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El desempeño de este método ahora increíblemente omnipresente requiere

uso de una polimerasa termoestable que podemos encontrar en aguas termales hirviendo como los respiraderos acuáticos marinos.

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Del mismo modo, durante un
Clonación dirigida por PCR de un gen o región de interés, planificada
los desajustes en la secuencia del cebador y los T s ligeramente reducidos pueden
ser utilizado para introducir mutaciones deseadas en un proceso llamado sitio-
mutagénesis dirigida.

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Los biólogos han hecho uso de la PCR para amplificar el ADN de
muestras conservadas, como insectos encerrados en millones de años, con posterior secuenciación y análisis filogenético,
arrojando resultados fascinantes sobre la continuidad y evolución de la vida en
Tierra.

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la sección interna puede ser cualquier secuencia de una secuencia general

longitud, lo que conduce directamente a aplicaciones para las que un producto de PCR

para una región conocida por variar entre especies (o incluso entre individuos) pueden producirse y someterse a un análisis de secuencia para identificar la especie (o identidad individual, en el último caso) del plantilla de muestra.

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en cada hibridación
paso estas dos sondas pueden recocerse con el producto monocatenario
y por lo tanto colocan las moléculas informadoras y extintoras cerca de
El uno al otro. 

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FRET (transferencia de energía resonante de fluorescencia)

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FRET (transferencia de energía resonante de fluorescencia)

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FRET ocurre cuando dos fluoróforos están muy cerca y el
La longitud de onda de emisión de uno (el reportero) coincide con la excitación
longitud de onda del otro (el extintor). 

# data[].attributes.body
Un problema potencial con este enfoque es que los tintes reporteros son
no secuencia específica, por lo que cualquier producto espurio producido por el
La reacción puede dar lugar a señales positivas falsas. 

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método más simple para la detección de PCR en tiempo real es
basado en el uso de tintes que se unen selectivamente y se vuelven
fluorescente en presencia de ADN de doble hebra, como
SYBR verde.

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Métodos para el etiquetado de Amplicones,

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Métodos para el etiquetado de Amplicones,

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incluyendo quimioluminiscencia, fluorescencia y electroquímica

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Hibridación de productos de PCR en microarrays 

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Hibridación de productos de PCR en microarrays 

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Las matrices de perlas de suspensión se pueden utilizar para detectar amplicones específicos

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Diferentes técnicas utilizadas para detección de productos de PCR 

# data[].attributes.subject
Diferentes técnicas utilizadas para detección de productos de PCR 

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Las "técnicas de punto final"  incluyen electroforesis en gel y
Tinción específica de ADN. (simple pero efectiva para rápidamente visualizar se produjo un amplicón )

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40 marcas de ciclos térmicos un límite efectivo para una reacción de PCR con una buena cinética en el presencia de la plantilla apropiada más allá de estos aumenta principalmente la probabilidad de producción de productos raros e incorrectos.

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Utilizar de una polimerasa termoestable, diferentes fuentes de enzimas con diferentes propiedades (p. ej., actividades de exonucleasa para una mayor precisión) inclusión de cationes divalentes como Mg

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productos de la extensión de cada imprimación de la plantilla original
molécula con cada ciclo, estos productos se acumulan de forma lineal
y son rápidamente superados en número por el cebador a cebador definido producto, conocido como amplicón.

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la extensión de los cebadores procede sólo hasta donde la plantilla
existe, es decir, el extremo 5 'de la secuencia del cebador opuesta. los
El proceso ahora ha hecho ambas hebras del corto, definido, precisamente secuencia de ADN de cebador a cebador

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SUBIENDO LA TEMPERATURA, DESNATURALIZACION 

# data[].attributes.subject
SUBIENDO LA TEMPERATURA, DESNATURALIZACION 

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Detiene el proceso de elongación del cebador y
desplaza las polimerasas y hebras recién creadas. Las hebras de ADN simples y cortas recién formadas sirven como un sitio de hibridación por su cebador de polaridad opuesta

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surge de incorporar simultáneamente un
cercano segundo cebador de polaridad opuesta  y luego sometiendo la mezcla de plantilla, dos cebadores,  ADN polimerasa termoestable y dNTP  que contiene tampón de polimerasa a ciclos repetidos de calor
desnaturalización, hibridación y extensión del cebador.

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1000 bases por 1 minuto.

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Entra el ADN polimerasa y comienza a construir la nueva copia de DNA.

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extensión ocurrirá hasta que la polimerasa sea expulsada del
plantilla o alcanza el extremo 5 'de la molécula plantilla y efectivamente se queda sin plantilla para copiar.

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El exceso de la imprimación sintética corta cinéticamente activa asegura que una molécula de cebador encuentra y hibrida apropiadamente a su secuencia dada complementaria más rápidamente que la original

# data[].attributes.body
Al recocido temperatura (o T) del par cebador / plantilla y un gran molar

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"Molécula plantilla" o simplemente "Plantilla"

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"Molécula plantilla" o simplemente "Plantilla"

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Calentamiento del objetivo, a cerca de 100 ° C en un tampón apropiado causa desnaturalización térmica a medida que las hebras de la plantilla se derriten aparte de cada otros.

# data[].attributes.body
Señala la secuencia que se requiere. Se ocupan 2 cebadores ADN polimerasa termoestable y dNTP. Proporciona un grupo hidroxilo.

# data[].attributes.body
Las ADN polimerasas requieren una hebra molde con un cebador que contiene un hidroxilo 3 'para comenzar la extensión de la hebra

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PCR (Reacción en cadena de la polimerasa)

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PCR (Reacción en cadena de la polimerasa)

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Técnica de amplificación de DNA. En 1983, Kary Mullis

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Utiliza transcriptasa inversa para convertir ARN en ADN para usar en una reacción en cadena de la polimerasa.

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Se rompen los puentes de hidrogeno y se obtienen 2 hebras. Temperatura 94°-98°C.

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La PCR depende del uso de ADN termoestable, polimerasas que pueden soportar múltiples ciclos de desnaturalización de la plantilla.

# data[].attributes.body
Kary Mullis
Recibió Premio Nobel de Química.

# data[].attributes.attachment_link.title
PCR: Reacción en Cadena de la Polimerasa (divulgación científica IQOG-CSIC)