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Como extrair e visualizar macroscopicamente o DNA em células eucarióticas vegetais da cebola?

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As plantas são excelentes fontes de DNA: a maioria das plantas possui oito cópias de cada cromossoma por cada célula (octaplóides), o que significa que possui muito DNA.

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Aprender procedimentos experimentais para extrair DNA de células eucarióticas vegetais.
Durante a extração do DNA, observar as transformações físicas e químicas que ocorrem.
Concluir que a extração do DNA é utilizada em várias tecnologias, como a clonagem (em bactérias), manipulação genética (de plantas e mamíferos) e biotecnologia

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2.Qual é o papel do sal no processo de extração do DNA das células eucarióticas vegetais da cebola?

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2.Qual é o papel do sal no processo de extração do DNA das células eucarióticas vegetais da cebola?

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O DNA é muito solúvel em água devido aos seus iões fosfato - molécula hidrofílica. Para impedir que o DNA liberto do núcleo da célula se dissolva totalmente na solução e se torne invisível, usa-se sal. O sal (NaCl), quando em solução dissocia-se em iões de NA+ e Cl-. Os iões Na+, com carga positiva, vão interagir com os fosfatos, com carga negativa das moléculas de DNA, tornando-as neutras e estabilizadas, e permitindo a sua agregação para mais tarde poderem ser visualizadas a olho nu.

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3.Porque foi necessário triturar a cebola?

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3.Porque foi necessário triturar a cebola?

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Foi necessário triturar a cebola para libertar o conteúdo de DNA que estava contido dentro do núcleo das células eucarióticas.

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-Uma cebola
-Detergente
-Sal de cozinha
-Álcool etílico (pelo menos a 90%) gelado
-Filtro de café
-Vareta de vidro
-Gobelé
-Água destilada
-Tubo de ensaio (250mL)
-Faca
-Funil
-Proveta graduada (100mL)
-Trituradora
-Almofariz
-Espátula
-Termómetro
-Placa de aquecimento

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4.Qual é o papel do detergente no processo de extração do ADN das células eucarióticas vegetais da cebola?

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4.Qual é o papel do detergente no processo de extração do ADN das células eucarióticas vegetais da cebola?

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As membranas das células são formadas por uma bicamada fosfolipídica. O detergente atua na membrana das células e do involucro nuclear emulsionando os lípidos e destruindo as membranas. O detergente não só rebenta as células e faz com que os organelos circulem suspensos na solução (de água, sal e detergente) como, e principalmente, permite que o DNA se liberte do núcleo, tornando-se assim mais acessível.

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– Cortar e triturar a cebola em pedaços bem pequenos;
- Macerar a cebola;
- Aquecer a água a 60º;
– Colocar na proveta 3g de sal, 10ml de detergente e adicionar água previamente aquecida até completar o volume de 100ml; mexer bem até a total dissolução;
-Adicionar a cebola macerada à solução obtida;
-Colocar o extrato no funil (com um filtro de café) e deixar verter o líquido filtrante para o tubo;
-Adicionar ao filtrado cerca de 100ml de álcool gelado, deixando-o escorrer pela borda. Irá formar duas fases, a superior, alcoólica, e a inferior, a aquosa;
-Deixar repousar cerca de 10min;
-Observar e registar, na forma de fotografia/vídeo, as alterações de posição do agregado molecular;
-Mergulhar a vareta no copo e, com movimentos circulares, puxar para cima. Formam-se fios esbranquiçados, que são aglomerados de moléculas de DNA.

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5.Porque se utiliza álcool etílico frio?

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5.Porque se utiliza álcool etílico frio?

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O álcool gelado, além de proporcionar uma mistura heterogenia), em ambiente salino, faz com que as moléculas de DNA se aglutinem, formando uma massa filamentosa e esbranquiçada. O DNA não se dissolve no álcool, na concentração e na temperatura que se usou nesta experiência. Pelo facto do DNA ser menos denso que a água e que a mistura aquosa dos restos celulares, este posiciona-se na parte superior do filtrado. O álcool etílico a 96% promove a precipitação do DNA e permite evidenciar a sua presença na fração alcoólica. Este desidrata as moléculas de DNA, ou seja, afasta a água à sua volta retirando-as da solução (precipitação do DNA).

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6. Porque é necessário filtrar o preparado?

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6. Porque é necessário filtrar o preparado?

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A filtração serve para eliminar da solução os restantes constituintes celulares (restos das membranas, organelos, etc.). Assim, a solução filtrada ficará tão pura quanto possível, contendo o DNA e outras moléculas, como proteínas, que não interferem no processo de extração.

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7. Porque é que é necessário aquecer a água?

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7. Porque é que é necessário aquecer a água?

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É necessário aquecer a água para facilitar a dissolução do sal (NaCl).

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8. É possível visualizar estrutura em dupla-hélice da molécula de ADN? 

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8. É possível visualizar estrutura em dupla-hélice da molécula de ADN? 

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Não é possível visualizar a estrutura em dupla-hélice da molécula de ADN a olho nu e nem mesmo ao microscópio mais potente. Só através de uma técnica de cristalografia por difração de raios x é possível obter imagens que revelem a sua estrutura.

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9. Porque é que se utiliza o sumo de ananás?(opcional)

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9. Porque é que se utiliza o sumo de ananás?(opcional)

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O sumo de ananás tem proteases. As proteases têm a função de destruir as proteínas que estão associadas ao DNA. Quando queremos extrair ácidos nucleicos (DNA e RNA) utilizamos as proteases para destruir as histonas, observando de forma mais evidente o DNA a ascender na solução alcoólica.

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Consult. em 11/22 -
Extracao_DNA_morango.pdf (jcmorais.com)
Consult. em 11/22 -
EXTRAÇÃO DE DNA. Guia do Professor - PDF Free Download (docplayer.com.br)
Consult. em 11/22 -
Extraindo o DNA de uma cebola – Seara da Ciência (ufc.br)
Consult. em 11/22 -
https://mood.sapo.pt/wp-content/uploads/2020/05/19259.jpg
Consult. em 11/22 -https://th.bing.com/th/id/R.70b2ce649bfa0216c4d5e3cd74bc43dc?rik=7VEgEbrSXRweog&pid=ImgRaw&r=0
Consult. em 11/22 -https://thumbs.dreamstime.com/b/cebola-triturada-74293643.jpg
Consult. em 11/22 -
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