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Aplicaciones médicas como la detección de agentes de enfermedades infecciosas a sensibilidades, especificidades y velocidades mucho mayores que los métodos alternativos

La sensibilidad de una sola molécula, ha proporcionado a los forenses criminales herramientas lo suficientemente poderosas para identificar individuos a partir de ADN residual en evidencia de la escena del crimen tan pequeña como colillas de cigarrillo, huellas dactilares manchadas o un solo cabello.

Los biólogos evolucionistas han hecho uso de la PCR para amplificar el ADN de muestras bien conservadas, como insectos encerrados en ámbar de millones de años, con secuenciación posterior y análisis filogenético, obteniendo resultados fascinantes sobre la continuidad y evolución de la vida en la Tierra.

Entre otras, las prosibilidades sin infinitas.

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Mtodologías para detectar directamente la producción

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Mtodologías para detectar directamente la producción

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Monitoreo de un cambio de fluorescencia directo o indirecto relacionados con la producción de amplicones por métodos ópticos.

El recipiente de la reaccion permanece sellado durante todo el proceso

La concentración final de amplicón tiene poca relación con la concentración de la plantilla inicial, los métodos en tiempo real muestran buenas correlaciones entre el número de termociclo en el que las señales claras son medibles, generalmente conocido como el umbral.

El método más simple para la detección de PCR en tiempo real se basa en el uso de tintes que se unen selectivamente y se vuelven fluorescentes en presencia de ADN de doble hebra, como SYBR green.

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Electroforesis en gel

Tinción con colorante

La hibridación de productos de PCR en microarrays o arreglos de perlas en suspensión se puede usar para detectar amplicones específicos cuando más de una secuencia de producto puede salir de un ensayo.

 Quimioluminiscencia

 Fluorescencia

Técnicas electroquímicas

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Una de las pruebas mas utilizadas en la actialidas utiliza esta técnica

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Coronavirus Test: Real time RT-PCR - Animation video

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Cuando en la  PCR se da un emparejamiento con un paso oreliminar de trascripcion inversa, se permite que las plantillas de  ARN se conviertan en ADNc y luego se sometan a PCR regular

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El proceso de PCR funciona mejor cuando los cebadores están a distancias cortas entre sí (de 100 a 500 pares de bases).

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La PCR surge de incorporar simultáneamente un segundo cebador cercano de polaridad opuesta (es decir, complementario a la hebra opuesta a la que se hibrida el primer cebador) y luego someter la mezcla de molde, dos cebadores (a altas concentraciones), ADN polimerasa termoestable, y tampón de polimerasa que contiene dNTP para ciclos repetidos de desnaturalización térmica

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PCR: Reacción en Cadena de la Polimerasa (divulgación científica IQOG-CSIC)

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La detección y evaluación de productos de PCR se puede realizar de varias formas, incluyendo electroforesis y tinción con colorante especifico de ADN.

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La PCR hace uso de una enzima termoestable, esto debido a los cambios de temperaturas que se dan durante el proceso de PCR en las diferentes etapas.

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(PCR de transcripción inversa)
Hace uso de la transcriptasa inversa para sintetizar ADNc de una cadena de ARN, esto puede ser útil para conocer si la molécula de ARN codifica para algún gen en especifico.

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Las ADN polimerasas requieren una hebra molde con un cebador hibridado que contiene un hidroxilo 3 'para comenzar la extensión de la hebra.

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Fue a quien se le dio el crédito por la conceptualización independiente de la tecnología madura y la previsión de las aplicaciones de la PCR.

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(Reacción en cadena de la polimerasa)
La reacción en cadena de la polimerasa permite la amplificación exponencial de una secuencia deseada mediante el uso de cebadores que se aparean con la secuencia de interés.