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El microorganismo debe ser reaislado a partir de animales inoculados, y ser idéntico al original.

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Las células procedentes de un cultivo puro del patógeno sospechoso deben causar la enfermedad en un animal sano

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El microorganismo debe ser cultivado en
un cultivo puro fuera del cuerpo del animal.

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El microorganismo patógeno sospechoso debe estar presente en todos los casos de enfermedad y ausente en animales sanos.