Podem-se obter os seguintes resultados:

• Aglutinação no poço A indica presença do antigénio A (A+)

• Aglutinação no poço B indica presença do antigénio B (B+)

• Aglutinação no poço Rh indica fator Rh positivo (Rh+)

• Ausência de aglutinação indica ausência do respetivo antigénio (A-, B-, Rh-).

• Vítima: A+

• Suspeito 1: O-

• Suspeito 2: AB+

• Suspeito 3: O-

  
  

• Evidência 2 (calças de ganga): O-

• Evidência 3 (faca): A+

Conclusões: estes resultados indicam que o sangue presente nas calças pode ser do suspeito 1 (sexo feminino) ou do suspeito 3 (meio-irmão). Já o sangue presente na faca, é da vítima.

Foi utilizado um pincel com pó revelador, que foi aplicado com movimentos suaves e circulares sobre a superfície suspeita, no caso, a faca. As impressões digitais latentes foram progressivamente reveladas através deste método.

Após a revelação, foi colocada uma fita de levantamento sobre a impressão digital e aplicada uma leve pressão. A fita foi então retirada e fixada num cartão de recolha apropriado.

Com o auxílio de uma lupa, a impressão foi observada e foram identificadas as suas características dactiloscópicas, como o tipo de padrão e pontos de minutiae. Por fim, a impressão recolhida foi comparada com as impressões digitais da vítima e dos suspeitos, com o objetivo de estabelecer uma possível correspondência.

Neste procedimento, realizou-se a extração de DNA das amostras 1 a 3 utilizando o método Chelex.

Este método baseia-se na utilização de uma resina quelante, composta por esferas de Chelex a 5%, que tem a capacidade de se ligar a iões metálicos como o ferro (Fe²⁺) e o magnésio (Mg²⁺). Estes iões, caso estivessem presentes, poderiam catalisar reações que degradariam o DNA, especialmente durante a exposição a altas temperaturas.

Etapas principais do método:

1. Preparação da suspensão de Chelex 5%, onde as amostras biológicas são adicionadas.

2. Lise celular por fervura, o que rompe as membranas celulares e nucleares, libertando o DNA.

3. Durante a fervura, o Chelex remove iões metálicos, protegendo o DNA da degradação térmica.

4. O DNA obtido encontra-se em cadeia simples (desnaturado), adequado para técnicas subsequentes como a PCR (Reação em Cadeia da Polimerase).

Após a comparação da impressão digital obtida com impressões previamente recolhidas da vítima e dos suspeitos, suspeitamos que havia uma impressão digital da vítima, que poderia ser de defesa, e outra impressão que possivelmente pertencia ao meio-irmão da vítima. Tudo indica que esta seria uma evidência do ataque.

Quanto à pureza, obtivemos um valor do rácio 260/280 de 1,44, o que indica possível contaminação com proteínas.

Quanto à pureza, obtivemos um valor do rácio 260/280 de 1,66, o que indica possível contaminação com proteínas.

Quanto à pureza, obtivemos um valor do rácio 260/280 de 0,918.

Estes resultados são maus. Indicam pouca quantidade de DNA na amostra e contaminação, possivelmente por causa do tipo de material.

• Marcador Molecular

• Amostra 1 (Evidência #1 - ponta de cigarro)

• Amostra 2 (Evidência #2 - calça de ganga)

• Amostra 3 (Evidência #3 - faca)

• Controlo Negativo

  
  

Ao analisar o resultado do gel de agarose, não podemos retirar nenhuma conclusão pois, imediatamente, é possível observar que o controlo negativo está contaminado - amplificação de fragmento semelhante ao amplificado na coluna da Amostra 1.

Podemos também verificar que há amplificação de um fragmento semelhante ao amplificado no controlo negativo e amostra 1, e também de outro fragmento maior.

Conclusão: devido à clara contaminação das amostras usadas, nenhuma conclusão pode ser retirada deste processo. O passo seguinte seria refazer o protocolo, tendo em conta os possíveis erros cometidos.

• Contaminação cruzada, resultante, por exemplo, do manuseio incorreto de tubos ou reagentes ou da reutilização de pontas ou pipetas contaminadas;

• Contaminação de reagentes;

• Erros de pipetagem, como pontas encostadas a tubos ou superfícies contaminadas;

• Problemas com os primers: primers degradados, formação de dímeros ou condições mal otimizadas.

O tipo sanguíneo é determinado pela presença ou ausência de determinados antigénios (A, B e Rh) nos glóbulos vermelhos.

Pelo sistema ABO, existem quatro tipos principais: A, B, AB (ambos os antigénios presentes) e O (nenhum antigénio presente). Além disso, existe o fator Rh (positivo ou negativo).

A identificação do tipo sanguíneo é feita com anticorpos específicos (anti-A, anti-B e anti-Rh), que vão reagir com os respetivos antigénios, levando à aglutinação dos glóbulos vermelhos.

Na saliva humana, existe uma enzima, a α-amilase, que catalisa a hidrólise de ligações glicosídicas existentes, por exemplo, no amido.

O papel Phabedas (papel azul-claro, na imagem) tem complexos amido-corantes que são libertados na presença de α-amilase. Estes complexos estão imobilizados no papel e quando a enzima é libertada, os locais que contactam com esta, adquirem uma coloração azul-escura.

Conclusão: há saliva na beata

A fenolftaleína reage com o peróxido de hidrogénio, na presença de hemoglobina, e ao oxidar, adquire uma coloração cor-de-rosa.

O ferro e o peróxido de hidrogénio oxidam a fenoftalina (forma incolor) em fenolftaleína (forma cor-de-rosa).

Preparação do gel de agarose a 2%: dissolver 0,6 g de agarose em 30 ml de tampão TAE 1x e aquecer até completa dissolução. Corrigir o volume com TAE 1x após arrefecimento e adicionar 1,2 µl de GelRed, misturando bem. Verter na moldeira nivelada e deixar solidificar durante mais ou menos 20 minutos.

Eletroforese: carregar as amostras nos respetivos poços do gel, juntamente com 6 µl de ladder de 100 bp. Realizar a eletroforese em tampão TAE 1x a 130 V durante 20 minutos. Visualizar os resultados no transluminador.

Conclusões: mais uma vez, presumivelmente estamos na presença de sangue, tanto nas calças como na faca. Não sabemos se é realmente sangue humano ou não.

O luminol é um composto quimioluminescente que brilha luz azul. É ativado com um agente oxidante, como o peróxido de hidrogénio, na presença de um catalisador, como o ferro presente na hemoglobina. Quando o luminol reage com o peróxido de hidrogénio, a energia criada pela reação é libertada na forma de um fotão de luz. O catalisador presente faz com que a reação seja muito rápida.

Este teste é mais caro que o teste Kastle-Meyer mas também é mais sensível.

Conclusões: presumivelmente estamos na presença de sangue, tanto nas calças como na faca, mas não sabemos se é realmente sangue humano ou não.

Além disso, através desta análise, é possível avaliar a pureza do DNA. Esta é medida através do rácio das absorbâncias: A260/A280. Os possíveis resultados são:

• 1.8 - DNA "puro"

• < 1.8 - pode indicar contaminação com proteínas ou fenóis

• > 1.8 - pode indicar contaminação por RNA.