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1. ¿Cuáles son los pasos generales a seguir en la extracción de ácidos nucleicos?

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1. ¿Cuáles son los pasos generales a seguir en la extracción de ácidos nucleicos?

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El procedimiento general de extracción de ácidos nucleicos consiste en tres etapas consecutivas: disgregación de las células o tejidos (lisis celular), inactivación de las nucleasas intracelulares y en separación de los ácidos nucleicos de los demás componentes celulares.

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2. ¿Qué sustancias generalmente son empleadas en la extracción de los ácidos nucleicos?

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2. ¿Qué sustancias generalmente son empleadas en la extracción de los ácidos nucleicos?

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La fase acuosa y la orgánica se separan por centrifugación lo que permite aislar al ADN. Los solventes que se usan frecuentemente son el fenol, el cloroformo y el alcohol isoamílico.

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3. ¿Qué diferencias existen en la extracción de DNA y RNA?

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3. ¿Qué diferencias existen en la extracción de DNA y RNA?

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La extracción de ARN es una modificación de la extracción de ADN por fenol-cloroformo. La principal diferencia es el empleo de inhibidores de ARNsas con la idea de impedir la degradación del ARN por las endonucleasas intracelulares de la muestra o presentes en el material.

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4. ¿Qué cuidados se debe de tener presente entre un tipo de extracción y la otra?

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4. ¿Qué cuidados se debe de tener presente entre un tipo de extracción y la otra?

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Para la extracción de RNA tenemos que siempre cuidar la muestra de las RNAsas, procurando:
+) Usar siempre guantes y cambiarlos al momento de que se ensucien
+) No hablar al momento de pipetear soluciones con RNA ni cuando estemos manipulando cualquier reactivo a emplear durante la preparación
+) Usar tubos eppendorf y puntas de micropipeta que no se hayan tocado con las manos desnudas y que se les hayan eliminado los restos de RNAsas.
+) Manipular el material de vidrio previamente tratado para eliminar RNAsas con guantes
+) Emplear soluciones preparadas con agua y dietil policarbonato (DEPC)

Para la extracción de DNA
- Limpiar las áreas de trabajo con solventes como ácido clorhídrico, hidróxido de sodio y/o etanol
- Usar guantes de nitrilo
- Todos los materiales y soluciones deben estar estériles
- Se recomienda trabajar en campana de flujo laminar

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5. ¿A qué condiciones climáticas deben de almacenarse los ácidos nucleicos obtenidos?

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5. ¿A qué condiciones climáticas deben de almacenarse los ácidos nucleicos obtenidos?

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El material genético  conviene guardarse ya sea en sílica gel o en congelación a -80°C. Otro método igualmente útil es el nitrógeno líquido. Sin embargo, se ha visto que el proceso de congelación y descongelación afecta a la concentración del susodicho material

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7. ¿Cuál es el porcentaje de extracción de DNA o RNA para ser considerado como bueno?

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7. ¿Cuál es el porcentaje de extracción de DNA o RNA para ser considerado como bueno?

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La relación A260/280 es muy estable y se considera que un ADN de pureza óptima tiene un valor entre 1.8-2.0. Un ADN de pureza aceptable debe tener al menos una relación A260/280 > 1.6

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8. Si los reactivos que se utilizan en la extracción, se dejan con mayor tiempo de lo usual ¿Habría problemas? Justifica.

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8. Si los reactivos que se utilizan en la extracción, se dejan con mayor tiempo de lo usual ¿Habría problemas? Justifica.

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Sí, ya que para poder obtener el DNA tenemos que deshacer la proteína en la que esta rodeada, por lo tanto usamos una enzima que se encarga de eso, pero una vez hecho eso, no nos deshacemos de esa enzima también puede llegar a afectar al DNA, por esto ultimo hay un proceso en el cual lo lava y evita que se vea afectada.

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6. ¿Qué tipo de agua debe de utilizarse para almacenar el ácido nucleico?

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6. ¿Qué tipo de agua debe de utilizarse para almacenar el ácido nucleico?

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Agua con la mejor cantidad posible de sales, como el agua desionizada

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9. ¿Existen diferencias al extraer DNA o RNA de tejido o de células?

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9. ¿Existen diferencias al extraer DNA o RNA de tejido o de células?

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No , ya que el DNA se encuentra únicamente en los núcleos, en cambio el RNA se puede encontrar en otras partes como en el citoplasma. Por lo tanto los dos se pueden extraer de la misma manera, ya dependerá de lo que se quiera extraer.