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Métodos bioquímicos y microbiológicos utilizados en el diagnostico de enfermedades periodontales, para la identificación de bacteria patógenas y el uso en la practica clínica

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Los métodos bioquímicos ofrecen la posibilidad de detectar la actividad de la enfermedad en estadios tempranos, permitiendo intervenciones más oportunas. Sin embargo, presentan desafíos como la necesidad de estandarización en la recolección y análisis de muestras, así como la interpretación de los resultados en el contexto clínico individual de cada paciente.

Periochecl{® ( ACTech )

Prognostik® (Dentsply)

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La implementación de métodos de diagnóstico microbiológico permite al clínico detectar y cuantificar estas bacterias, facilitando un diagnóstico más preciso y la elección de terapias antimicrobianas adecuadas.

Además, es fundamental en casos de pacientes que no responden a la terapia convencional o que presentan recurrencias frecuentes de la enfermedad.

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Microscopía de contraste de fase y de capo oscuro.                             Estas técnicas se han utilizado durante varias décadas para valorar la composición de la placa. Una vez tomada la muestra, las bacterias se identifican en base a su forma, tamaño y movilidad.                                                     Este método se emplea para definir la distribución de las  bacterias en la placa subgingival y así se ha establecido una correlación entre el número de bacilos móviles y el grado de inflamación gingival, así como entre el número de espiroquetas y la profundidad de bolsa.                                                El cultivo bacteriano es el "gold standard" a partir del cual se comparan y se validan otras técnicas de análisis microbiológico, Consiste en coger una muestra de placa subgingival del paciente con puntas de papel o curetas y trasladarlas en un medio de transporte específicoSBV (tripsina, bacitracina,vancomicina), después se dispersa la muestra y se cultiva en agar bajo condiciones aerobias o anaerobias.                 

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El cultivo bacteriano es el "gold standard" a partir del cual se comparan y se validan otras técnicas de análisis microbiológico

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Pruebas inmunológicas utilizadas para el diagnostico periodontal  

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Pruebas inmunológicas utilizadas para el diagnostico periodontal  

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Se utiliza para la identificación de patógenos como Porphyromonas gingivalis o Aggregatibacter actinomycetemcomitans mediante anticuerpos marcados con fluorocromos.

Evaluación de la respuesta inmune

•Detección de células inflamatorias (neutrófilos, macrófagos, linfocitos).

•Identificación de citoquinas y mediadores de inflamación como IL-1β, TNF-α y IL-6.

VENTAJAS

✅ Alta especificidad y sensibilidad.

✅ Permite visualizar la distribución de patógenos y proteínas en el tejido.

✅ Útil para estudios de progresión de la enfermedad y efectividad de tratamientos.

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Su análisis permite determinar la presencia de diversas enzimas y marcadores inflamatorios asociados con distintos grados de periodontitis. La recolección debe realizarse minimizando la alteración del entorno del surco y en un tiempo no superior a 30 segundos.           Se conocen cuatro métodos posibles para la recogida del fluido, como son las tiras de papel, micropipetas, micro jeringas, y tiras de plástico. Faria R, Belén A, Bascones A. Nuevos métodos de diagnóstico en Periodoncia. Métodos bioquímicos. Av Periodon Implanto! 2001       

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 ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay)

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se usa en la enfermedad periodontal para detectar y cuantificar proteínas, citoquinas e inmunoglobulinas en muestras biológicas como saliva, fluido crevicular gingival (FCG) y suero sanguíneo.

Aplicaciones en la enfermedad periodontal

1. Detección de citoquinas proinflamatorias

•Se usa para medir los niveles de IL-1β, IL-6, TNF-α y PGE2, marcadores clave en la inflamación y destrucción periodontal.

•Cuantificación de inmunoglobulinas (IgG, IgA, IgM) contra bacterias periodontopatógenas como Porphyromonas gingivalis y Aggregatibacter actinomycetemcomitans.

•Detección de RANKL, OPG y metaloproteinasas de matriz (MMPs), involucradas en la resorción ósea y degradación del colágeno.

•Se pueden medir cambios en los niveles de estos biomarcadores antes y después del tratamiento para evaluar su efectividad.

Cordero-Soberanes H. Pruebas microbiológicas en el diagnóstico de enfermedad periodontal. Vertientes Rev Esp Cienc Salud. 2000

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1. Recolección de la muestra: Se obtiene saliva, fluido crevicular gingival o suero sanguíneo.

2. Adhesión del antígeno o anticuerpo: Se fija en una placa de micro titulación.

3. Adición de un anticuerpo con enzima: Se une específicamente al biomarcador de interés.

4. Reacción enzimática y lectura de absorbancia: Se genera un color proporcional a la cantidad del biomarcador detectado.

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se usa en la enfermedad periodontal para detectar y cuantificar proteínas involucradas en la inflamación y destrucción tisular. Se aplica principalmente en estudios de laboratorio para analizar la expresión de proteínas en células y tejidos periodontales.

Identificación de proteínas virulentas de Porphyromonas gingivalis, Treponema denticola y Aggregatibacter actinomycetemcomitans.

Ventajas del Western blot en periodoncia

✅ Alta especificidad en la detección de proteínas.

✅ Permite comparar la expresión de proteínas en diferentes estados de la enfermedad.

✅ Útil para estudios sobre los mecanismos moleculares de la periodontitis.

Bullón Fernández P.Diagnóstico por el laboratorio de las enfermedades periodontales y periimplantarias. Diagnóstico de la periodontitis. Av Periodo n Implanto!. 2004

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Reacción en cadena de la polimerasa (PCR) 

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se usa en la enfermedad periodontal para detectar y cuantificar ADN bacteriano y evaluar la expresión de genes relacionados con la inflamación y destrucción periodontal.

Aplicaciones del PCR en la enfermedad periodontal

1.Detección de bacterias periodontopatógenas

• Identificación de Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia, Treponema denticola, Aggregatibacter actinomycetemcomitans, entre otras.

• Se usa PCR convencional, PCR en tiempo real (qPCR) o PCR múltiplex para diferenciar varias especies en una sola prueba.

2.Análisis de marcadores genéticos e inflamatorios

• Detección de polimorfismos genéticos asociados con la respuesta inmune, como variaciones en los genes de IL-1, TNF-α y MMPs.

• Evaluación de la expresión génica de citoquinas inflamatorias para estudiar la progresión de la periodontitis.

3.Detección de resistencia a antibióticos

• Identificación de genes de resistencia en bacterias periodontales, ayudando a seleccionar el tratamiento antimicrobiano adecuado.

4.Monitoreo de la progresión de la enfermedad y respuesta al tratamiento

• Comparación de la carga bacteriana antes y después del tratamiento periodontal.

Ventajas del PCR en la enfermedad periodontal

✅ Alta sensibilidad y especificidad en la detección bacteriana.

✅ Permite identificar y cuantificar patógenos sin necesidad de cultivo.

✅ Útil para estudios genéticos sobre predisposición a la periodontitis.

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La PCR a tiempo real es una variante de la PCR convencional que se emplea para la cuantificación de ácidos nucleicos, tanto decomo deRmensajero en una muestra.e tal manera que se puede monitorizar el progreso de la PCR mientras ésta se sucede, de este modo los resultados son obtenidos a lo largo del proceso de la PCR mucho antes de que ésta termine, y no requiere de un análisis una vez finalizado el proceso. La PCR cuantitativa lleva los mismos reactivos que la PCR a tiempo final, más una sonda marcada con un fluorocromo.

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METOS PARA ANALISIS DE LA MICROBIOTA ORAL 

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METOS PARA ANALISIS DE LA MICROBIOTA ORAL 

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Una de las más utilizadas es la técnica de “Checkerboard”, la cual por medio de hibridación de ADNADN, permite la dentificación de varias especies en grandes cantidades de muestras31. Dichas técnicas no ofrecen algunas características del cultivo microbiológico, están confinadas a la identificación de especies únicas. Actualmente, se conocen entre 50 y 100 clonas diferentes de Porphyromonas gingivalis, y además no se sabe la prevalencia exacta ni la participación de cada una de éstas en la enfermedad periodontal28. Esto es, uno de los aspectos en experimentación es definir por qué se ha observado una alta concentración de microorganismos periodontopatógenos en sitios, tanto sanos como enfermos, o por qué sitios definidos como de “alto riesgo”, ya que presentan altas concentraciones de periodontopatógenos al inicio de una evaluación longitudinal, no desarrollan pérdida de nivel de inserción importante y los sitios control, catalogados como “no de alto riesgo” sí desarrollan deterioro periodontal

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Sondaje periodontal

• Se usa una sonda periodontal calibrada para medir la profundidad de los bolsillos periodontales (>3 mm indica enfermedad).

• Evalúa sangrado al sondaje (signo de inflamación activa).

• Permite detectar recesión gingival y pérdida de inserción clínica.

Movilidad dental

• Se mide aplicando presión manual con el mango del espejo y la sonda.

• Escala de Miller:

• Grado I: movilidad leve (<1 mm).

• Grado II: movilidad moderada (>1 mm sin desplazamiento vertical).

• Grado III: movilidad severa (movimiento vertical y horizontal).

Prueba de Furcación

• Se usa una sonda de Nabers para evaluar la afectación de furca en molares.

• Clasificación de Glickman:

• Grado I: leve pérdida ósea en la furca.

• Grado II: pérdida ósea parcial sin pasar completamente.

• Grado III: comunicación total de la furca sin exposición.