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La cabeza debe tener una longitud aproximada entre 4-5 µm y un ancho entre 20.5-3.5 µm. Coloración de Gram. 1000X

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La evaluación del semen se debe realizar lo más pronto posible. Los parámetros macroscópicos iniciales incluyen la evaluación de la apariencia, la licuefacción, la viscosidad o consistencia, la determinación del volumen de la muestra y su pH.

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El espermograma tiene como finalidad evaluar el semen y los espermatozoides.  Entre las principales indicaciones se incluyen la evaluación de la función de los órganos genitales masculinos, el estudio de la pareja infértil y la búsqueda de espermatozoides después de una vasectomía o de una reversión de una vasectomía.
Tiene utilidad clínica como prueba de tamización para la infertilidad y para determinar su causa probable. La combinación de varios de sus parámetros tiene mayor predictivo que el uso de los parámetros individuales.

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El análisis del semen o espermograma es una prueba de laboratorio simple de gran importancia para la evaluación de la infertilidad en las parejas y para el estudio de las enfermedades genitales masculinas y de otras patologías, como las causadas por la exposición a productos químicos, factores ambientales y medicamentos, entre otras.

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Es un proceso complejo mediante el cual las células madres germinales se dividen para renovarse y para generar células hijas que se convertirán en espermatozoides.
Es un proceso continuo que comienza en la pubertad y perdura toda la vida. La duración de un ciclo completo de espermatogénesis es de 60 días.

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El espermograma tiene sus limitaciones y las más importante es la variabilidad de los parámetros en un mismo individuo.  Es así como las muestras recogidas por un mismo individuo, bajo condiciones iguales y con el mismo período de abstinencia, pueden mostrar variaciones en todos los parámetros.

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Apariencia
El semen tiene una apariencia homogénea y un color entre blanco y gris claro, y ocasionalmente amarilloso en pacientes con ictericia o que consumen ciertas vitaminas. U color rosado o rojo sugiere la presentación de sangre.

Licuefacción
El semen se coagula casi inmediatamente después de su eyaculavión, para nuevamente licuarse 5 a 40 minutos después, por la acción del antígeno específico de próstata. En algunos casos, la licuefacción no se completa hasta después de una hora y se debe informar. La muestra de debe mezclar cuidadosamente en el recipiente antes de tomar una parte para el análisis.

Volumen
El volumen del semen está conformado por las secreciones de varias glándulas. Los testículos y el epidídimo contribuyen con el 5% del contenido, las vesículas seminales entre 46%-80%, la prostáta entre 13% - 33% y las glándulas bulbouretrales y uretrales entre 2% - 5%.
El volumen se debe medir con un cilindro graduado de base cónica o con una pipeta estéril de 5ml o 10ml y no se den usar jeringas plásticas, ya que pueden alteral la motilidad de los espermatozoides.

Viscosidad
Se puede evaluar aspirando la muestra en una pipeta de 5ml y permitiendo la caída de las gotas para observar la longitud del filamento que se forma. Una muestra normal deja caer gotas pequeñas y bien definidas o un filamento no mayor de 2 cm.

pH
Se debe medir dentro de la primera hora de recolección de la eyauclación. Para ello, se utiliza una gota de semen sobre papel de pH y se hace la lectura a los 30 segundos. El valor normal está entre 7.2-7.8. Valores por encima de 7.8 hacen pensar en una infección o en una anormalidadde la función secretora de la próstata.

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La espermatogénesis comienza con la división mitótica de la espermatogonia, que da origen a los espermatocitos primarios. Posteriormente se da una división meiótica que da origen a los espermatocitos secundarios y éstos a su vez por otro ciclo de meiosis dan origen a las espermátides, las cuales tendrán la mitad del material genético original (23 cromosomas).

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Luego comienza un ciclo de maduración el cual las espermátides maduran a espermatozoides funcionales en las células de Sertoli. Este proceso recibe el nombre de "espermiogénesis", el cual puede durar varias semanas.
Eventos que suceden en la espermiogénesis:
1. Formación del acrosoma
2. Formación del flagelo
3. Reorganización de las mitocondrias alrededor de la parte media
4. Condensación del núcleo al 10% del tamaño original
5. Pérdida de gran parte del citoplasma.

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El espermatozoide es la célula reproductora sexual masculina. Es una célula haploide, por lo que sólo contiene 23 cromosomas.
Los espermatozoides constan de tres regiones:
* Cabeza: contiene el núcleo haploide cubierto por el acrosoma y un par de centriolos detrás del núcleo.
* Segmento intermedio o cuerpo: región que une la cabeza con la cola y que contiene la carga mitocondrial que provee la energía necesaria para la movilidad del espermatozoide.
* Cola o flagelo: da la movilidad al espermatozoide.

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De acuerdo con las recomendaciones de la OMS, la muestra para el espermograma se debe tomar siguiendo las siguientes normas:
1. Se debe entregar al paciente una hoja de instrucciones escrita con claridad sobre la manera de recoger el semen y trasladarlo al laboratorio.
2. Lo ideal es recoger la muestra después de dos días y nomás de siete de abstinencia sexual. En el formulario del análisis de semen se debe anotar el nombre del paciente, el período de abstinencia, la fecha y la hora de la recolección.
3. Para la evaluación inicial se deben recoger dos muestras independientes de semen. El tiempo de las recolecciones no debe ser menor de siete días ni mayor de tres meses. Si los resultados son muy diferentes, se deben analizar más muestras de semen.
4. Lo ideal es que la muestra se recoja en la intimidad de una dependencia próxima al laboratorio. De lo contrario, deben llevarse al laboratorio antes de transcurrida una hora de la recolección y si la motilidad de los espermatozoides en anormalmente baja, se debe examinar una segunda muestra.
5. Si se van a realizar pruebas de la función de los espermatozoides, es fundamental separar los espermatozoides del plasma seminal antes de una hora de la producción del eyaculado.
6. La muestra se debe obtener mediante masturbación y eyacularse dentro de un recipiente de vidrio o plástico de boca ancha que esté limpio; si se utiliza plástico, se debe verificar la ausencia de efectos tóxicos sobre los espermatozoides. El recipiente debe estar tibio para reducir al mínimo el riesgo de choque por frío.
7. Si se va a realizar un análisis bacteriano, el paciente debe orinar y luego lavarse y enjuagarse las manos y los genitales antes de recoger la muestra en un recipiente estéril.
8. Cuando no es posible obtener la muestra mediante la masturbación existen condones de plástico especiales para este fin. No es aceptable obtener la recolección de semen mediante el coitus interruptus, porque puede perderse la primera porción del eyaculado.
9. Las muestras incompletas no se deben analizar, en particular si se pierde la primera porción del eyaculado.
10. La muestra se debe proteger de las temperaturas extremas (no < 20°C ni > 40°C) durante el traslado al laboratorio.
11. El recipiente debe rotularse con el nombre del paciente, la fecha y hora de la recolección, y la duración de la abstinencia.

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El examen microscópico del semen incluye la evaluación de la motilidad, la vitalidad, el recuentro y la morfología de los espermatozoides, y el examen citobacteriológico, en el cual se busca la presencia de otros elementos celulares diferentes a los espermatozoides, como son los leucocitos y las bacterias.

Es de gran importancia que cada laboratorio estandarice su metodología para el examen microscópico, con el fin de que todas las muestras sean evaluadas de igual manera.

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Las muestras de semen se deben analizar a más tardar dentro de la primera hora después de su recolección. Se debe tener en cuenta que las muestras de semen pueden contener patógenos transmisibles, como son el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH), el virus de la hepatitis B y el herpes virus, por lo tanto, deben ser manipuladas con extrema precaución.

Algunas causas de error incluyen la forma en que se recolectó la muestra:  si fue por masturbación, como debe tomarse, o si por interrupción del coito; también si se recogió toda la muestra o sólo una parte.

Se debe tener en cuenta que a pesar de que el espermograma arroje resultados normales, puede haber otro tipo de anormalidades que sólo se manifiestan en los análisis complementarios o funcionales, particularmente cuando hay problemas de fertilidad.

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Espermatozoides en el microscópio Full HD - Curiosidades

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Espermatozoide con defecto de cabeza (flecha negra) y espermatozoide normal. Coloración de Papanicolaou. 1000X

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Se debe hacer un análisis microscópico inicial de la muestra sin diluir para estimar el número de espermatozoides por campo y decidir sobre la dilución a utilizar para la determinación de los parámetros microscópicos.

Se utiliza un volumen de semen de 10µL entre lámina y laminilla, a una magnificación de 100x, que permita la visualización de filamentos de moco y la aglutinación de los espermatozoides.  Luego se debe pasar a una magnificación de 400x, si a una magnitud de 400x se observan entre 40 y 200 espermatozoides por campo, para el recuento se debe diluir la muestra 1:20.

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Observación inicial de una gota de semen, entre lámina y lámina, en la que se pueden contar aproximadamente unos 150 espermatozoides. 400x

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Motilidad
La motilidad de los espermatozoides se evalúa en una muestra de 10µL entre lámina y laminilla, por duplicado. Es importante estandarizar el volumen a usar y el tamaño de la laminilla (20*20 mm o 24*24 mm), de manera que para el análisis se utilice una muestra con una profundidad entre 25µm y 30µm, la cual garantiza el movimiento libre de los espermatozoides.

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Muestra de semen coloreada con eosina, en la que se observan espermatozoides vivos (sin coloración) y muertos (con coloración). 400X

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Vitalidad
El parámetro que evalúa la vitalidad de los espermatozoides es útil para saber si los espermatozoides inmóviles están vivos o muertos. El porcentaje de espermatozoides vivos se puede determinar por varios métodos, siendo la coloración con eosina, el método más utilizado. Se mezcla una gota del semen con una gota del colorante con eosina al 0.5% en una lámina portaobjeto y se cubre con una laminilla, se deja reposar 30 segundos y se procede a contar 200 espermatozoides (coloreados y no coloreados), con una magnificación de 400x.
Los espermatozoides vivos tienen su membrana intacta que impide la penetración del colorante, en tanto que los muertos la coloración.

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Para determinar la concentración de espermatozoides por mL de semen y el recuento total, se utiliza el área central de la cámara de Neubauer. 

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Recuentro
Para el recuentro de espermatozoides se puede utilizar la cámara de Neubauer. Se cuentan en el cuadrante central que se utiliza para el recuentro de los glóbulos rojos. Como base en lo estimado en la observación inicial de la muestra, se diluye el semen, se llenan ambos lados de la cámara de Neubauer en 10µL de la dilución y se procede a contar con una magnificación de 200X a 400X.

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Espermatozoide con defecto de cabeza (doble)

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Espermatozoide con defecto de cabeza (doble)

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Representación esquemática de algunas anormalidades de los espermatozoides. Tomado y modificado del Manual de laboratorio de la OMS para el examen del semen.

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Morfología
La evaluación de la morfología de los espermatozoides consiste en el examen detallado de 200 espermatozoides en una placa coloreada con coloración de Papanicolaou o con coloración de Gram, por duplicado.
Se debe utilizar un objetivo ocular de 10X y un objeto de inmersión de 10X, seleccionando varias áreas sistemáticamente.  Según la OMS, es normal encontrar sólo el 30% de los espermatozoides normales en un individuo fértiles.

La evaluación de las anormalidades morfológicas debe incluir los defectos de la cabeza, del segmento intermedio, la cola y la presencia de gotas citoplásmicas mayores que 1/3 a 1/2 del tamaño de una cabeza normal. Para qu eun espermatozoide sea considerado normal, la cabeza, el segmento intermedio y la cola deben ser normales.

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En las muestras coloreadas también se identifica la presencia de otros tipos de células como son los leucocitos, las formas inmaduras de los espermatozoides, las células epiteliales del tracto uretral y de la próstata, y microorganismos.

La presencia de abundantes células poligonales cubiertas con bacterias sugiere que la muestra fue tomada por coitus interruptus y que las células tienen su origen en el epitelio vaginal.

Las "células redondas" que corresponden a formas inmaduras de los espermatozoides o a leucocitos se pueden confundir y su correcta identificación es de utilidad en algunas circunstancias.

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Espermatozoide con defecto de cola (doble)

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Espermatozoide con defecto de cola (doble)

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La aglutinación de los espermatozoides puede ocurrir cabeza con cabeza, segmento intermedio con segmento intermedio, cola con cola o puede ser mixta y se debe evaluar al momento de determinar la motilidad de los espermatozoides. Se puede informar semicuantitativamente en escala de cruces.

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Espermatozoide con defecto de cabeza (1); defecto de cabeza y segmento intermedio (2); defecto de cabeza y cola (3) y espermatozoides normales (4).

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Muestra de semen en la cual se observan células epiteliales vaginales, que indican que la muestra fue tomada por coitus interruptus.