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젤 전기영동을 통해 제한효소의 역할을 이해하는 것이다.

*자세히 말하자면 DNA 복제했는데 그 부분을 막는 제한효소의 역할을 보는거임

결과적으로 원래 복제된 DNA 양보다 (비교군) 제한효소를 쓴 전기영동 실험의 DNA 양이 적어지게 됨.

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전기영동은 전극 사이의 전기장 하에서 용액 속의 전하가 반대 전하의 전극을 향하여 이동하는 화학현상입니다.
전기영동은 스웨덴의 생물리학자 아르네 티셀리우스가 1930년대 혈장단백질을 연구하는 과정에서 고안하였습니다. 아르네 티셀리우스는 전기영동을 응용한 분석법 고안의 공로를 인정받아 1948년 노벨 화학상을 수상하였습니다.

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세균은 자신의 세포질 내로 침투한 바이러스를 제한효소를 이용해 DNA를 분해하게 된다. 제한효소는 유전 공학에서 광범위하게 이용된다. 제한효소는 DNA의 특정 염기 서열(뉴클레오티드 서열)을 분해시킬 수 있기 때문이다. 이때 제한효소에 의해 인식되는 염기서열을 제한효소의 제한부위라고 명명한다. 제한효소가 인식하는 염기서열 또한 제한효소마다 다른데, 예를 들어서 ecoRI라는 제한효소는 6개의 염기서열을 인식한다. 또 다른 제한효소는 4개와 5개가 있기도 하다

출처:

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1. Abstract
2. Introduction
3. Material & Method
4. Result
5. Discussion
6. Reference

것이다. 그리고 vector의 경우, 전기영동 사진은 uncut사진과 cut사진의 비교가 필수적이다. 이는 uncut plasmid DNA가 Nicked , Linear, Covalently Bonded, Supercoiled, Circular single stranded 등 다양한 형태로 존재 할 수 있다. 하지만 uncut plasmid에서 Linear의 형태로만 존재할 수도 있기 때문에 제한효소 처리 후에도 절단되지 않았지만 전기영동 사진에서는 Linear의 형태로 나올 수 있기 때문이다.
실험에 대한 기타 보충설명
① 제한효소를 사용할 때 하나만 사용하면 잘라진 부위가 다시 붙을 가능성이 높다. 따라서 되도록 두 종류의 제한효소를 사용한다.
② 제한효소 사용 시, 서로 다른 제한효소가 각각 다른 buffer에서 활성을 갖는다면 제한효소 2개가 공통으로 갖는 buffer를 사용하도록 한다. (공통 buffer는 제한효소를 만든 산업체에서 나온 매뉴얼의 표를 참조하도록 한다.)
③ 같은 buffer의 사용도 중요하지만 같은 온도의 활성화는 더욱 중요하다. buffer는 서로 달라도 맞출 수 있지만, 온도의 경우 둘이 꼭 같아야 하기 때문이다.
④ 실질적으로 vector는 크기가 커서 제한효소에 의해 잘 절단되지만 insert는 크기가 작아서 vector에 비해 잘 절단되지 않는다. (vector 5677bp, insert 474bp) 따라서 insert의 제한효소 처리 시간을 더 주어야 한다.
⑤ Total volume 설정 시에는, D.W를 넣으면 희석이 되는 셈이므로 D.W를 최대한 안 넣을 수 있게끔 total volume을 만들도록 한다.
⑥ MCS에 있는 두 개의 효소인식부위(NdeⅠ,NheⅠ)를 이용하면 NdeⅠ, NheⅠ를 가진 외부 DNA를 클로닝할 수 있다. 이러한 방향성 클로닝은 외부 DNA를 벡터 안에 뒤집혀 들어갈 염려를 할 필요 없이 한쪽 방향으로 들어가도록 할 수 있다.
6. Reference
유전학의 이해 . Robert H.Tamarin 저. 전상학 외 역. 라이프사이언스 2003
분자생물학(2판). Robert F.Weaver 저. 박상대 역. 라이프사이언스 2003
최신 유전학. D. Peter Snustad, Michael J. Simmons 저. 김상구 역. 범한서적 2002
실험날짜
학 번
이 름
담당교수님
http://www.bioneer.co.kr/

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[기초유전학실험]6.DNA의 제한효소 처리 및 전기영동 - 시험/실험자료 레포트

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1. Abstract 2. Introduction 3. Material & Method 4. Result 5. Discussion 6. Reference 것이다. 그리고 vector의 경우, 전기영동 사진은 uncut사진과 cut사진의 비교가 필수적이다. 이는 uncut plasmid DNA가 Nicked , Linear, Covalently Bonded, Supercoiled, Circular single stranded 등 다양한 형태로 존재 할 수 있다.

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*전체실험은 pcr을 진행하기 전까지 아이스팩 위에서 진행한다.

1. DNA중합효소, 완충용액, 프라이머, 제한효소, 아가로스겔 파우더를 마이크로 피펫으로 정확히 측청한 후 pcr tub에 넣어준다.

2. 1X TEA에 아가로스겔 파우더를 넣고 전자레인지에 돌려준다.

3. 아가로스겔을 성형틀에 굳힌 후 전기영동 기기에 1X TAE를 채운 뒤 굳은 겔을 넣어준다. 제일 앞 홈에 비교 DNA 대조군을 2μl 넣는다.

4. 2μl씩 염료를 증폭 산물에 섞어 총 22μl를 전기영동 겔 홈에 차례대로 넣는다.

5. 채워준 겔을 100-150V로 30분정도 내리고 UVlight에 쬐여 결과를 확인한다.

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재료:

플라스미드 DNA, 제한효소, 아가로스젤, 완충용액, 프라이머, DNA염색약, 에탄올, DNA 중합효소

기구: pcr기기, 마이크로피펫, 라텍스 장갑, 전기영동 장치, 네임펜, 분무기(전용), 거름종이, 원심분리기, 약수저, 전자레인지, 아이스팩, 호일랩

출처:

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plasmid DNA, restriction enzyme, 10X reaction buffer(NaCl, TrisCl, MgCl2, Dithiothreitol, KCl 등 ), 10X PCR reaction buffer, 프라이머 (10pmol), Taq polymerase, D.W, 10X reaction buffer, 1XTAE buffer, 아가로오즈 겔 파우더 , gel red, DNA loading dye, DNA size marker(1Kb), spin column, lysis buffer, 70% 에탄올 , wash buffer ​

​ 가 . Polymerase Chain Reaction

나 . 제한효소작용 확인

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Plasmid DNA를 이용한 제한효소 처리 및 유전공학 기초 이해 > 실험주제별 갤러리

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plasmid DNA, restriction enzyme, 10X reaction buffer(NaCl, TrisCl, MgCl2, Dithiothreitol, KCl 등 ), 10X PCR reaction buffer, 프라이머 (10pmol), Taq polymerase, D.W, 10X reaction buffer, 1XTAE buffer, 아가로오즈 겔 파우더 , gel red, DNA loading dye, DNA size marker(1Kb), spin column, lysis buffer, 70% 에탄올 , wash buffer ​ ​ 가 .

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1X TEA 완충용액: DNA 전기 영동에서 RNA나 DNA의 핵산을 분리하기 위해 이용된다.

아가로스겔: 특정 매질에 전류를 흘려주어 음전하인 단백질의 이동수단으로 이용된다.

DNA 중합효소: DNA의 복제를 돕는 효소이다.

UV light 이용: 멸균에 이용된다.

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전기 영동은 스웨덴의 생물리학자 아르네 티셀리우스가 1930년대 혈청 단백질을 연구하는 과정에서 고안되었다.

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DNA 감식 : DNA 샘플이 동일인에게서 온 것인지 그 여부를 확인하기 위한 DNA 샘플을 분석하는 것으로 범죄현장 수사에서 활용되고 있다.

https://m.blog.naver.com/PostView.naver?blogId=ysi0722&logNo=223345860171&proxyReferer=https:%2F%2Fm.keep.naver.com%2F&trackingCode=naver_etc

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[檢 과학수사 리포트]④ "죽은 자는 말이 없어도 DNA는 진실을 말한다"

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檢 과학수사 리포트④ 죽은 자는 말이 없어도 DNA는 진실을 말한다 경찰 과학수사대와 달리 DNA 감정서 작성 구미 3세 여아 사망, 강호순 사건 단서 밝혀내 최근 5년간 감정한 DNA, 700건 이상 2020년 무기징역이 확정된 고유정 사건의 진상을 밝혀낸 데는 검

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*전체실험은 pcr을 진행하기 전까지 아이스팩 위에서 진행한다.

1. DNA중합효소, 완충용액, 프라이머, 제한효소, 아가로스겔 파우더를 마이크로 피펫으로 정확히 측청한 후 pcr tub에 넣어준다.

2. 1X TEA에 아가로스겔 파우더를 넣고 전자레인지에 돌려준다.

3. 아가로스겔을 성형틀에 굳힌 후 전기영동 기기에 1X TAE를 채운 뒤 굳은 겔을 넣어준다. 제일 앞 홈에 비교 DNA 대조군을 2μl 넣는다.

4. 2μl씩 염료를 증폭 산물에 섞어 총 22μl를 전기영동 겔 홈에 차례대로 넣는다.

5. 채워준 겔을 100-150V로 30분정도 내리고 UVlight에 쬐여 결과를 확인한다.