Embora existam muitos tipos de cromatografia, cada técnica de cromatografia é baseada no princípio da retenção seletiva. Neste caso, a mistura é aplicada à fase estacionária, seguida da adição da fase móvel. Ao entrar em contato, a fase móvel arrasta os componentes e a separação é conseguida porque as substâncias da mistura têm afinidades diferentes com a fase estacionária. Ou seja, os componentes da mistura que possuem maior afinidade pela fase móvel serão por ela transportados com maior mobilidade, enquanto os componentes que possuem menor afinidade pela fase móvel terão menor mobilidade.

ROCHA, J. et al. GIZ COMO INSTRUMENTO PARA O ENSINO DE CROMATOGRAFIA: RELATO DE EXPERIÊNCIA. [s.l: s.n.]. Disponível em: <http://www.fepeg2015.unimontes.br/sites/default/files/resumos/arquivo_pdf_anais/resumo_expandidogiz_como_instrumento_para_o_ensino_de_cromatografia_relato_de_experiencia_0.pdf>. Acesso em: 04 de out. de 2023.

MAGALHÃES, Lana. Cromatografia ou Análise Cromatográfica: tipos. Disponível em: <https://www.todamateria.com.br/cromatografia/>. Acesso em: 04 de out. de 2023

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Estes dois pigmentos são armazenados nos cloroplastos, e durante o processo de extração, o espinafre foi amassado com acetona, um solvente orgânico polar. A acetona, devido à sua polaridade semelhante a esses pigmentos, desempenhou um papel crucial ao romper as ligações entre eles, separando-os das fibras das folhas e contendo-os na fase líquida.

Na cromatografia, a separação dos compostos baseia-se na afinidade que eles têm com a fase móvel (hexano) e a fase estacionária. Se a afinidade com a fase estacionária for maior, o composto permanece na mesma posição, caso sua afinidade for maior com a fase móvel, ele se desloca. 

As áreas verde e amarela identificadas correspondem, respectivamente, à clorofila e aos carotenoides.

A parte contendo os carotenoides ficou em uma área superior à ocupada pela porção que continha as clorofilas. Esse fenômeno pode ser atribuído à propriedade de adsorção da molécula de clorofila, que estabelece interações mais fortes com a fase estacionária, resultando em sua retenção. Por outro lado, a movimentação dos carotenoides foi determinada principalmente pela sua solubilidade, o que os levou a se deslocar por um espaço maior sobre a fase estacionária do que a clorofila. 

Portanto, os carotenoides demonstram maior afinidade com o hexano do que com a fase estacionária, o que explica sua posição na cromatografia.