aplicar pruebas adicionales en bandadas sospechosas; todos los casos, donde PCRMPB70 es una buena alternativa. kgutierrezv1 https://padlet.com/yoselinsandoval1/ahgix5f4dhqz23s0/wish/2056939185 2022-02-20 02:23:07 UTC https://padlet.com/yoselinsandoval1/ahgix5f4dhqz23s0/wish/2056939185 La especifidad de la PCR: la especificidad de la prueba de PCR que utiliza la secuencia IS6110 como blanco fueron bajas. Esto pudo ser debido al tamaño del fragmento de la PCR inicial amplificado por la PCR anidada. Para MPB70, el producto de la PCR fue de 372 pb, mientras que para la IS6110 fue de 583 pb. Aunque ambos productos son muy grandes para diagnóstico por PCR, el producto de la IS6110 es mayor por aproximadamente 200 pb; para la PCR anidada, la amplificación inicial de los productos generalmente ocurren previo a la expansión exponencial. De este modo, si hay un efecto grande de dilución debido a la gran cantidad de ADN del animal en el ambiente, es posible que los ciclos iniciales de la reacción de la PCR sean muy ineficientes, llevando a resultados falsos negativos. En este caso, se requiere trabajo de laboratorio adicional para aumentar la efectividad del método. kgutierrezv1 https://padlet.com/yoselinsandoval1/ahgix5f4dhqz23s0/wish/2056939686 2022-02-20 02:24:23 UTC https://padlet.com/yoselinsandoval1/ahgix5f4dhqz23s0/wish/2056939686 Eficiencia de PCR: La tasa de fallo de las pruebas PCR para detectar coronavirus es de unos 20 casos. Sin embargo, estos errores, que se consideran falsos negativos, dependen de una serie de factores, entre ellos, cómo se recogió la muestra y, sobre todo, el tiempo transcurrido desde la exposición inicial al coronavirus hasta que se tomó la PCR. kgutierrezv1 https://padlet.com/yoselinsandoval1/ahgix5f4dhqz23s0/wish/2056941702 2022-02-20 02:28:36 UTC https://padlet.com/yoselinsandoval1/ahgix5f4dhqz23s0/wish/2056941702 lasalgadod https://padlet.com/yoselinsandoval1/ahgix5f4dhqz23s0/wish/2056947741 Ventajas de la PCR 
  • Tiene una alta especificidad 
  • Posee una alta sensibilidad 
  • Se requiere poca muestra 
  • Amplio rango dinámico 
  • Se Monitorea todo el procedimiento 
  • Transcripción reversa
]]> 2022-02-20 02:43:54 UTC https://padlet.com/yoselinsandoval1/ahgix5f4dhqz23s0/wish/2056947741 lasalgadod https://padlet.com/yoselinsandoval1/ahgix5f4dhqz23s0/wish/2056949262 Desventajas de la PCR 
  •  Se puede reproducir solamente partes del genoma en donde se conoce por lo menos una mínima secuencia de 20 – 40 pb.
  •   Se necesitan “primers” específicos que sean complementarios al fragmento que se desea sintetizar.
  •  La polimerización puede tener errores al sintetizar el ADN .
  • Puede contaminarse con otro ADN (puede ser del mismo investigador o de cualquier otro).



]]> 2022-02-20 02:48:03 UTC https://padlet.com/yoselinsandoval1/ahgix5f4dhqz23s0/wish/2056949262 lasalgadod https://padlet.com/yoselinsandoval1/ahgix5f4dhqz23s0/wish/2056952406 Fidelidad de la prueba de PCR
 Diversos estudios han demostrado que la especificidad, el rendimiento y la fidelidad de la PCR se encuentra directamente influenciada por los diversos componentes que integran la técnica: 
1. La mezcla de reacción 
2. Región de reciclaje 
3. ADN polimerasa
 Resulta necesario planificar en cada caso una metodología en la que pueda existir un equilibrio entre estos parámetros, ya que desafortunadamente al ajustar algunas condiciones de la reacción para lograr la mayor especificidad no siempre es compatible con un alto rendimiento, y tratar de optimizar la fidelidad pudiera reducir la eficiencia. ]]> 2022-02-20 02:56:35 UTC https://padlet.com/yoselinsandoval1/ahgix5f4dhqz23s0/wish/2056952406