# data[].attributes.body
calibrazione micropipette (file1):
- sapere calcolare deviazione assoluta e e relativa e%
(materiale fornito: formule, tabella  fattore conversione Z e tabella tolleranze)

calibrazione spettrofotometro:
-(File2 e 3)sapere scegliere il grafico corretto in base ai dati (materiale: tabella Concentrazione e Assorbanza degli standards)
-(File2 e 3)saper calcolare la concentrazione del campione in base alla retta di taratura (materiale: equazione della retta e A del campione)
-(File 4) saper calcolare la concentrazione del campione con siero di calibrazione (materiale: concentrazione siero di calibrazione, Assorbanza siero di calibrazione, Assorbanza campione)

# data[].attributes.body
calibrazione pipette

calcolare dai grammi i volumi e deviazione sistemica relativa
confrontare con tabella i valori ottenuti

spettrofotometria

https://www.chimica-online.it/download/spettrofotometria.htm

# data[].attributes.attachment_link.description
La spettrofotometria (o spettrometria) UV-visibile si basa sull'assorbimento di radiazioni elettromagnetiche monocromatiche del campo del visibile e dell' UV da parte di molecole.

# data[].attributes.attachment_link.readable_text
Determinazione della concentrazione proteica totale di un campione

Metodo del biureto

Il Biureto è un'ammide che si ottiene per condensazione, a 180°C, di due molecole di urea con l'eliminazione di una molecola di NH ₃. I l biureto in soluzione alcalina forma con gli ioni Cu un complesso di colore violetto (reazione del biureto).

È stato osservato che questa reazione non è specifica solo del biureto, ma gli ioni Cu , in ambiente basico, reagiscono con qualsiasi composto contenente almeno 2 gruppi CONH ₂ , CH ₂NH ₂ o CSNH ₂.

Poiché la reazione richiede la presenza di due gruppi CONH ₂, questa è negativa con gli amminoacidi e con i dipeptidi mentre è positiva con i polipeptidi a partire dai tripeptidi, e quindi anche con le proteine.

I l Cu in soluzione alcalina però è instabile perché precipitano i sali di rame come Cu(OH) ₂. Quindi per stabilizzare i sali di Cu, Weichselbaum (1950) propose un reattivo contenente tartrato di sodio e potassio (sale di Seignette) e KI per impedirne l'autoriduzione.

L'intensità del colore è proporzionale al numero di legami peptidici interessati nella reazione. L'intensità del colore prodotto dalla reazione è proporzionale quindi anche alla concentrazione delle proteine, che potrà essere valutata per via spettrofotometrica (il complesso assorbe a 540 nm).

Preparazione del reattivo per il metodo del biureto

Sciogliere 1.5 g solfato di rame (II) e 6 g tartrato di sodio e potassio in 500 mL H O.

Aggiungervi 300 mL NaOH 10%.

Aggiungere 1 g KI (serve per inibire la riduzione del rame.

Conservare in contenitore al buio (o avvolto nell'alluminio), scartare nel caso si osservi un precipitato scuro o rossastro.

Retta di taratura con spettrofotometro

Preparare 2 mL di soluzione 10 mg/mL di BSA (albumina di siero di bovino) in H O. Da questa preparare differenti concentrazioni secondo la seguente tabella:

Misurare le Assorbanze delle varie concentrazioni: 100 L diluizione BSA + 500 L reattivo biureto, attendere 30 secondi e leggere l'Assorbanza.

Preparare una retta di taratura tra Assorbanza (y) e Conc. di BSA in mg/mL (x) tramite un foglio di calcolo Excel, con cui si può determinare l'equazione della retta di taratura y=mx+q interpolante i punti ottenuti.

Quantificazione del contenuto proteico dei campioni

Misurare l'assorbanza dei vari campioni preparando la cuvetta con 100 L campione + 500 L reattivo biureto, attendere 30 sec. mescolando leggermente prima della misura allo spettrofotometro.

Campioni per esempio di carne o pesce possono essere valutati pesando in una provetta circa 0,1 g (esattamente pesati) dell'omogeneizzato dell'alimento, aggiungendovi 1 mL SDS 10% e lasciando in estrazione per 1 ora. A quel punto centrifugare e valutare il solo sopranatante.

Per tali omogeneizzati, il bianco allo spettrofotometro va rifatto con 100 L SDS 10% + 500 L reattivo biureto.

Utilizzando la retta di taratura sarà possibile determinare le concentrazioni in mg/mL di proteine complessive nei campioni [x=(y-q)/m] considerando poi i vari fattori di diluizione utilizzati.

# data[].attributes.attachment_link.description
Metodo del biureto per determinare la concentrazione di proteine di un campione, analisi quantitativa di proteine, su TuttoChimica.it

# data[].attributes.attachment_link.title
Procedura operativa standard - Procedura Operativa Standard per Pipette

# data[].attributes.body
Glucosio

# data[].attributes.body
Yara

0,0998

0,0995

0,0999

0,1010

0,0978

0,0962

0,1003

0,1007

0,1009

0,1002

# data[].attributes.body
https://www.chimica-online.it/composti-organici/alanina.htm#

# data[].attributes.body
ANITA GASPARINI E DARIO

# data[].attributes.body
Avatar di %{name}
fANCHINI vERONICA