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João Azevedo - 99434

João Santos - 99398

Pedro Lopes  - 98745

Xavier Silva - 98203

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A Reação de cadeia da polimerase, ou PCR, trata-se de uma técnica utilizada em biologia e medicina que serve para amplificar uma única ou várias cópias de uma região específica de DNA, conseguindo gerar de milhares a milhões de cópias dessa determinada região. Tratando-se de uma técnica envolvendo a amplificação de DNA, esta está dependente de uma DNA polimerase termoestável, a Taq polimerase, e dada a sua especificidade necessita de primers de DNA criados de acordo com a região de interesse. A reação é então multiplicada várias vezes através de variações de temperatura.

O objetivo desta técnica é conseguir gerar uma quantidade suficiente de copias de um fragmento específico de DNA que maneira que este possa ser analisado e utilizada doutra maneira.

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O PCR digital é uma técnica nova de PCR que permite a deteção e quantificação precisa e ultrassensível da quantidade de ácidos nucleicos que interessam para o estudo.

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3. Quais as principais diferenças entre o qPCR e o dPCR? 

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3. Quais as principais diferenças entre o qPCR e o dPCR? 

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As principais diferenças do PCR digital comparativamente ao PCR quantitativo são a sua capacidade de contar as moléculas alvo num formato digital direto. Desta forma é mais recomendado o uso do PCR digital em diversas aplicações que limitam a disponibilidade da amostra e que exigem uma alta sensibilidade.

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O PCR digital tornou-se importante e praticamente indispensável em laboratórios clínicos devido a todas as suas aplicações em diversas áreas como por exemplo a microbiologia, virologia, ciência forense, parasitologia e odontologia.
Entre estas aplicações destacam-se a clonagem de DNA para sequenciação, clonagem e manipulação de genes, mutagénese e construção de filogenias baseadas em DNA e diagnóstico e monitoramento de doenças hereditárias.

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A dPCR também funciona para as ciências forenses, por exemplo, tendo em mãos uma amostra de DNA de um cabelo presente numa cena do crime, juntamente com mais amostras de DNA de possíveis suspeitos.
Através do dPCR é possivel examinar um marcador genético particular e comparar com o DNA dos suspeitos e assim descobrir qual deles estariam presentes na cena do crime.

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A dPCR pode ser utilizada para testar se há DNA bacteriano ou viral no corpo de um paciente: se o patógeno estiver presente, pode ser possível amplificar regiões de seu DNA a partir de uma amostra de sangue ou tecido.
Por exemplo, atualmente o teste de eleição no diagnóstico da COVID-19 é conseguido através de uma dPCR que pesquisa diretamente o coronavírus SARS-CoV-2 nas vias respiratórias.

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Baker, M. Digital PCR atinge o seu ritmo. Nat Methods 9, 541–544 (2012)

https://pt.khanacademy.org/science/biology/biotech-dna-technology/dna-sequencing-pcr-electrophoresis/a/polymerase-chain-reaction-pcr

https://jcm.asm.org/content/55/6/1621

https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S2214753514000023