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Práctica No. 4. Extracción de la caseína, determinación del 
punto isoeléctrico y precipitación salina de proteínas. 

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Práctica No. 4. Extracción de la caseína, determinación del 
punto isoeléctrico y precipitación salina de proteínas. 

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Objetivo general

Analizar el efecto del pH y la fuerza iónica sobre proteínas con solubilidad acuosa.

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a. Coloque aproximadamente 250 mg de caseína en un vaso de 50mL.

b. Agregue 20ml de agua destilada y 5 mL de NaOH 1N; agite hasta lograr una solución total de la caseína.

c. Una vez disuelta la caseína, se vierte en un matraz aforado de 50 ml, adicione 5 mL de ácido acético 1N y diluya con agua destilada hasta 50mL y mezcle bien.

d. La solución debe ser clara y limpia y si no es así, debe volver a filtrar.

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Preparación de la solución de caseína

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Recursos a utilizar en la práctica (Equipos / instrumentos) 

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Recursos a utilizar en la práctica (Equipos / instrumentos) 

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● Espectrofotómetro

● Potenciómetro (pHmetro)

● Centrífuga Materiales

● Diez vasos precipitados de 25 ml

● Dos vasos de precipitados de 50ml

● Un vaso de precipitado de 250ml

● Probeta de 50ml ● Matraz aforado de 50 ml ● pipeta graduada de 5,0 ml ● pipeta graduada de 1,0 ml ● pipeta graduada de 10,0 ml ● Embudo de vidrio mediano ● Papel de filtro ● Termómetro

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Parte I. Extracción de la Caseína.

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a. Caliente en un vaso de precipitado 150 ml de agua destilada a 38ºC, Añada 50mL de leche y luego gota a gota, con agitación, adicione ácido acético 1M hasta que observe que se forma un precipitado (la leche se corta).

b. Deje sedimentar y filtre sobre papel de filtro usando un embudo. Guarde el filtrado para realizar la Parte IV de esta práctica.

c. Lave el precipitado con 20mL de etanol en el mismo filtro. d. Seque el precipitado colocando varios pliegues de papel de filtro.

e. Coloque el precipitado en un vaso de precipitado pequeño previamente pesado, vuelva a pesar el vaso con el precipitado y luego adicione 5mL/g de éter etílico.

f. Filtre nuevamente.

g. Deseche el líquido quedando un precipitado blanco de fácil manipulación que es la caseína.

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Parte III. Determinación del punto Isoeléctrico de la caseína. 

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Parte III. Determinación del punto Isoeléctrico de la caseína. 

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a. En diez tubos de ensayo, limpios y secos adicione exactamente los volúmenes de los reactivos

b. Medir experimentalmente el pH de todos los tubos, que debe cubrir un rango aproximado semejante al teórico (3 a 6,5). Anotar los valores reales en la Tabla, que deben ser semejantes a los expresados y en todo caso crecientes.

c. Añadir 1 mL de disolución de caseína preparada en la parte II a cada tubo.

d. Agitar suavemente cada uno de los tubos y esperar aproximadamente 3 minutos.

e. Medir la absorbancia de cada muestra a 640 nm.

f. Graficar la absorbancia frente al pH, y determinar el punto Isoeléctrico experimental para los datos obtenidos

g. Consultar el punto isoeléctrico teórico de la caseína y compárelo con el punto isoeléctrico experimental obtenido. En caso de 29 presentarse variaciones cuales podrían ser las causas de las diferencias entre los puntos isoeléctricos teórico y experimentales.

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● Agua destilada

● Acetato sódico 0,1 N

● Ácido acético 0,01 N

● Ácido acético 0,1 N

● Ácido acético 1,0 N

● NaOH 1N ● Éter etílico ● Etanol al 70%

Leche 200ml

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Parte IV. Precipitación salina de Proteínas. 

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Parte IV. Precipitación salina de Proteínas. 

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a. Prepare 10 mL de una solución saturada de sulfato de amonio.

b. Tome dos tubos de ensayo adicione a cada uno 1,5 mL de la solución de sulfato de amonio saturada

c. A uno de los tubos adicione 1,5 mL del filtrado que guardo en la parte I de esta práctica. Al otro tubo adicione un 1,5 mL de la solución de caseína preparada en la parte II. d. Centrifugue y observe si se forma un pellet.

e. En caso de no observar precipitado adicione más solución saturada de sulfato de amonio e incube en un baño hielo hasta observar el precipitado.

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En esta práctica se va a estudiar el efecto del pH y la fuerza iónica sobre las propiedades químicas y estructurales de las proteínas.

Mediante el análisis del pH vs absorbancia por métodos

espectrofotométricos.