Técnicas de ADN by Juana Paola Gutiérrez Rodríguez https://padlet.com/JuanaPGR/af8zmxl5v1wb4lly en-us 2021-06-01 21:44:31 UTC 2021-11-18 17:19:32 UTC hello@padlet.com Northern blot JuanaPGR https://padlet.com/JuanaPGR/af8zmxl5v1wb4lly/wish/1577706497 A diferencia del Southern blot, no es necesaria la digestión con enzimas de restricción y, aunque el ARN es una cadena única, su estructura secundaria compleja hace necesario el uso de técnicas de desnaturalización, generalmente con formaldehído y formamida. Así, una vez extraído el ARN se aplica electroforesis en geles de 1% de agarosaformaldehído. El ARN puede ser teñido con colorantes como el naranja de acridina. Posteriormente es transferido a membranas de nylon especiales. Estos "blots" son posteriormente hibridizados con sondas de ADN complementario marcado. ]]> 2021-06-01 21:44:47 UTC https://padlet.com/JuanaPGR/af8zmxl5v1wb4lly/wish/1577706497 Southern blot JuanaPGR https://padlet.com/JuanaPGR/af8zmxl5v1wb4lly/wish/1900095734 La denominación de esta técnica proviene del nombre del autor que la introdujo en 197520. La técnica consiste en tratar el ADN con enzimas de restricción, tras lo cual se separan los fragmentos mediante electroforesis en un gel de agarosa quedando separados según el tamaño de los fragmentos de ADN. Después de la electroforesis el gel se trata para desnaturalizar el ADN que se transfiere a un filtro de nitrocelulosa o nylon mediante un sistema de vacío, sobre el que se fija con luz ultravioleta y por último se expone la membrana a sondas complementarias de la cadena que deseamos buscar marcadas radioactivamente o con digoxigenina-biotina, las sondas quedarán fijadas al fragmento de ADN del que son complementarias lo que nos confirma que el ADN de la banda correspondiente es efectivamente el que buscamos.]]> 2021-11-18 17:08:23 UTC https://padlet.com/JuanaPGR/af8zmxl5v1wb4lly/wish/1900095734 Western Blot JuanaPGR https://padlet.com/JuanaPGR/af8zmxl5v1wb4lly/wish/1900110052 Es una técnica que permite reconocer anticuerpos por antígenos que se absorben en una membrana. Estos antígenos son previamente separados en geles de poliacrilamida-dodecil sulfato de sodio y luego transferidos a papel de nitrocelulosa. La unión antígeno-anticuerpo se detecta mediante la adición de un anticuerpo que reconoce la fracción constante de la inmunoglobulina humana, la cual está acoplada a una enzima. La unión se revela con la adición de un sustrato-cromogénico soluble el cual se precipita en el sitio en donde se encuentra el complejo antígeno-anticuerpo evidenciándose en forma de bandas coloreadas. ]]> 2021-11-18 17:14:21 UTC https://padlet.com/JuanaPGR/af8zmxl5v1wb4lly/wish/1900110052 Extracción de ácidos nucleicos JuanaPGR https://padlet.com/JuanaPGR/af8zmxl5v1wb4lly/wish/1900112641 Consiste en una lisis celular para liberar las moléculas en una fase acuosa que es separada de los restos celulares por centrifugación. Las proteínas son removidas de la fase acuosa con solventes orgánicas. El ácido nucleico, que permanece en la fase acuosa, precipita con etanol y posteriormente es purificado y suspendido en el eluyente adecuado. El material genético resultante se podrá utilizar para hacer el diagnóstico mediante la técnica molecular adecuada.

]]> 2021-11-18 17:15:25 UTC https://padlet.com/JuanaPGR/af8zmxl5v1wb4lly/wish/1900112641 Bibliografía JuanaPGR https://padlet.com/JuanaPGR/af8zmxl5v1wb4lly/wish/1900114257 BIOTED. (s.f.). Obtenido de SOUTHERN BLOT: https://bioted.es/protocolos/SOUTHERN-BLOT-ANALISIS.pdf

Davelois, K. (2016). Rendimiento diagnóstico del Western Blot para detectar simultáneamente anticuerpos en pacientes con cisticercosis, hidatidosis y fascioliasis humana. Revista Peruana de Medicina Experimental y Salud Publica.

Fernández, P. L. (s.f.). Técnicas de hibridación. Barcelona.
]]> 2021-11-18 17:16:04 UTC https://padlet.com/JuanaPGR/af8zmxl5v1wb4lly/wish/1900114257