Muro Colaborativo sobre la PCR de Punto Final by Samuel https://padlet.com/samuelescoto72/a0lbmz1fwyecg79w Definiremos la prueba de PCR y la analizaremos bajo varios puntos de interés en-us 2022-02-19 20:41:23 UTC 2025-11-21 07:30:55 UTC hello@padlet.com PCR de Punto Final https://padlet.com/samuelescoto72/a0lbmz1fwyecg79w/wish/2056901901 También conocida como PCR Convencional o Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR, Polymerase Chain Reaction), amplifica una secuencia de ADN mediante ciclos repetidos de separación de cadenas y replicación del ADN. 

Con la PCR cada ADN recién sintetizado se convierte en una molécula molde para generar más, creando así una reacción en cadena que genera copias de ADN de manera exponencial. 

La PCR de punto final permite controlar y detectar los fragmentos de ADN de interés. (1)

]]> 2022-02-20 00:44:17 UTC https://padlet.com/samuelescoto72/a0lbmz1fwyecg79w/wish/2056901901 Aplicaciones https://padlet.com/samuelescoto72/a0lbmz1fwyecg79w/wish/2056902766
  • Análisis y manipulación de DNA
  • Construcción de plantas y animales transgénicos
  • Ciencia forense
  • Diagnóstico médico
  • Terapia génica
  • Análisis ambiental

    • Actualmente, una aplicación principal de la PCR de punto final es amplificar DNA específico para secuenciar, clonar y usar en distintas técnicas de biología molecular. (1)

    ]]>     2022-02-20 00:47:10 UTC https://padlet.com/samuelescoto72/a0lbmz1fwyecg79w/wish/2056902766     Materiales https://padlet.com/samuelescoto72/a0lbmz1fwyecg79w/wish/2056916995
  • Termociclador 
  • Muestra de ADN o plantilla
  • Cebadores o primers - se utilizan dos: 
    • Primer power 
    • Primer reverse
       4. dNPTs
       5. Enzima - Taq Polimeras
       6. Mix Buffer
       7. MgCl2
       8. Agua libre de nucleasas
       9. Vial o tubo donde se mezclara todo
    (2)

    ]]>     2022-02-20 01:21:35 UTC https://padlet.com/samuelescoto72/a0lbmz1fwyecg79w/wish/2056916995     https://padlet.com/samuelescoto72/a0lbmz1fwyecg79w/wish/2056920867 2022-02-20 01:32:07 UTC https://padlet.com/samuelescoto72/a0lbmz1fwyecg79w/wish/2056920867 Bibliografías (1/4) https://padlet.com/samuelescoto72/a0lbmz1fwyecg79w/wish/2056923340 1. BiogenetiX Lab. biogenetixlab.com. [Online].; 2020 [cited 2022 Febrerp 19. Disponible en: https://www.biogenetixlab.com/blog/que-es-pcr-reaccion-cadena-polimerasa/.
    2. IDEA EAD. PCR Convencional.; 2020 [cited 2022 Febrero 19. Disponible en: https://www.youtube.com/watch?v=v5qM1wdKI94.
    3. Casas BO..; 2020 [cited 2022 Febrero 19. Disponible en: https://www.youtube.com/watch?v=mslMRgxbdOA.]]>     2022-02-20 01:39:02 UTC https://padlet.com/samuelescoto72/a0lbmz1fwyecg79w/wish/2056923340     Resumen https://padlet.com/samuelescoto72/a0lbmz1fwyecg79w/wish/2056927912 (3)

    ]]>     2022-02-20 01:52:09 UTC https://padlet.com/samuelescoto72/a0lbmz1fwyecg79w/wish/2056927912     Fidelidad samuelescoto72 https://padlet.com/samuelescoto72/a0lbmz1fwyecg79w/wish/2057918146 La fidelidad, junto con otros como la especificidad y el rendimiento, se han demostrado que se encuentran influenciadas por los diversos componentes que presenta la técnica. Estos incluyen:
    1- La mezcla de la reacción
    2-El régimen de ciclaje 
    3-La ADN polimerasa (4)]]>     2022-02-21 02:40:18 UTC https://padlet.com/samuelescoto72/a0lbmz1fwyecg79w/wish/2057918146     Ventajas samuelescoto72 https://padlet.com/samuelescoto72/a0lbmz1fwyecg79w/wish/2057983057 A. Presenta aplicaciones en todos los campos de la biotecnología y la biología molecular (5)
    B. Su diseño operativo es muy flexible, pues permite detectar de forma tanto cuantitativa como cualitativa el ácido nucleico (6)]]>     2022-02-21 03:35:38 UTC https://padlet.com/samuelescoto72/a0lbmz1fwyecg79w/wish/2057983057     Desventajas samuelescoto72 https://padlet.com/samuelescoto72/a0lbmz1fwyecg79w/wish/2057990924 La enzima más utilizada en las pruebas de PCR, la Taq polimeraza, no tiene actividad correctora y por tanto puede presentar errores al momento de copiar la secuencia de ADN (7). Fuera de esto, no hay muchas desventajas aparentes o graves sobre la PCR de punto final. ]]> 2022-02-21 03:42:15 UTC https://padlet.com/samuelescoto72/a0lbmz1fwyecg79w/wish/2057990924 Bibliografías (2/4) samuelescoto72 https://padlet.com/samuelescoto72/a0lbmz1fwyecg79w/wish/2057994078 4. María A, Investigaciones B, Jesús P"., Rangel M, Mérida ". Ffb-Ula, Bolivar AM, et al. PCR y PCR-Múltiple: parámetros críticos y protocolo de estandarización (PCR and PCR-Multiplex: critical parameters and standardization protocol) [Internet]. Unirioja.es. [citado el 21 de febrero de 2022]. Disponible en: https://dialnet.unirioja.es/descarga/articulo/4796903.pdf 
    5. Cliento C. ¿Qué es la Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR punto final)? [Internet]. Blog | Biogenetix-Lab. 2020 [citado el 21 de febrero de 2022]. Disponible en: https://www.biogenetixlab.com/blog/que-es-pcr-reaccion-cadena-polimerasa/
    6. PCR en tiempo real - Facultad de Química [Internet]. Facultad de Química. 2016 [citado el 21 de febrero de 2022]. Disponible en: https://quimica.unam.mx/investigacion/servicios-para-la-investigacion/usaii/pcr-en-tiempo-real/
    7. Serrato Díaz A, Flores L, Aportela Cortez J, Palacios ES. PCR: reacción en cadena de la polimerasa [Internet]. Gob.mx. [citado el 21 de febrero de 2022]. Disponible en: http://www2.inecc.gob.mx/publicaciones2/libros/710/pcr.pdf
    ]]>     2022-02-21 03:44:53 UTC https://padlet.com/samuelescoto72/a0lbmz1fwyecg79w/wish/2057994078     Sensibilidad https://padlet.com/samuelescoto72/a0lbmz1fwyecg79w/wish/2061708320 A pesar de su alta especificidad, la PCR suele tener una sensibilidad con un menor porcentaje soliendo tener una sensibilidad del 85-90% (9). La sensibilidad de la PCR estándar es evidenciada durante la amplificación, se usa una porción baja de material genético y después de 20 a 40 ciclos se observa la presencia o no de la secuencia buscada (8).

    Existen diversas causas por las que se puede inhibir una reacción de PCR provocando resultados falsos negativos:
    1.  Sustancias inhibidoras de la PCR 
      • Sustancias de origen biológico: Sales biliares y  polisacáridos complejos de las heces, colágeno de tejidos animales, grupo hem, heparina, etc.
      • Sustancias químicas: Fenol, SDS, fijadores a base de mercurio,  formaldehido, etc. 
    2. Degradación de ácidos nucleicos
      • La principal causa de degradación de los ácidos nucleicos es la presencia de nucleasas (ADNasas y ARNasas) provenientes de tejidos/organismos contaminantes, así como esporas de bacterias y hongos, fluidos corporales y las células muertas de las propias manos del operador de la técnica (11).

    ]]>     2022-02-23 02:00:30 UTC https://padlet.com/samuelescoto72/a0lbmz1fwyecg79w/wish/2061708320     Especificidad https://padlet.com/samuelescoto72/a0lbmz1fwyecg79w/wish/2061708871 La especificidad es la capacidad que tiene la PCR para identificar microorganismos con alta certeza, pues los cebadores bien diseñados se unirán únicamente a la secuencia de DNA buscada. 
    Se encuentra directamente influenciada por los diversos componentes que integran la técnica, debe presumirse que una PCR aun altamente específica puede producir errores (8).

    Se trata de la prueba diagnóstica más específica disponible por el momento con una especificidad de casi el 100% (9).
    Dentro de los factores que pueden afectar este porcentaje se encuentran los dNTPs,  iones divalentes y monovalentes,  solución tampón, primers, ADN molde, agua, el régimen de reciclaje y la ADN polimerasa (10).]]>     2022-02-23 02:00:59 UTC https://padlet.com/samuelescoto72/a0lbmz1fwyecg79w/wish/2061708871     Eficiencia https://padlet.com/samuelescoto72/a0lbmz1fwyecg79w/wish/2061785869 Es la capacidad de la técnica para duplicar el ADN  en cada ciclo, expresada en porcentaje. 
    La idea principal de optimizar una técnica es reducir el tiempo y costo de trabajo sin poner en riesgo la especificidad o la sensibilidad de la prueba.
    Se pueden variar los diferentes compuestos empleados durante la reacción o modificar las condiciones de temperatura y tiempo en el termociclador para optimizarla.
    Un ejemplo de esto es la formulación de primers específicos, que logren amplificar de la mejor manera el producto esperado. 
    Al igual que los componentes de la mezcla, el equipo utilizado también juega un papel muy importante en el proceso. El uso de termocicladores más avanzados que requieren un menor volumen de reacción permite reducir el tiempo de amplificación e incluso analizar un mayor número de muestras de manera simultánea (12).]]>     2022-02-23 03:00:12 UTC https://padlet.com/samuelescoto72/a0lbmz1fwyecg79w/wish/2061785869     Bibliografía (3/4) https://padlet.com/samuelescoto72/a0lbmz1fwyecg79w/wish/2061821177 8. Sanchez Feijóo D, Andrade Tacuri C, Cuenca León K, Orellana Bravo P. Sensibilidad y especificidad de pruebas moleculares en odontología. Rev ADM [Internet]. 2021 [Consultado 22 Feb 2022]; 78 (2): 90-94. Disponible en:
    https://www.medigraphic.com/pdfs/adm/od-2021/od212e.pdf

    9. Langa LS, Sallent LV, Díez SR. Interpretación de las pruebas diagnósticas de la COVID-19. FMC [Internet]. 2021 [Consultado 22 Feb 2022]; 28(3):167-173. Disponible en:
    https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC7984870/

    10. Bolivar AM, Rojas A, Garcia-Lugo P. PCR y PCR-Múltiple: parámetros críticos y protocolo de estandarización. Rev Avan Biomed [Internet]. 2014 [Consultado 22 Feb 2022]; 3(1): 25-33. Disponible en:
    https://biblat.unam.mx/hevila/Avancesenbiomedicina/2014/vol3/no1/4.pdf
    ]]>     2022-02-23 03:28:07 UTC https://padlet.com/samuelescoto72/a0lbmz1fwyecg79w/wish/2061821177     Bibliografías (4/4) samuelescoto72 https://padlet.com/samuelescoto72/a0lbmz1fwyecg79w/wish/2061909715 11. Fernández Ordenes J, Ulloa Urrutia S. Recomendaciones para laboratorios que realizan la técnica de reacción en cadena de la polimerasa (PCR): Áreas y flujos de trabajo. Instituto de Salud Pública de Chile [Internet]. 2017 [Consultado 22 Feb 2022]. Disponible en: https://www.ispch.cl/sites/default/files/Recomendaciones%20para%20lab.%20que%20realizan%20la%20t%C3%A9cnica%20de%20PCR%20%C3%A1reas%20y%20flujos%20v1.pdf

    12. Leza Leza MT. Optimización de la técnica de PCR Punto Final y Tiempo Real para la detección de Salmonella enterica subsp. enterica serotipo Gallinarum en aislamientos bacterianos y tejidos biológicos obtenidos a partir de aves de corral. [Internet] 2020 [Consultado 22 Feb 2022]. Disponible en:
    https://repositorio.una.ac.cr/bitstream/handle/11056/18879/TrabajoFinalPasantia_MakaylaLeza2020.pdf?sequence=1&isAllowed=y
    ]]>     2022-02-23 04:46:12 UTC https://padlet.com/samuelescoto72/a0lbmz1fwyecg79w/wish/2061909715