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Fotografiar y analizar las muestras.

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Extraer el gel y colocar en el fotodocumentador de geles.

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Tomar con una micropipeta 2 ul de las mezclas de ADN y colocar en los pocillos del gel.

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Conectar la cámara de electroforesis a la fuente de poder de 80 V/h y esperar 45 minutos para que corra la muestra.

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Mezclar 5 ul de buffer de carga a  3 ul de las muestras de ADN F9P18, UCE_107 y UCE_34 y agua destilada.

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Colocar el gel de agarosa para colocarlo en la cámara de electroforesis, sumergiendolo en el buffer TAE.

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Vertir la solución de agarosa en el molde de la cámara de electroforesis y esperar a que se solidifique.

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Prepara la cámara de electroforesis tapando sus paresdes con doble capa de masking.

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Enfriar la agarosa en agua para acelerar el proceso de solidificación.

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Añadir 4,5 ul del intecalante SYBR SAFE y mezclar completamente por agitación.

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Calentar en un horno microondas por 2 minutos, hasta que la agarosa se disuelva. Dejar enfriar.

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Medir 50 ml de buffer TAE y añadir a la agarosa.

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Pesar 0,76 gr de agarosa y transferir a un erlenmeyer de125 ml.

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La electroforesis en gel de agarosa permitió observar los fragmentos de ADN de las tres muestras respectivamente, y con ello, identificar los procesos para la realización de esta técnica. Por otro lado, en base a los resultados se concluye que, solo tres repeticiones produjeron bandas de las mismas características del control positivo, las cuales corresponden a las repeticiones 3, 4 y 5 de la muestra UCE-107, en cambio para la muestra UCE-34 no se apreció ninguna banda y del mismo modo para el control negativo (C-) que fue agua destilada.

La baja visualización de las bandas de ADN en la electroforesis se debe a que el ADN puede degradarse mediante reacciones y a factores como la concentración usada tanto para las moléculas de agarosa como en el disolvente, el tamaño de la muestra, su forma, la concentración y la temperatura de la solución amortiguadora, corroborando así la hipótesis nula que establece que la electroforesis permite identificar la calidad del ADN extraído de las muestras vegetales en estudio.

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En el experimento realizado, la calidad del ADN extraído de higuerilla (Ricinus cummunis) se examinó mediante electroforesis en gel de agarosa, los resultados mostraron que el control positivo (C+), es decir, la muestra F9P18 correspondiente a una accesión de tomate de árbol (Solanum betaceum), mostró una banda de baja intensidad e indefinida, en comparación con las muestras de ADN de la muestra UCE-107. Para las repeticiones de las muestras de UCE-34 no se apreció ninguna banda y del mismo modo para el control negativo (C-) que fue agua destilada higuerilla (UCE 107 y UCE 34), ya que, solo tres repeticiones produjeron bandas de las mismas características del control positivo, las cuales corresponden a las repeticiones 3, 4 y 5.

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Informe de la práctica 3. Electroforesis

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HO: La electroforesis permite identificar la calidad del ADN extraído de las muestras vegetales en estudio.
H1: La electroforesis no permite identificar la calidad del ADN extraído de las muestras vegetales en estudio.

Las variables de estudio fueron:

Variable dependiente: calidad del ADN de la muestra

Variable independiente: pureza de ADN de la muestra

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General
Separar fragmentos de ADN y visualizarlos, mediante electroforesis en un gel de agarosa para su caracterización.
Específicos

Identificar los pasos para realizar una electroforesis.

Conocer los principios de movilidad de una molécula en un gel de agarosa.

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Tema: "Electroforesis de ADN de las muestras de ADN de Higuerilla (Ricinus communis L.) UCE_107_34 en gel de agarosa"

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Tema: "Electroforesis de ADN de las muestras de ADN de Higuerilla (Ricinus communis L.) UCE_107_34 en gel de agarosa"