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Consiste em um espectrômetro de massas capaz de identificar microrganismos isolados em meios de cultura, de uma forma rápida e eficaz. Seu uso possui uma grande relevância e abrangência, contemplando áreas como a bacteriologia, micologia, oncologia, genética, química clínica, etc. Em grandes hospitais, a utilização de MALDI-TOF tem sido fundamental no diagnóstico e tratamento de infecções por microrganismos patogênicos, uma vez que torna mais rápida a escolha dos antimicrobianos mais adequados. Além de identificações taxonômicas, outras análises estão sendo estabelecidas através do uso deste equipamento, como por exemplo a identificação de cepas produtoras de enzimas relacionadas com a resistência a antimicrobianos (carbapenemases) e a análise de similaridade (baseada no perfil de proteínas ribossomais) entre cepas bacterianas, para estudo de populações microbianas.

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Resumidamente, o material biológico a ser examinado é colocado em uma matriz sólida polimérica, seguida da irradiação por raios laser de nitrogênio, os quais fazem com que a amostra sofra uma vaporização e ionização das moléculas. Esses vapores são aspirados e direcionados a um detector, o qual mede o tempo da chegada do material a este dispositivo gerando diversos picos. Para cada espécie, o detector cria um padrão de picos, denominado espectro de massa. Resultando na identificação da espécie.

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Estima-se que as infecções fúngicas sistêmicas e recorrentes afetam em torno de 3,8 milhões de indivíduos. No contexto hospitalar, as infecções sistêmicas e oportunistas representam um panorama complexo e preocupante, uma vez que está relacionada a importantes taxas de mortalidade, sobretudo em pacientes críticos.

Nesse contexto, diversos fungos, com ênfase para C. albicans, que representa em média 68% das infecções sistêmicas, estão relacionados aos agravos em saúde dos pacientes. Não obstante, o aparecimento de cândidas não-albicans (CNA) não-susceptíveis a diversos antifúngicos representam um desafio, que destaca a necessidade da rápida identificação e isolamento.

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O método consiste no uso de uma tira de plástico descartável contendo 20 pequenos compartimentos onde ocorrem as reações bioquímicas e colorimétricas

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A inoculação é pautada na reidratação dos substratos nos poços com a suspensão da amostra.

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O Sistema de Microbiologia Automatizado BD Phoenix destina-se à identificação rápida in vitro de leveduras e microrganismos leveduriformes.

O procedimento resume-se em realizar uma diluição da colônia suspeita de fungos, em meio de suspensão do frasco de identificação (que contém no kit), utilizando o padrão MacFarland, para então despejar nos poços da placa acima, tampar a placa, cadastra-la no aparelho e aguardar o resultado.

Essa técnica tem as seguintes vantagens:

✔Rapidez no resultado
✔Melhor precisão de identificação
✔Não é necessário nenhum teste adicional para diagnóstico
✔ Identifica 64 leveduras e organismos semelhantes
✔Avisa quando há identificação de espécies de alta importância clínica, como Cryptococcus sp.
✔Vários poços com testes de identificação bioquímica e meios de crescimento

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Entre 18 a 24h de incubação após a inoculação, os resultados são lidos de acordo com uma tabela de leitura;

A identificação é feita utilizando-se um sistema informático de identificação ou um catálogo analítico, onde se obtém a identificação do perfil numérico com sete algarismos, que é denominada de índice analítico de perfil (API)

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O programa é capaz de interpretar um grande número de perfis e permite a identificação de cerca de 600 espécies de bactérias e leveduras, como por exemplo o gênero Candida;

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"Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization–Time of Flight Mass Spectrometry: a Fundamental Shift in the Routine Practice of Clinical Microbiology"

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A importância da automatização do diagnóstico micológico no contexto de pandemia

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A importância da automatização do diagnóstico micológico no contexto de pandemia

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Ainda mais importante torna-se o tempo do diagnóstico no contexto pandêmico, em que os sistemas de saúde foram sobrecarregados, e a ocupação dos leitos críticos foram amplamente utilizados. Assim, os métodos automatizados na rotina micológica do setor de microbiologia emerge como uma importante ferramenta para testagem e otimização em larga escala de amostras, auxiliando no rápido cultivo de colônias e na rápida identificação de leveduras em sangue e líquidos corporais.

Tecnologias mais sofisticadas baseadas em métodos semi-quantitativos automatizados em espectrometria de massa e análise molecular são um dos exemplos de ferramentas utilizadas pelo laboratório de microbiologia para a ampla identificação de micro-organismos, incluindo os fungos. Essa plataforma, que é conhecida como MALDI-TOF MS (Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization-Time of Flight Mass Spectrometry) caracteriza a estrutura e a composição molecular de uma amostra, identificando os padrões de micro-organismos com base em amostras previamente caracterizadas.

Essas avanços representam uma adaptação dos métodos de análises manuais, os quais são considerados os padrões ouro; porém, que necessitam de maior tempo para execução.

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Nesse sentido, é importante destacar que os métodos atuais automatizados, semi-automatizados e baseados em biologia molecular trouxeram importantes avanços no cenário da microbiologia clínica, ainda que pouco difundidos; uma vez que auxiliam na otimização de tempo de diagnóstico, e reduzem as chances de erros, por abranger métodos extremamente sensíveis.

O tempo que, no contexto das infecções hospitalares causadas por fungos e da pandemia de COVID-19, é essencial, sobretudo para o tratamento de pacientes críticos localizados na Unidade de Terapia Intensiva.

Assim, ratificamos a necessidade de incentivo por parte das entidades públicas no que tange à implementação dessas modalidades diagnósticas, que facilitarão e otimizarão o diagnóstico micológico em larga escala, de forma a auxiliar na melhora do sistema público de saúde.

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O cartão YBC contém 30 poços. Destes 30, 26 contêm caldos bioquímicos e quatro contêm caldos de controle negativo. O cartão necessita de 24 horas, e em alguns casos de 48 horas, de incubação a 30°C em uma estufa e, em seguida, de uma única leitura depois de decorridas 24 horas, e em alguns casos de uma segunda leitura depois de 48 horas, no leitor/incubadora VITEK para uma análise dos dados. O cartão baseia-se nos métodos bioquímicos estabelecidos de Wickerham e Burton. Estes testes incluem a assimilação de hidratos de carbono, hidrólise de ureia, resistência a ciclo-heximida e redução de nitrato, que foram adaptados para serem utilizados no sistema VITEK.

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Vitek 2 YBC é um sistema automatizado que garante excelência na identificação microbiana de rotina e testes de suscetibilidade aos antimicrobianos (TSA) em microrganismos isolados de amostras clínicas. O sistema opera com cartões com códigos de barras, assegurando uma completa rastreabilidade e minimizando o risco de erros de transcrição. Com este sistema tanto o tempo de preparação como o tempo de resposta são reduzidos – tempo para o resultado de até 18 horas para os Gram negativos.

Benefícios
– Aumento da produtividade e segurança com automatização;

– Possibilidade de resultados no dia seguinte da coleta;
– Mais precisão nos resultados, trazendo mais confiança.