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El microorganismo debe poder ser encontrado en abundancia en todos los organismos que estén padeciendo la enfermedad, pero no debería encontrarse en los que estén sanos

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Cuando un animal está enfermo la bacteria debe aislarse en cultivo puro. Si la bacteria se inocula a otro individuo debe reproducirse la enfermedad.

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El mismo patógeno debería poder ser re-aislado de individuos a quienes se les inoculó experimentalmente, y ser idéntico al patógeno extraído del primer individuo enfermo al que se le extrajo

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Cultivos puros y taxonomía microbiana:  establece que el patógeno sospechoso debe aislarse y cultivarse separado de los otros microorganismos en un cultivo en un laboratorio, a esto se le conoce como cultivo puro.

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Este último postulado fue añadido posteriormente al Congreso de Medicina de Berlín en el que Koch presentó los tres postulados anteriores. Fue añadido por otros investigadores, quienes lo consideraron relevante, y estipula, básicamente, que él patógeno que ha causado la enfermedad en otros individuos debería ser el mismo que ha causado en los primeros casos.

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Es decir, de acuerdo con el modelo Koch-Henle, si una bacteria ha sido cultivada en un cultivo y se presenta en la cantidad y estado de maduración apropiado como para causar una patología, al ser inoculada en un individuo sano debería causarle la enfermedad.

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La aplicación experimental de los postulados de Koch empieza con este segundo enunciado, el cual viene a decir que si se tiene la sospecha de que un microbio causa una enfermedad, este debería poder ser aislado del individuo infectado y cultivarse por separado, por ejemplo, en un cultivo in vitro con condiciones controladas.

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Esto quiere decir que si se sospecha que un microbio es el agente causal de una enfermedad en particular, debería poderse encontrar en todos los organismos que estén sufriendo dicha enfermedad, mientras que los individuos sanos no deberían tenerlo.