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Por: Tessa Abigail Sanchéz Pimienta

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1.Métodos de purificación y análisis de ácidos nucleicos

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1.Métodos de purificación y análisis de ácidos nucleicos

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Purificación:

Extracción con fenol-cloroformo.

Uso de columnas de afinidad.

Kits comerciales (silica-gel y magnetos).

Análisis:

Espectrofotometría (Nanodrop).

Electroforesis en gel de agarosa o poliacrilamida.

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En bilogía molecular experimentalmente se llevan a cabo dos tipos diferentes de hibridación:

Northern blot: Detecta ARN específicos.

Southern blot: Identifica ADN específico.

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3.Técnicas de clonación de genes (Tecnología del ADN recombinante)

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3.Técnicas de clonación de genes (Tecnología del ADN recombinante)

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El ADN recombinante (rADN) es una tecnología que utiliza enzimas para cortar y unir secuencias de ADN de interés.

Esta se hace atreves de etapas:

Aislamiento del gen de interés.

Inserción en un vector (plásmido, virus).

Transformación en un organismo huésped (bacterias, levaduras).

Expresión y purificación de proteínas recombinantes.

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Clonación de ADN y ADN recombinante | Biología | Khan Academy en Español

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Para la secuenciación de ADN se emplean dos métodos, el enzimático de terminación de cadena también llamado  de Sanger o Desoxi y el de secuenciación automática. En general ambos métodos se  desarrollan en tres pasos:

Realizar la síntesis de nuevos fragmentos de ADN.

Separar los fragmentos por electroforesis.

Identificar los nucleótidos  para determinar la secuencia.

El método de secuenciación más empleado, se basa en la desnaturalización del ADN dúplex y la elongación de las dos cadenas de ADN resultantes por ADN polimerasa. La reacción requiere de los cuatro nucleótidos.

Como lo podemos ver en la imagen de arriba.

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La biología molecular es una disciplina fundamental que permite comprender los procesos genéticos y celulares a nivel molecular. Este mural presenta una visión general de las técnicas más importantes utilizadas en laboratorios de investigación y diagnóstico. Desde métodos de purificación de ácidos nucleicos hasta herramientas avanzadas como la PCR y la secuenciación, estas técnicas han revolucionado campos como la genética, la biotecnología y la medicina, facilitando el diagnóstico, tratamiento y estudio de diversas enfermedades.

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Qué es la Biología Molecular? – Centro de Biotecnología

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Found on Google from centrobiotecnologia.cl

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Sambrook, J., & Russell, D. W. (2001). Molecular Cloning: A Laboratory Manual. Cold Spring Harbor Laboratory Press.

Green, M. R., & Sambrook, J. (2012). Molecular Cloning: Principles and Practices. Cold Spring Harbor Laboratory Press.

Mullis, K., & Faloona, F. (1987). Specific synthesis of DNA in vitro via a polymerase-catalyzed chain reaction. Methods in Enzymology, 155, 335-350.

Watson, J. D., et al. (2014). Molecular Biology of the Gene (7th ed.). Pearson.

Brown, T. A. (2016). Gene Cloning and DNA Analysis: An Introduction. Wiley-Blackwell.

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5.Prueba de PCR en el diagnóstico de enfermedades

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5.Prueba de PCR en el diagnóstico de enfermedades

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Las Pruebas de PCR son una forma rápida y muy precisa de diagnosticar ciertas Enfermedades Infecciosas y cambios genéticos. Las pruebas detectan el ADN o el ARN de un patógeno o células anormales en una muestra.

Por ello, ha sido de extrema utilidad para detectar la presencia del COVID-19 durante los años de pandemia.

Las PCR se dividen en tres cosas que son Enfermedades genéticas

Por microorganismo y Tipos de PCR.

Enfermedades genéticas:

Diagnóstico de mutaciones en genes específicos (ej., fibrosis quística).

Por microorganismos:

Detección de patógenos como SARS-CoV-2, VIH, o bacterias resistentes.

Tipos de PCR:

PCR en tiempo real (qPCR).

PCR digital (dPCR).

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Qué es la prueba de PCR? ¿Por qué es el método más confiable para ...