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FAÇA AQUI O CHECK LIST DE ASPECTOS IMPORTANTES OBSERVADOS NAS TÉCNICAS APRESENTADAS NA AULA MAGNA: 

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FAÇA AQUI O CHECK LIST DE ASPECTOS IMPORTANTES OBSERVADOS NAS TÉCNICAS APRESENTADAS NA AULA MAGNA: 

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- Lavagem de hemácias
- Preparo de suspensão a 5%

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Lavagem de Hemácias e Preparo de Suspensões

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Lavagem de Hemácias e Preparo de Suspensões

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* Organizar a bancada com todos os materiais necessários para evitar o deslocamento desnecessário;
* Amostras e tubos adequadamente identificados;
* Remover um pouco do plasma para um tubo identificado para não extravasar a amostra d tubo;
* Não lavar uma quantidade muito grande de hemácias para garantir que as células sejam lavadas adequadamente;
* O volume de solução fisiológica é aproximadamente 1cm abaixo da borda do tubo;
* Homogeneizar o tubo suavemente para misturar adequadamente as hemácias com a solução fisiológica;
* Equilibrar os tubos adequadamente na centrífuga;
* Ao final das 3 lavagens, remover toda a solução fisiológica com cuidado para não fazer bolhas;
* Para prepara a suspensão, pegar um tubo limpo e identificado e preencher no tubo o meio da suspensão e a concentração;
* Cuidado com a exatidão dos volumes nas pipetagens, utilizar pipetas calibradas ou pipetas de Pasteur que passaram por inspeção de qualidade;
* Para homogeneizar a suspensão após a adição das hemácias utilizar uma pipeta limpa, pois a quantidade de hemácias que fica na parede da pipeta Pasteur pode levar ao aumento da concentração da suspensão

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Lavagem de hemácias e preparo da suspensão 5%

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Lavagem de hemácias e preparo da suspensão 5%

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Primeiramente, checar se a amostra a ser testada está devidamente identificada, assim como os tubos de ensaio que serão utilizados no processo de lavagem e preparo da suspensão;

Importante não lavar uma grande quantidade de hemácias (cerca de no máximo 1 ml) para que o processo de lavagem seja bem-sucedido;

Preencher o tubo de ensaio com salina 0,9% completando o volume de ¾;

Deve-se homogeneizar as hemácias cuidadosamente por inversão ou com a pipeta Pasteur, sempre evitando a formação de bolhas;

Centrifugar essa amostra em um equipamento devidamente validado;

Repetir esse processo quantas vezes for preconizado pela técnica que esteja sendo executada. No nosso caso, a lavagem foi feita 3 vezes;

Após concluído o processo, com o tubo devidamente identificado, preparar a suspensão de hemácias a 5%, pipetando 19 gotas de salina 0,9% e 1 gota de hemácia (950ul de salina para 50ul de hemácia).

Caso a homogeneização da suspensão seja feita com a Pasteur, deve-se inutilizar aquela pipeta que utilizamos para desprezar 1 gota da papa de hemácias e pegar uma limpa, para que o volume excedente de hemácias não atrapalhe a concentração adequada da suspensão e permita a realização de testes com resultados fidedignos.

Bárbara Frutuoso

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Bancada Organizada
Amostra devidamente identificada
Homogeneização por inversão
Equipamentos validados e calibrados para o procedimento a ser realizado
Materiais como pipetas devem passar por uma inspeção de qualidade

Beatriz Delgado

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- Organizar a bancada e materiais/reagentes necessários.
- Identificar amostras
- Transferir para um tubo uma quantidade de hemácias completar com soro fisiológico até 3/4 ou um dedo da borda do tubo e homogeneizar por inversão do tubo de forma cuidadosa evitando a formação de bolhas;

- centrifugar a amostra conforme procedimento validado. Lavar a amostra 3 vezes

- Ao final da lavagem retirar o máximo de sobrenadante com auxílio de uma pipeta.

- Para preparar a suspensão 3-5%, identificar um tubo e adicionar 1 gota das hemácias lavadas e 19 gotas de soro fisiológico. Homogeneizar a suspensão com uma pipeta para não interferir no volume de hemácias.

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Lavagem das Hemácias

Prepara todos os materiais necessários para o procedimento.
Identificar todos os tubos.
Lavra quantidade correta de hemácias que forem necessárias.
Usar centrífugas calibradas, manutenção preventiva em dia e qualificada.
Evitar formar bolhas durante a homogneização e usar, de preferência, a pipeta de Pasteur ou homogeneizar por inversão delicadamente.

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Preparar todos os materiais que serão utilizados, para maior segurança e facilitar o procedimento.

Identificar os tubos.

Separar o plasma ou soro da hemácia a ser lavada.

Colocar a quantidade de hemácia necessária para a realização dos testes, acrescentar solução fisiológica, aproximadamente até um cm abaixo da borda do tubo.

Homogeneizar devagar a hemácia com a solução fisiológica com auxilio de uma pipeta de Pasteur  ou uma tampa. Cuidar para evitar a formação de bolhas, que podem interferir no volume de amostra.

As pipetas de Pasteur devem ser avaliadas anteriormente pelo controle de qualidade.

Respeitar a velocidade e tempo da centrifuga estabelecidos pela validação da técnica, esperar a centrifuga desligar sozinha, não interromper o procedimento.

Após a terceira lavagem, retirar todo o sobrenadante.

No momento de preparo da suspensão 3-5%  usar uma pipeta de Pasteur e na sequência descartar. Não usar a mesma para homogeneização da suspensão  para que o volume excedente que fica no interior da pipeta não interfira na concentração da suspensão.

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> Bancada organizada para maior segurança
> Se certificar de que amostra esteja identificada da maneira correta
> Os tubos também devem ser identificados para segurança
> A quantidade de hemácias a ser utilizada para lavagem não deve ser muito grande
> A homogeneização da salina com as hemácias deve ser realizada por inversão (tubos devidamente tampados) ou com a pipeta pasteur (lembrando de evitar a formação de bolhas)
> A centrifugação dos tubos deverá acontecer em equipamento validado para que o procedimento seja bem executado
> As hemácias devem ser levadas por três vezes e na terceira o sobrenadante deverá ser retirado com cuidado
> Realização da suspensão de 3 a 5% : tubo deve estar limpo e devidamente identificado
> A pipeta utilizada para homogeneizar a suspensão   não deve ser a mesma utilizada para pegar a hemácia (evitando mudanças na concentração da suspensão)
> As pipetas pasteur utilizadas na bancada devem passar por um procedimento de inspeção de qualidade

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- bancada organizada;
- amostra identificada;
- identificar tubo;
- adicionar 3/4 do tubo com com solução fisiológica;
-  homogeneizar por inversão  (tubo com tampa)  até fundo do tubo ficar limpo, ou com pipeta de Pasteur  com devido cuidado para não ocorrer bolhas;
- centrifugação:  tubo sem tampa, balanceado, com rotação fixa em tempo necessário;
- não interromper o ciclo da centrifuga ;
- retirar a solução fisiológica com cuidado pra não perder hemácias;
- repetir o procedimento por mais 2 vezes;
- ao final da última lavagem retirar a quantidade máxima de solução fisiológica;
-   ficando somente com a papa de hemácias;

PREPARO DA SUSPENSÃO:

- identificar o tudo da suspensão;
- identificar a suspensão ( 3 a 5 %);
- utilizar 19 gotas de salina para 1 gota da hemácia lavada (as pipetas utilizadas devem ser calibradas);
-  realizar os testes.

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19 gotas de soro fisiológico
1 gota das hemácias lavadas

Homogeinizar amostras cuidadosamente

Suspensão 3% - 5%

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* Antes de começar, verificar se a bancada está limpa e organizada, contendo todos os materiais necessário como, insumos, reagentes, centrifugas etc.

* As amostras devem estar identificadas com o nome do paciente ou código, de acordo com o POP de cada instituição.

* A centrifugação do tubo deverá respeitar o tempo e velocidade de rotação validado pela instituição, geralmente os equipamentos já ficam programados.

* Nunca interromper o ciclo do equipamento, sempre aguardar o seu termino.

* Após a centrifugação do tubo, retirar com uma pipeta o excesso de plasma para facilitar o acesso somente as hemácias no fundo do tubo, evitando que transborde e ocorra um acidente.

* Para realizar a lavagem, transferir para um tubo uma quantidade de hemácias de acordo com o número de testes a serem realizados, assim evitando que não falte amostra.

* Após transferir as hemácias, completar com soro fisiológico a 0,9% até 3/4 ou um dedo da borda do tubo, com auxilio de uma tampa realizar uma  homogeneização por inversão no mínimo 3 vezes, ou com uma pipeta fazer uma homogeneização, evitando a formação de bolhas.

* Após a lavagem, com o auxílio de uma pipeta retirar a maior quantidade de solução fisiológica/sobrenadante do tubo, pipetar uma gota das hemácias lavadas em outro tubo, e 19 gotas de solução fisiológica fazendo uma homogeneização dessa suspensão com outra pipeta,  pois o volume excedente das hemácias pode interferir na concentração da suspensão.

* Lavagem de hemácias realizada e pronta para seguir com os testes.

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Lavagem de Hemácias e Preparo de Suspensões - Técnica em Tubo

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Lavagem de Hemácias e Preparo de Suspensões - Técnica em Tubo

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DISPOSIÇÃO DA BANCADA:

A bancada deve estar organizada de forma que otimize a realização da técnica, com os materiais e reagentes dispostos de maneira favorável ao técnico que irá manipulá-los, evitando acidentes e interferências que podem influenciar o preparo da técnica.

IDENTIFICAÇÃO DOS TUBOS:

Os tubos de ensaio utilizados devem ser previamente identificados, fazendo referência a etapa do teste e a amostra correspondente.

EXCESSO DE PLASMA NA AMOSTRA:

Se observado o excesso de plasma na amostra que será lavada, este deve ser desprezado para evitar interferências no processamento das hemácias.

VOLUME DE HEMÁCIAS:

A alíquota de hemácias a ser lavada será determinada conforme a necessidade dos testes propostos.

HOMOGENEIZAÇÃO:

Após adição das hemácias a serem lavadas e volume correspondente a 3/4 do tubo de ensaio de solução fisiológica O,9%, realizar uniformemente a homogeneização por técnica de inversão do tubo, com este vedado, ou com auxilio de uma pipeta de Pasteur, evitando a formação/presença de bolhas.

CENTRIFUGAÇÃO DA AMOSTRA:

Rotacionar por tempo pré estabelecido em centrífuga sorológica. Deve-se evitar interromper o ciclo da centrífuga, aguardando o término da centrifugação.

PREPARO DA SUSPENSÃO 3-5%:

Ao final da lavagem, com o auxílio de uma pipeta de Pasteur desprezar a maior quantidade de solução fisiológica possível. Em um tubo previamente identificado, adicionar uma gota das hemácias lavadas, e 19 gotas de solução fisiológica. Para alíquotar estes volumes, podem ser utilizadas pipetas semi automáticas, ou de Pasteur, desde que validadas. Se utilizada pipeta de Pasteur para adição do volume de hemácias, a  homogeneização da suspensão deve ser feita com outra pipeta, para que o volume excedente das hemácias não interfira da correta proporção da suspensão.