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La Zephyranthes carinata es una especie de importancia farmacéutica por su contenido de alcaloides utilizados para tratamiento del alzheimer, en el Valle del Cauca a pesar de ser una especie nativa se encuentra en peligro de extensión ya que es comercializada en los viveros como  planta ornamental, pero no es producida con fines medicinales lo que ha disminuido su propagación en el departamento y el país disminuyendo la disponibilidad de alcaloides como licorina, licoramina, hemantamina, vitattina, entre otros 16 alcaloides .

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El cultivo in vitro puede ser una alternativa,  para multiplicar y conservar diversas plantas sin afectar su disponibilidad en la naturaleza, y adicionalmente una fuente de material vegetal para incrementar la producción de alcaloides que pueden ser utilizados para estudios básicos con diferentes fines, entre los cuales se incluyen aquellos dirigidos a entender las posibles aplicaciones de estos alcaloides para el tratamiento de enfermedades neurodegenerativas.En este proyecto se usaron dos rutas de cultivo in vitro, la organogénesis y embriogénesis somática, en la especie Zephyranthes carinata, nativa de Colombia, México y Centroamérica y, presente en el Valle del Cauca en condiciones naturales y de venta en los viveros como ornamental.Se desea encontrar una ruta de cultivo in vitro, que pueda inducir una mayor producción de alcaloides en los tejidos vegetales obtenidos.Via organogénesis: Se utilizó escamas de bulbos obtenidos en el invernadero para la obtención de bulbillos in vitro.Via embriogénesis somática: Se indujo a partir tanto de escamas de bulbos del invernadero como de bulbillos in vitro.

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De acuerdo a  la investigación realizada por M, Tofiño, 2017, para la universidad ICESI de la ciudad de Cali, después de comparar las vías de organogénesis y la embriogénesis, analizar sus resultados, la cantidad de alcaloides encontrados en los tejidos y el número de bulbos producidos estableció que, el método de micropropagación que representa la solución a la baja propagación de  Zephyranthes carinata es a través del cultivo in vitro por vía de organogénesis que permite obtener órganos sin necesidad de pasar por el estadio embrionario. Los bulbillos a partir del método  twin-scale se inducen en el medio MS-A1. La organogénesis obtuvo como resultado entre 1 y 2 bulbillos por cada explante, adicionalmente una mayor concentración de alcaloides, siendo estos los necesarios en la planta de interés farmacéutico .

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Reconocer Zephyranthes carinata como una especie de gran importancia farmacológica y un potencial en el valle del cauca.
Identificar una alternativa para su diseminación a través de la micropropagación in vitro por organogénesis.
Lograr plántulas en las mejores condiciones posibles que logren expresar todas sus cualidades genéticas como la producción de alcaloides en la variedad de estudio.

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Arango, G. J. (2008). Alcaloides y compuestos nitrogenados. Facultad de Química Farmacéutica, Universidad de Antioquia. Bisama, I.R.L. (2017). Quimiotaxonomía de Amaryllidaceae chilenas: alcaloides como marcadores taxonómicos. (Tesis de doctorado). Universidad de Concepción. Facultad de Ciencias Naturales y Oceanográficas-Programa de Doctorado en Ciencias Biológicas área Botánica. http://repositorio.udec.cl/handle/11594/2844.                                 Osorio, D. J. (2004-2006). Búsqueda de sustancias bioactivas a partir de dos especies de la flora colombiana: alcaloides de Phaedranassa dubuia (Amaryllidaceae) y Biflavonoides de Garcinia madurno (Clusiaceae). Javier Osorio Durango. González-Chavarro, C., Cabezas, M., Pulido, V. & Celis, X. (2020). Amaryllidaceae: fuente potencial de alcaloides. Actividades biológicas y farmacológicas.Cien.Agri.17(3),78-94. https://doi.o

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-Los avances científicos en la ciencia han permitido en los últimos años estudios detallados entre las plantas tanto a nivel celular y molecular, el uso de laboratorios para reproducir plantas y que incidan en su crecimiento y desarrollo hace parte de un cultivo in vitro.

-La actividad química de la familia Amaryllidaceae da a conocer grandes alcaloides con diferentes actividades biológicas y farmacológicas de suma importancia para la humanidad en especial para casos de tratamientos en pacientes con Alzheimer.

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Se realizará con los siguientes insumos:
Stock de Macronutrientes 4 g en total
-Nitrato de potasio

-Nitrato de amonio

-Sulfato de Magnesio Heptahidratado

-Fosfato mono potásico
Stock de Micronutrientes 383 mg en total
Boro como fuente acido bórico

-Manganeso como fuente sulfato de manganeso.

-Zinc, como fuente sulfato de zinc.

-Molibdato de sodio.

-Cobre, como fuente sulfato de cobre.

-Cobalto.
Adicionalmente de agrega:

Sacarosa    30 g     equivalente azùcar.

Agar            7.5g     gelatina sin sabor.

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Para el estudio a realizar tomaremos plantas del invernadero con cubierta de poli sombra a una temperatura entre 22 a 30ºC. Se recolectan bulbos de 15mm a 20mm de diámetro de plantas sanas y sin flores, posteriormente se depositarán en bolsas plásticas.

-Una vez recolectados los bulbos se llevan de inmediato al laboratorio o mesón donde se realizará el procedimiento, se lavan con abundante agua para retirar excesos de tierra.

- Cortar las raíces, en la parte apical donde se encuentran las hojas y las escamas secas se deben retirar

- Cortar el bulbo a la mitad, sin cortar la placa basal

- Lavar nuevamente

A continuación, realizar el proceso de lavado y desinfección:

A. Depositar en un frasco de vidrio las cuatro partes del bulbo en una solución de etanol al 70%, agitar durante 1 minuto y desechar el etanol.

B. Nuevamente y durante 20 minutos se sumergen las partes cortadas del bulbo en una solución de hipoclorito de sodio y 4 gotas de Tween 20 por cada 100ml de la solución, agitar de manera constante y posteriormente se desechar la solución.

C. Por último, lavar las partes del bulbo en el frasco con agua estéril con tres repeticiones de 3,10 y 15 minutos, cada lavada con agitación constante y desechando el agua estéril en cada repetición.

Realizar una limpieza profunda en la zona de trabajo, implementos (hervir en agua), limpieza de manos y uso de delantal, tapabocas y guantes de látex.

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Una vez tengamos todos los componentes del stock de materiales procedemos a preparar cada uno.

Stock de Macronutrientes a utilizar en miligramos.

Todas las soluciones las preparamos sobre un 70% de agua sobre el volumen final. Posteriormente se la va añadiendo cada uno de los componentes hasta llegar al volumen de 1 litro.

Posteriormente se prepara 100 ml de cada solución.
Stock de Micronutrientes

Se pesa en total 383 mg de micronutrientes en un 70% de soluciòn y posteriormente

Se tomaran 10ml de la solución de micronutrientes para la preparación de 1 litro.

Adicionalmente de agrega:

Sacarosa    30 g     equivalente azùcar.

Agar            7.5g     gelatina sin sabor.

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Pasos:

1.    100 ml del stock de macronutrientes.

2.    100 ml del stock de Ca

3.    1 ml del stock de micronutrientes

4.    Adicionar la cantidad estimada de las soluciones de fitohormonas.

5.    30 g sacarosa y esperar a que se disuelva.

6.    Agitar el medio, dosificarlo en los recipientes de cultivo y colocar las tapas.

7.     Esterilizar el medio.

8.    Dejar enfriar el medio antes de su utilización.
9.     Depositar los explantes en cada caja Petri y llevar al sitio de reposo.
10.  Realizar monitoreo constante.

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Una vez ya establecido el cultivo in vitro de Carinata Zephyranthes podemos llegar a la conclusión de que este método es uno de los mas complejos porque debemos tomar partes de la planta ya sean tejidos, órganos o células para cultivarlas bajo condiciones contraladas en un laboratorio. Cabe resaltar que  con la propagación invitro podemos obtener plantas libres de virus, también podemos obtener producción de semillas sintéticas.
En nuestra experiencia decidimos realizar la práctica, adecuamos un lugar en nuestra casa y procedimos con el montaje.

En esta experiencia encontramos lo siguiente y llegamos a la conclusión de:

1.Después de haber realizado el montaje se observa a los 10 días para determinar si hay respuesta de los tejidos y revisar si hay contaminación.

2. Efectivamente encontramos contaminación de los 6 explantes mostrados 4 se encontrabas contaminados con insectos y polvo traído por el viento.

3.Separamos los explantes contaminados y los disolvimos en solución de hipoclorido de sodio y los sumergimos, después los enjuagamos Conagua estéril y los pasamos a otro recipiente.

4.  Pasaron 5 días de este procedimiento pero no obtuvimos resultados, los explantes de los bulbos se desintegraron, llegamos a la conclusión de que la contaminación fue alta.

5.  Para los dos explantes que nos quedaron uno de ellos no dio resultado, el otro se pudo observar como de su placa basal inició a formar pequeños vellos absorbentes (raíces).

6. No obstante, al día 25 observamos en el único explante que nos queda una apariencia blanca tipo lechoso lo cual nos indica presencia de bacterias y crecimiento de hongos.

No obtuvimos el resultado deseado en esta practica de carinata Zephyrantes, pero nos queda la experiencia, el aprendizaje  y algunas recomendaciones para próximas oportunidades.

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Se propuso la multiplicación in vitro de forma cacera, se adquirieron los materiales y se realizo el proceso teniendo como base un protocolo para esta actividad y se efectuaron observaciones constante de la evolución de los explanes, con la elaboración del ejercicio practico se identificaron necesidades y potencialidades en el proceso de micropropagación in vitro de forma cacera.
A continuación las conclusiones obtenidas sobre este proceso:
1. Es posible la propagación in vitro de forma cacera, con la ejecución del protocola adecuado se puede lograr la germinación de explantes con cualidades interesantes para ser reproducidas.
2.Aunque existen brotes en los explantes plantados en el sustrato no se conoce la reacción a la hora de hacer el trasplante por tal razón se debe seguir observando.
3.Es difícil lograr condiciones de asepsia optimas en los ejercicios de micropropagación de forma cacera ya que no se cuenta con todos los elementos requeridos que si tendría un laboratorio.
4.Se considera que se debe seguir observando y elaborando más experimentos de esta misma clase para diseñar un protocolo especifico de propagación in vitro cacera para esta variedad de planta .