Kelompok 6

Kelompok 6

Organoleptis:

Bentuk: cairan

Warna: kuning pecat

Aroma: Warm-peppery, midly earthy, musty-woody odour

Viskositas: kental

Senyawa terpinen-4-ol memiliki potensi sebagai anti-mikroba dan anti-kanker

Curcumae longae rhizoma (rimpang)

kelompok 6

Zat kurkuminoid ada di dalam kunyit yang berguna untuk melapisi dinding mukosa lambung yang terluka dan menurunkan kadar asam lambung 

Komposisi produk terdiri dari Curcuma Domestica Rhizoma Extract (kunyit) dan Tamarindi Indica Pulpa Extract (asam jawa)

Metode yang paling efektif untuk mendeteksi adulterasi ekstrak buah bilberry adalah HPTLC fingerprint. Metode ini dipilih karena fingerprint tersebut mungkin mewakili integritas kimia obat-obatan herbal dan produknya dengan tepat sehingga digunakan untuk otentikasi dan identifikasi tanaman. HPTLC fingerprintt merupakan kromatografi menggunakan plat silica gel dan fase gerak yang terdiri dari asam format, air, dan butanol. Pada metode ini digunakan pewarna amaranth pada konsentrasi 0,25%. Selain itu juga digunakan antosianin sebagai marker solution. Sebelum dilakukan visualisasi hasil pita, perlu dilakukan derivatisasi menggunakan reagen anisaldehid sehingga terlihat komposisi gula pada ekstrak buah bilberry.

2. Pasca produksi

   Parameter Spesifik

   a. Kandungan air

   Metode : Termogravimetri

   Prinsip metode : Prinsip kerja dari metode thermogravimetric (TGA) adalah pemanasan suatu bahan pada tempat khusus dengan suhu dan waktu tertentu, hingga mengalami penurunan pada massanya.

   
   

   b. Residu Logam Berat

   Metode : SSA (Spektrometer Serapan Atom)-Nyala atau Inductively Coupled Plasma Optical emission Spectrophotometry

   Prinsip metode : Mengetahui apakah ada residu logam berat atau tidak. Jika ada, apakah sudah sesuai dengan standar minimum yang diperbolehkan atau belum

   
   

   c. Residu solvent

   Metode : HPLC

   Prinsip metode : pemisahan residu dan pelarut yang digunakan dengan menggunakan fase gerak cair yang dialirkan melalui kolom yang merupakan fase diam berdasarkan kepolarannya. 

   
   

   c. Viskositas

   Metode : Viskometer

   Prinsip metode : Mengetahui viskositas produk apakah sudah sesuai dengan standar atau belum

   
   

   d. Patogen

   Metode : Angka Lempeng Total (ALT) dan Angka Kapang Khamir (AKK) 

   Prinsip metode : Pengukuran Angka Lempeng Total (ALT) dengan Planting Technique Metode ini merupakan metode penghitungan jumlah sel tampak (visible) dan didasarkan pada asumsi bahwa bakteri hidup akan tumbuh, membelah, dan memproduksi satu koloni tunggal. Prinsip uji AKK yaitu pertumbuhan kapang/khamir setelah cuplikan diinokulasikan pada media yang sesuai dan diinkubasi pada suhu 20-25℃ dan diamati mulai hari ketiga sampai hari kelima.

   
   

3. Parameter non-Spesifik

   a. Organoleptik

   Metode : Makroskopi

   Prinsip metode : Dilakukan pengamatan dengan mata telanjang terkait ciri-ciri (morfologi) dari bahan

   
   

   b. Kandungan senyawa

   Metode : Kromatografi atau Spektrofotometri

   Prinsip metode : Metode kromatografi pemisahan berdasarkan sifat kepolaran senyawa yang dianalisis dan metode spektrofotometri berdasarkan intensitas penyerapan sinar oleh senyawa yang dianalisis.

1. Identifikasi pewarna anorganik 

Metode identifikasi pewarna anorganik menggunakan metode LIBS(Laser Induced Breakdown Spectroscopy). Prinsip yang digunakan adalah pulsa laser berenergi tinggi ke permukaan pada sampel padat, cair, maupun gas. Dimana hasil mikroplasma mengandung senyawa atau atom yang tereksitasi dari sampelnya. Keadaan tersebut mengemisi panjang gelombang emisi yang unik kemudian ditangkap oleh spektrometer. 

2. Identifikasi pewarna organik 

Pada identifikasi ini metode yang digunakan adalah HPTLC (High Performance Thin Liquid Chromatography). Prinsipnya adalah pemisahan yang dilakukan berdasarkan prinsip adsorpsi seperti TLC konvensional. Fase diam yang digunakan adalah nitroselulosa. Penggunaan fase diam tersebut dimaksudkan supaya lebih mudah menganalisis dan memisahkan senyawa dengan konsentrasi yang lebih tinggi.

3. Identifikasi Kandungan kurkumin

Identifikasi kandungan kukumin menggunakan metode NMR (Nuclear Magnetic Resonance)

Prinsip  : Bahwa atom penyusun kurkumin mempunyai interaksi radiofrekuensi yang  spesifik pada keadaan induksi medan magnet yang kuat, dimana radio frekuensi ditangkap oleh detektor.

4. Verifikasi spesies 

Metode yang digunakan untuk verifikasi spesies adalah HPTLC (High Performance Thin Liquid Chromatography). Prinsip yang digunakan adalah dengan mengidentifikasi dan membedakan antara satu spesies senyawa organik satu sama lain melalui prinsip pemisahan berdasarkan adsorpsi senyawa pada fase diam dimana fase gerak mengalir karena aksi kapiler. Senyawa yang dianalisis akan bergerak berdasarkan afinitasnya terhadap fase diam. Apabila afinitas terhadap fase diam rendah, maka akan terelusi lebih cepat dan memiliki jarak elusi yang paling jauh. Fase diam yang digunakan berupa nitroselulosa. 

5. Deteksi kurkumin sintesis

Metode yang digunakan dalam mendeteksi kurkumin sintesis adalah MS (Mass Spectroscopy). Prinsip yang digunakan adalah dengan Menentukan jumlah karbon isotop yang berbeda-beda yang ada dalam suatu sampel. Dimana isotop C14 ada dalam sampel kurkumin yang alami. Sedangkan kurkumin hasil sintesis tidak ada isotop C14.

1. HPLC (High Performance Liquid Chromatography):

Prinsip dasar metode analisis HPLC (High Performance Liquid Chromatography) adalah memisahkan analit berdasarkan tingkat kepolarannya dengan menggunakan dua fase yaitu fase diam (kolom) dan fase gerak (larutan tertentu). HPLC menggunakan tekanan tinggi untuk mendorong fase gerak. HPLC dapat efisien digunakan sebagai metode analisis kuantitatif untuk menganalisis flavonoid. Tujuan analisis HPLC adalah untuk kontrol kualitas, identitas, dan keamanan. Pelarut yang umumnya digunakan adalah campuran MeOH-air atau EtOH-air. Analisis dilakukan dengan menggunakan fase gerak gradien linier 30%-90% metanol/air yang diasamkan dengan asam fosfat, fase stasioner menggunakan kolom silika C18, dan deteksi puncak flavonoid dilakukan dengan UV pada panjang gelombang 280 nm. Kuantifikasi total flavonoid berdasarkan luas puncak senyawa referensi kerja, krisin, yang awalnya dikalibrasi terhadap standar baicalin. Nilai ditentukan berdasarkan berat kering dengan kandungan air sampel kering ditentukan melalui pengeringan vakum.

Beberapa kelebihan dan kekurangan menggunakan metode HPLC: 

a. Metode ini memberikan pemisahan yang baik tetapi volume injeksi yang tinggi kemungkinan menjadi alasan tailing 

b. Ekstraksi sampel mudah dan cepat, dioptimalkan untuk flavon-glukuronida 

c. Beberapa diterpen mungkin tidak terlalu larut dalam aqueous-metanol 60% 

d. Ukuran sampel yang kecil (100mg) dan sonikasi (1 jam) membutuhkan waktu yang lama dibandingkan dengan metode yang lain 

e. Tidak ada data parameter kesesuaian sistem dan metode belum divalidasi

2. Direct MS (Mass Spectrometry):

Metode MS merupakan metode standar yang umum digunakan di laboratorium untuk mendeteksi sejumlah kecil bahan tambahan, baik secara kualitatif maupun kuantitatif. Metode MS memberikan jawaban langsung "ya" atau "tidak" tanpa campur tangan analis. Meskipun analisis menggunakan MS memerlukan sonikasi selama 1 jam dan volume sampel kecil, namun keunggulannya terletak pada kemampuannya mendeteksi adulterant dengan cepat. Meskipun demikian, kelemahan analisis MS termasuk waktu sonikasi yang lama dan volume sampel kecil yang mengharuskan ekstraksi pada suhu tinggi, yang dapat meningkatkan risiko degradasi.

3. NMR (Nuclear Magnetic Resonance):

Metode NMR memiliki kelebihan, seperti waktu analisis singkat, penggunaan pelarut yang terbatas, keandalan, kemampuan kualitatif dan kuantitatif, serta kemampuan untuk membedakan S. lateriflora dengan jelas dari sampel Teucrium. Prinsip metode NMR melibatkan perbandingan antara spektrum sampel dengan spektrum referensi, yang memungkinkan identifikasi apakah ada perbedaan atau tidak.

4. MS-Fingerprinting

5. NIR-HSI

6. Makroskopik 

7. Mikroskopik

   Dari beberapa metode di atas, metode yang paling direkomendasikan adalah metode HPLC karena cepat, mudah, dan memberikan pemisahan yang baik

   
   

• Logam Berat: perbandingan warna larutan sampel dan standar setelah penambahan basa tioasetamida-gliserin TS

• Artikel Asal Botani: untuk menganalisis residu pestisida pada sediaan

• Tes Enumerasi Mikroba: menggunakan metode filtrasi membran atau salah satu metode platecount

• Tes Mikrobiologi Terhadap Ketidakhadiran Mikroorganisme Tertentu: menggunakan metode MRM (Multiple Reaction Monitoring) based- MS

2. Tes Spesifik

• Fraksi Tidak Larut Asam: perhitungan persentase tidak larut asam setelah penambahan asam hidroklorat

• Penentuan Kadar Air: menggunakan metode titrasi langsung. Penentuan titrimetri air berdasarkan reaksi kuantitatif air dengan larutan anhidrat sulfur dioksida dan iodium dengan adanya buffer yang bereaksi dengan ion hidrogen

• Sisa Api/ Abu Sulfat: prosedur untuk mengukur jumlah residu zat yang tidak mudah menguap dari sampel ketika sampel dinyalakan dengan adanya asam sulfat

• Ekstrak Botani: metode untuk menentukan ada tidaknya residu solven menggunakan kromatografi. 

3. Kontrol Kualitas Kemurnian

• Kromatografi lapis tipis (TLC/HPTLC): Metode ini dapat memberikan sidik jari antosianin dalam ekstrak bilberry dan membantu mengidentifikasi keberadaan bahan pemalsuan atau kontaminan. 

• Uji spektrofotometri: Metode ini dapat mengukur kandungan total antosianin dalam ekstrak bilberry dengan menggunakan teknik diferensial pH. Kandungan antosianin dinyatakan sebagai setara sianidin-3-glukosida. 

• Identifikasi mikroskopis dan makroskopis: Metode ini dapat memverifikasi keaslian dan kemurnian bahan baku buah bilberry dengan mengamati ciri morfologinya. Halaman web saat ini menyediakan fitur mikroskopis dan makroskopis buah bilberry dan membandingkannya dengan spesies Vaccinium lainnya.

Pemalsuan yang sering terjadi pada skullcap yaitu penggunaan spesies lain dari genus Scutellaria seperti Scutellaria versicolor Nuttall dan Scutellaria canescens Nuttall untuk menggantikan Scutellaria lateriflora. Selain itu, dapat juga dilakukan pemalsuan dengan cara mensubstitusikan dengan spesies lain yaitu spesies germander (Teucrium) yang mengandung furano neo-clerodane diterpenes hepatotoksik. Pemalsuan dengan spesies lain ini dilaporkan pada tahun 1990 (Gafner, 2015)

Berdasarkan publikasi penelitian, daftar spesies yang diketahui sering dipalsukan sebagai Tea Tree Oil antara lain Cinnamomum camphora (L.), Eucalyptus globulus, Melaleuca cajuputi, Melaleuca leucadendra, Melaleuca quinquenervia (Cav.), Pinus massoniana, Pinus pinaster, dan Pinus roxburghi. Bahan yang dipalsukan sebagai TTO, tidak selalu berasal dari minyak atsiri spesies-spesies yang disebutkan, tetapi juga bahan yang diperkaya dengan terpen yang diperoleh dari aliran limbah rektifikasi minyak atsiri camphor, eucalyptus, dan pinus. Selain itu, bahan yang diperoleh melalui distilasi fraksional dari spesies yang tidak tercantum dalam daftar atau senyawa murni yang disintesis kimia, seperti terpinen-4-ol dan α-terpineol sering digunakan untuk mengoplos TTO.

Spektroskopi Inframerah (IR), Termasuk Mid-Infrared (MIR) dan Near Infrared (NIR) Spectroscopy: Spektroskopi ini digunakan untuk menguji sampel TTO dengan membandingkan hasilnya dengan metode kromatografi gas (GC). Spektroskopi inframerah ini mengukur konsentrasi komponen-komponen utama minyak esensial​​.

Kromatografi Gas (Gas Chromatography, GC): Metode GC telah menjadi pilihan utama untuk menganalisis TTO selama beberapa dekade. Persiapan sampel melibatkan dilusi analit dalam aseton, etanol, atau heksana. Metode yang divalidasi dan diterbitkan oleh Farmakope Eropa atau ISO 4730:2017 sering digunakan untuk analisis rutin TTO. GC membantu dalam mengidentifikasi komposisi dan potensi adulterasi minyak TTO​​. Kromatografi gas telah menjadi metode pilihan untuk menganalisis TTO selama beberapa dekade. Persiapan sampel terdiri dari pengenceran analit dalam aseton, etanol, atau heksana. Pemalsuan TTO dapat terjadi dengan penambahan terpinen-4-ol, sebuah molekul yang dapat dengan mudah disintesis. Dalam evaluasi kualitas TTO, rasio enansiomer terpinen-4-ol memberikan indikasi yang jelas mengenai keasliannya. Rasio enansiomer terpenoid kiral yang telah ditentukan sebelumnya berfungsi sebagai tanda yang berguna untuk identifikasi minyak atsiri.

(May Farikha Rahmawati, Mita Mawarni, Araya Pangastuti)

21/477999/FA/13082Natasya Putri Meylidya

Penilaian organoleptik biasa digunakan untuk membedakan Tea Tree Oil (TTO) asli dari minyak atsiri lainnya dan dari berbagai kemotipe TTO. Dalam monografi, aroma minyak tea tree digambarkan sebagai miristat. Akan tetapi, beberapa cara pemalsuan yang samar mungkin terlewatkan melalui deteksi ini.

2. HPTLC

Metode HPTLC dapat digunakan suatu industri dalam melakukan kontrol kualitas pada minyak atsiri yang terdapat pada Tea Tree Oil (TTO).  Fase gerak yang digunakan berupa senyawa yang memiliki tingkat polaritas lebih tinggi dan menggunakan senyawa pembanding  terpinen-4-ol, 1,8-cineole, dan α-terpineol untuk memisahkan minyak atsiri yang terkandung dalam Tea Tree Oil (TTO).

3. Infrared

Identifikasi komponen utama essential oil (1,8-cineole, terpinolene, terpinen-4-ol, γ-terpinene, α-terpinene, α-terpineol, and limonene) dapat menggunakan metode Partial Least Square (PLS) regresi yang berdasarkan data dari kuantitatif gas chromatography (GC). Regresi PLS dari MIR vs GC-MS akan menghasilkan rentang koefisien determinasi antara 0,76-0,97 yang memiliki nilai lebih besar dibandingkan NIR vs GC-MS sehingga dapat dikatakan bahwa metode MIR dapat lebih baik dalam memprediksi kuantitatif TTO.

Akan didapatkan nilai akurasi setelah melakukan optimasi sampel, yaitu sebesar 87% (153 sampel dari 175) dianalisis dengan metode FTIR dan akurasi sebesar 98% (3 sampel tidak teridentifikasi dari 125 sampel yang dianalisis dengan metode NIR. Dengan pernyataan tersebut maka dapat disimpulkan bahwa metode NIR dapat mendeteksi adulterasi yang lebih akurat dibandingkan FTIR

4. Gas Chromatography
Dalam melakukan analisis Tea Tree Oil (TTO) dapat dilakukan analisis dengan menggunakan kromatografi gas. Metode yang tervalidasi diterbitkan oleh European Pharmacopoeia atau ISO 4730:2017 (dibandingkan versi 2004). Parameter untuk komposisi sejumlah konstituen Tea Tree Oil (TTO) telah diperketat dalam ISO 4730:2017 untuk lebih mencerminkan kualitas TTO yang diproduksi saat ini, dan untuk mengurangi perdagangan minyak palsu. Dalam metode ini, sediaan sampel yang dianalisis terdiri dari pengenceran analit aseton, etanol, atau heksana. Kekurangan dari metode ini adalah tidak praktis untuk penggunaan komersial dikarenakan biaya yang mahal (kombinasi dua kolom) dan memerlukan waktu yang lama.

Nur Ulya Zakiyyah Ali (21/478924/FA/13120)

Fahmi Ihsanuddin Jauhari (21/479015/FA/13121)

R. Muhammad Syamil A.B. (21/479016/FA/13121)