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Cada lote possui hemácias diferentes, SEMPRE olhar o diagrama e realizar controle de cada lote e remessa enviada!
O uso na rotina é de 28 dias, entretanto, é permitido guardar por um período maior afim de ter um fenótipo raro guardado, usando como hemoteca.

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NUNCA aqueça o Soro de Coombs (recipiente), mesmo que o teste seja realizado em banho maria.

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NUNCA aqueça o Soro de Coombs (recipiente), mesmo que o teste seja realizado em banho maria.

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Hemácias grupo O sensibilizadas com IgGs. Utilizadas no controle de qualidade ao final do teste de Coombs Direto ou Indireto com resultado negativo, que assegura que a etapa de lavagem das hemácias foi realizada corretamente.

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Devido aos grupos COOH- presentes nas membranas das hemácias, as mesmas possuem cargas negativas. Estas negativas repelem os eritrócitos uns dos outros em suspensões, sendo um fenômeno importante in vivo. Nas reações imunohematológicas, o Potencial Zeta, dificulta algumas reações de aglutinacão, necessitando de enzimas e potencializadores para sua visualização, nestas situações.

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São reagentes que facilitam a reação de hemaglutinação, facilitando a identificação dos anticorpos.

PEG: uma macromolécula que altera a constante dielétrica do meio, diminuindo o Potencial Zeta, facilitando a reação;

LISS: Meio que diminui a força iônica, facilitando a reação antígeno-anticorpo;

Albumina: assim como PEG, também é uma macromolécula que altera a constante dielétrica do meio, diminuindo o Potencial Zeta, facilitando a reação.

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Reagente utilizado para detectar anticorpos ligados a membrana de hemácias ïn vivo" (Coombs Direto), ou ïn vitro"(Coombs Indireto). Ele é um anti-anticorpo humano.

Soro Monoespecífico: contém anticorpos de apenas uma classe (IgA, IgG, IgM), ou contra uma fação do complemento. Normalmente da cor branca;

Soro Poliespecífico: contém anticorpos contra IgG e fração C3d do complemento. Normalmente da cor verde

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O Clorofórmio utilizado nessa técnica lisa as hemácias, "desliga" o Ac da hemácia, deixando-o livre no sobrenadante.

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O teste positivo aglutina, entretanto quando a reação é muito forte, muito positiva, tem capacidade de lisar as hemácias, ocorrendo hemólise.

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D fraco ou D parcial: chama-se D Variante!

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D fraco ou D parcial: chama-se D Variante!

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Necessária na metodologia em tubo, realizar pelo menos 3x e em amostras de cordão umbilical 6x (geleia de Wharton gera resultados falso-positivos).
Globulinas e substâncias como lipídeos, proteínas presentes no plasma, podem neutralizar o soro antiglobulina humana, provocando resultados falso-negativos. glutinação.

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"Quebra" da ligação entre o anticorpo que está ligado à hemácia e o antígeno correspondente.
A eluição concentra o anticorpo. Por isso, muitas vezes, mesmo com  o TAD  negativo ou fracamente reagente é possível identificar um anticorpo no eluato.

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Autoanticorpo -  anticorpo produzido pelo próprio sistema imune que reconhece suas células como estranhas/impróprias e reage contra as mesmas.

Aloanticorpo - anticorpo produzido a partir do contato com antígenos de indivíduos de mesma espécie.

Heteroanticorpo - anticorpo produzido a partir do contato com antígenos de indivíduos de espécies distintas.

Droga Induzido - anticorpo formado a partir de interações causadas pela ingestão/administração de determinados medicamentos.

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Pesquisa de anticorpos livres no soro - reação in vitro

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Pesquisa de anticorpos ligados  às hemácias - reação in vivo

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TERMOS

ANTICORPOS

Autoanticorpo

Aloanticorpo

Heteroanticorpo

Anticorpo Droga Induzido

COOMBS

direto/TAD

Indireto/PAI

REAGENTES

Soro de Coombs

Monoespecífico

Póliespecífico

Hemácias Controle  de Coombs

Potencializadores

PEG

LISS

Albumina

Eluato

Potencial Zeta

Lavagem das hemácias

Suspensão de hemácias

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Técnica complementar utilizada para identificar variantes de RhD.

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Aloanticorpo formado após a exposição de um indivíduo RhD- a hemácias RhD+, ou através de gestação.

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Proteína responsável pela expressão dos antígenos Rh. Na ausência dessa proteína, os antígenos Rh não se expressam, dando origem ao fenótipo Rh Nulo.

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Na ausência da proteína RhAG, os antígenos Rh não são expressos, sendo este o fenótipo Rh Nulo.
Essa condição leva a uma anemia crônica de severidade variável associada com esferocitose.

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Na figura abaixo podemos observar a esquematização das variantes de D, sendo essas, D normal, D fraco, D parcial (variante), D fraco parcial (variante fraca).
O D NORMAL é expresso com vários antígenos D, estes, com todos os epítopos na membrana da hemácia.
O D FRACO expressa somente alguns antígenos D na membrana, porém estes antígenos com todos os epítopos.
O D PARCIAL a membrana expressa os antígenos D  com ausência de alguns epítopos.
E o D FRACO PARCIAL a membrana expressa vários antígenos D porém com ausência de alguns epítopos.

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Existem 3 tipos de anticorpos anti-D:

POLICLONAL: é um anticorpo anti-D humano (IgM, IgG), porém, atualmente os fabricantes não estão mais fabricando este tipo de reagente.

MONOCLONAL: é um anticorpo anti-D voltado contra alguns epítopos ou a mistura de monoclonais contra a maioria dos epítopos (IgM, IgG).

BLEND: é a mistura de anticorpos IgM+IgG e/ou monoclonais+policlonais.

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Tabela nomenclatura antígenos Rh - Wiener

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Tabela nomenclatura antígenos Rh - Wiener

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Sistema Rh

Reagentes anti-D

monoclonal

policlonal

blend

Rh Nulo

Rh Ag

Anti-D

Antígeno Rh D

Eluição com Cloroquina

Variantes D

Normal

Fraco

Parcial

Parcial fraco

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A temperatura é um dos fatores que influenciam a reação de hemaglutinação. Este efeito influência a constante de equilíbrio e/ou velocidade da reação, dependendo da classe de anticorpo envolvida.
Com a diminuição da temperatura para 24ºC, ou mesmo 4ºC, facilita a reação dos anticorpos de classe IgM.
O preaquecimento ou manutenção da temperatura em 37ºC proporciona a temperatura ideal para detecção do anticorpo IgG, ao mesmo tempo que impede a reação da maioria dos anticorpos IgM. Os anticorpos IgG possuem significado clínico, pois sua reação ocorre a temperatura corporal, simulando a reação in vivo.

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Muitas estruturas associadas à membrana das células sanguíneas e dos constituintes do plasma podem ser definidas como antígenos, por terem capacidade de reagir com anticorpo complementar ou receptor celular. Em sua maioria, esses antígenos também são imunógenos, pois são capazes de desencadear uma resposta imunológica mediada por anticorpos, se introduzidos como substância estranha em um hospedeiro responsivo. Os antígenos eritrocitários em sua maioria são glicoproteínas, lipoproteínas e glicolipídios, desempenhando diversas funções celulares, como receptores, canais, moléculas de adesão, proteínas estruturais, entre outras.

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https://www.isbtweb.org/

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Até a data de 03/02/2021 foram publicados na ISBT , 43 sistemas de grupo sanguíneos.

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Prova Direta:  pesquisa  a presença ou ausência de antígenos fixados nas hemácias do paciente. Deve ser feita com soro Anti-A, Anti-B e Anti-AB.

Prova Reversa: pesquisa a presença ou ausência dos anticorpos Anti-A, Anti-B ou Anti-AB no soro ou plasma do paciente. Deve ser feita com hemácias tipadas A e B.

Autocontrole/Auto-prova:    utilizado o soro e a suspensão de hemácias do próprio paciente para avaliar se existe a formação de auto-anticorpos.

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Reage bem tanto à frio quanto em T.A. quanto em 37°C com forte intensidade de aglutinação.

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Capacidade de reagir bem em diferentes temperaturas. Tanto em T.A. quanto em AGH (37°C). Por isso esses anticorpos tem relevância transfusional, já que podem reagir in vivo.

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Proteína afuncional, não adiciona carboidratos à estrutura H.

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Substâncias adicionadas ao teste com objetivo de facilitar a interação entre  o antígeno e o anticorpo e aproximar as hemácias, favorecendo dessa forma a aglutinação e encurtando o tempo de reação.

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Técnica em Gel
Resultado positivo: presença de aglutinação/interação antígeno-anticorpo.
Resultado negativo: ausência de aglutinação

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                                                                                             ANTICORPOS e suas caraterísticas....

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                                                                                             ANTICORPOS e suas caraterísticas....

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São formados desde o nascimento, a partir do contato com as substâncias do próprio organismos ou as de fora dele!  Um anticorpo é formado como resposta de um contato à uma estrutura/antígeno diferente ao que temos em nosso organismo. Geralmente vai ocorrer em pacientes que se submeteram à transfusões sanguíneas prévias, engravidaram ou abortaram ou ainda que por alguma outra doença de base/desequilíbrio imunológico reconheceu suas próprias células como estranhas e produziu anticorpos contra elas.

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São formados após contato com antígeno que não possuímos na estrutura de nossas células. São substâncias consideradas diferentes/estranhas e então são formados anticorpos para "combatê-las"

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Não é necessário contato com o antígeno para o desenvolvimento da resposta. Sua produção é induzida por polissacarídeos de bactérias ou lectinas de vegetais e que são parecidas com os seus antígenos, um clássico exemplo é o do sistema ABO.

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Anticorpos produzidos pelas próprias células do paciente!
A maioria (80 a 90%), reage mais facilmente com seus alvos em temperaturas próximas a corporal (37°C), sendo esses anticorpos denominados autoanticorpos quentes.  Os demais, chamados de autoanticorpos frios, são autoaglutininas frias, ou crioglobulinas, que reagem com seus alvos em temperaturas abaixo de 37ºC

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É o nome dado a qualquer anticorpo surgido em um membro de uma espécie contra um antígeno alotípico de outro membro da mesma espécie. Os aloanticorpos correspondentes aos antígenos de grupo sanguíneo podem ser divididos em duas categorias: naturais e imunes

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Sensibilidade - Capacidade do reagente de aglutinar, reagir ou se unir com o antígeno ou o anticorpo;
Especificidade - capacidade do reagente de aglutinar especificamente apenas com o antígeno ou o anticorpo correspondente; o intensidade de Aglutinação -
É o grau com que o anticorpo é capaz de aglutinar, reagir ou se unir ao antígeno;
Avidez -
Determinada pela velocidade e grau com que o anticorpo é capaz de aglutinar, reagir ou se unir ao antígeno;
Título -
Avaliado através de reações obtidas em diluições seriadas do antissoro na razão 2 contra hemácias específicas. O título é definido na última diluição que apresenta intensidade de aglutinação de 1+ e corresponde ao valor inverso da mesma;
Escore -
Sistema de gradação numérico para hemaglutinação. A soma dos graus de aglutinação obtidos em uma titulação representa o escore.

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Os grupos sanguíneos são definidos por antígenos espécie-específicos presentes na superfície dos eritrócitos. A maior parte dos antígenos é um componente integral de membrana composto por carboidratos complexos associados a proteínas ou lipídeos inseridos na membrana eritrocitária, sendo denominados de glicoproteínas ou glicolipídeos. Entretanto, estes antígenos também podem estar presentes nas plaquetas, nos leucócitos, nos tecidos e em fluídos (soro, saliva) do organismo. Contudo, a especificidade sorológica nestes casos é determinada pela estrutura do carboidrato.

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Pesquisa de anticorpos irregulares - PAI

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Pesquisa de anticorpos irregulares - PAI

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Tem a finalidade de detectar no soro ou plasma da amostra em teste os anticorpos irregulares presentes contra os antígenos (conhecidos) das hemácias de triagem.
Baseia-se na reação de aglutinação ou hemólise de hemácias de triagem em presença do soro ou plasma do doador ou receptor de sangue.

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É o controle realizado diariamente a cada lote de testes e para cada técnica utilizada no laboratório Tem como objetivo avaliar a reprodutibilidade do teste, a performance dos reagentes, a metodologia e as técnicas utilizadas.

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Técnica em Tubo
Resultado positivo: Presença de aglutinação/interação antígeno-anticorpo.
Resultado negativo: ausência de Aglutinação

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Transfusões em pacientes com                                                                                                         fenótipo Bombay

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Transfusões em pacientes com                                                                                                         fenótipo Bombay

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Pessoas com esse fenótipo só podem receber hemocomponentes com fenótipo igual, ou seja, com a deficiência da Enzima H.
O individuo com essa deficiência apresenta altos títulos de Anti-H!

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Logo, com o alelo inativo, essa substância precursora falha, não  ocorrendo qualquer transformação no antígeno H, não desenvolvendo os Ag A, Ag B e Ag H em suas hemácia, um falso O!

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A expressão dos genótipos do sistema sanguíneo ABO está relacionada com o lócus gênico denominado H, existente no cromossomo 19.
Esse alelo H produz uma enzima que transforma a substância precursora em antígeno H, no qual é transformado em antígeno A ou B.

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Presença ou ausência de Antígeno na membrana da hemácia!

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Moléculas presentes na superfície das hemácias, além de tecidos, fluidos, saliva...

No plasma, encontra-se anticorpos contra Antígenos que não possuímos.

Obs: Não é recomendado realizar prova reversa em  RN até os 4 meses já que os Ac ainda não foram completamente formados e em quantidade suficiente.

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São anticorpos testados no plasma titulados como hemolíticos!

Transfusão de plaquetas sem respeitar ABO não traz grandes riscos ao paciente, pois, há pouca PLT/mm³. Mas, deve-se ter cautela afim de evitar a destruição das plaquetas transfundidas pelos anticorpos ABO presentes no plasma do receptor.

O cuidado é maior na Aférese, por ser uma quantidade maior de células, do mesmo doador, o risco aumenta.

O IDEAL é SEMPRE respeitar a tipagem e realizar transfusão isogrupo.

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Aglutinina fria, também chamada de crioaglutinina, geralmente são IgM e reagem abaixo da temperatura corporal.

Classe geralmente AGLUTINANTE!

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Aglutinina quente, geralmente são IgG ( que atravessam a barreira placentária). A reação ocorre em temperatura corporal (37°C).

Geralmente NÃO são aglutinantes.

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É a propriedade do organismo de permanecer em equilíbrio mesmo quando ocorrem mudanças radicais no meio externo. É por exemplo, uma resposta do corpo para a prevenção e interrupção de sangramento e hemorragias que garante a fluidez do sangue e a integridade dos vasos sanguíneos.

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Membrana Celular da Hemácia

Proteína"

Carboidrato"

Hemolisinas"

Anticorpos

Naturais"

Irregulares"

Autoanticorpos"

Aloanticorpos "

Frios "

Quentes "

Amplitude Térmica"

Prova

Direta"

Reversa"

Autocontrole"

PAI - Pesquisa de Anticorpos Irregulares"

Temperatura/Fase dos testes

T.A.

AGH

Intensidades de Aglutinação"

Potencializadores"

Bombay"

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Obrigatórios:

Tipagem sanguínea ABO e RhD

Pesquisa de anticorpos irregulares (PAI)

Prova Cruzada

Testes sorológicos para: Hepatite B, Hepatite C, Doença de Chagas, Sífilis, HIV 1 e 2, HTLV I/II.

Recomendados

Fenotipagem pelo menos (C,c,E,e, K)

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É um teste que determina se os eritrócitos foram fixados in vivo (opsonizados) por imunoglobulinas, complemento, ou ambos. É usado principalmente na investigação de: Reações transfusionais hemolíticas; Doença hemolítica do recém nascido; Anemia hemolítica auto-imune; Hemólise induzida por drogas.

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A seleção de hemocomponentes deve ser ABO compatível. Nos pacientes RH(D) negativos também deve haver a compatibilização do sistema Rh. O teste de compatibilidade transfusional visa a identificação da compatibilidade/incompatibilidade entre antígenos das hemácias do doador com os anticorpos presentes no soro/ plasma do receptor.

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Ligação cruzada de células ou partículas grandes por anticorpos contra antígenos de superfície.
As reações de aglutinação são utilizadas para classificar hemácias.

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É o desenvolvimento de anticorpos após a exposição do indivíduo a antígenos não próprios. Temos como exemplo a transfusão de sangue incompatível e em algumas gestações.

# data[].attributes.body
Grupo de proteínas séricas ativadas em sequência por complexo antígeno-anticorpo ou por produtos bacteriano e responsável por muitos mecanismos biológicos de de defesa, como lise, opsonização, quimiotaxia de leucócitos, etc
* C3d - um dos produtos da clivagem de C3, liberados na circulação , indicam bom prognótico.

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Componentes da via terminal do complemento que formam um complexo macromolecular estável, servindo como blocos de construção para o componente final e lítico do complemento (C9)
Complexo formado pelos componentes do complemento que formam um poro na membrana da célula alvo e provoca citólise ou apoptose.

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Capacidade de um antígeno de desencadear resposta imune.
* As características dos antígenos que determinam sua imunogenicidade são o grau de estranheza, tamanho, pH e o ambiente iônico, complexidade antigênica, número de epítopos disponíveis ou determinantes antigênicos.

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                                                                                      Fagocitose

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                                                                                      Fagocitose

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Macrófagos do baço, fígado e da medula óssea fazem a fagocitose de eritrócitos em processo de degradação. A fagocitose é um processo em que o leucócito engloba e depois realiza a digestão intracelular do micro-organismo invasor/hemácia.

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                                                                                      Opsonização

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                                                                                      Opsonização

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* Processo em que Ac ou fragmentos do complemento são fixados na superfície de microrganismos/células que devem ser eliminados, nesse caso as hemácias e os recobrem, facilitando o reconhecimento e posterior destruição pelas células responsáveis por essas ações (os fagócitos, na maioria das vezes). IgG é o principal Ac presente nesse processo e tem a maior capacidade opsonizante.
*O sistema complemento ativado tem como uma das funções a opsonização. Acontece como um complexo Ag-Ac,  as opsoninas se ligam à superfície do antígeno e depois todo o complexo é fagocitado. .

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* Sistema de classificação dos diferentes tipos de sangue. A identificação do grupo sanguíneo é fundamental, tanto para que possam ser identificados os hemocomponentes a ser transfundidos... quanto para identificar qual é o melhor hemocomponente /  mais parecido no momento da transfusão no paciente.
* Alguns dos antígenos dos grupos sanguíneos mais imunogênicos:  A, B, D, K, Fya, Fyb, Jka, Jkb, s....

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Estruturas compactas que carregam a informação genética. Cada um é constituído por uma longa e linear molécula de DNA associada a proteínas.
Cromossomo 1= Rh
Cromossomo 9= ABO
Cromossomo 19 = H
Cromossomo Filadélfia: translocação do 9 com 22, ABO "fraco"
* Os produtos dos genes H e ABO interagem

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Unidade de hereditariedade, pois contêm as informações, que são transferidas dos pais para os filhos , necessárias para orientar a produção de moléculas de RNA e proteínas, que são determinantes na formação de todo o organismo.
* O conjunto de todos os genes presentes em um indivíduo é denominado de genótipo.

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Sistema Complemento Ativo -> fragmentação -> clivagem do componente central = C3

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Sistema Complemento Ativo -> fragmentação -> clivagem do componente central = C3

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Ativa a cascata de C1 até C5
Anticorpo + Complemento = marcação para a fagocitose, ocorre OPSONIZAÇÃO, marcação da membrana para ser fagocitado, "chama" o macrófago!

Opsonização das hemácias por Ac IgG + fixação complemento.

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Ativa cascata de C1 até C9
C9= complemento capaz de provocar lise celular.

Transfusão de hemácias com Ag em indivíduo que possui Ac pré formado;

Ac esses da classe IgG, ótimos em fixar complemento;

Ac Rh não fixam complemento;

Reação com liberação de ferro, formação de dímeros= sobrecarga renal!

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ANTICORPOS (Ac)... são formados como resposta de uma imunização!

# data[].attributes.subject
ANTICORPOS (Ac)... são formados como resposta de uma imunização!

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* São moléculas que atuam na defesa do organismo, produzidos pelos plasmócitos e que podemos diferenciar cinco classes  IgM, IgG, IgA, IgD  e IgE. Sendo IgM e IgG de maior incidência e significado clínico nas pesquisas imuno-hematológicas.
* Soro da antiglobulina humana podem detectar Ac que não causam aglutinação direta nas hemácias.
*  Os anticorpos ABO são naturais, ou seja, não é necessário contato prévio através de transfusões sanguíneas ou gravidez para adquirir os mesmos. Para os demais, chamados de anticorpos irregulares, deve haver exposição aos antígenos ( que o receptor não possui) para a formação dos anticorpos.

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Co-dominância: heterozigoto, indivíduo ABO expressa ambos os alelos, não há "ABO recessivo".
* Não existe dominância e recessividade entre grupos sanguíneos.

# data[].attributes.body
* São substâncias produzidas em resposta a toda substância estranha ao organismo que desencadeia a produção de anticorpos.
* Um antígeno é qualquer substância que pode ser especificamente ligada por uma molécula de anticorpo

# data[].attributes.body
Molécula presente na superfície da hemácia, podendo provocar uma resposta imune e induzir a produção de anticorpos específicos.

# data[].attributes.body
Antígeno "

Anticorpo "

Gene "

Cromossomo "

Sistema de grupo sanguíneo "

Imunogenicidade"

Aloimunização "

Sistema complemento "

Exames Pré e Pós Transfusionais "

Teste Antiglobulina Direto (TAD) "

Complexo ataque a membrana "

Hemólise                                                           - Intravascular  "                                                - Extravascular "

Compatibilidade"

Opsonização "

Fagocitose "

Aglutinação "

Fenótipo"

C3d"

IgM "

IgG "

Hemostasia"

# data[].attributes.headline
Capítulo 1:                                           Bases da Imuno-Hematologia 

# data[].attributes.subject
Capítulo 1:                                           Bases da Imuno-Hematologia 

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- HÉLLEN
- SABRINA
- KEITY
- SÉRGIO
- CAMILA

# data[].attributes.body
CASO TENHA ALGUMA DÚVIDA DE CMO FAZER A ATIVIDADE, FAVOR ASSISTIR.

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Construção de mural colaborativo com Padlet

# data[].attributes.headline
Fenótipo - A fenotipagem eritrocitária é um fator de suma importância!!!

# data[].attributes.subject
Fenótipo - A fenotipagem eritrocitária é um fator de suma importância!!!

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O fenótipo é a expressão  do genótipo. Não é  determinado apenas pelos
genes, sofrendo influência também do meio no qual esteja  inserido um indivíduo.

* Um exemplo que gera confusão é o tipo sanguíneo.  O fenótipo  nesses casos se apresenta como os antígenos que estão presentes na membrana das células sanguíneas. Além do ABO é possível identificar qual o fenótipo de um determinado paciente ou doador de diversos outros grupos sanguíneos. Assim, é possível " encontrar" bolsas com fenótipo mais parecido possível para cada paciente, ou até mesmo  evitar alguns fenótipos caso o paciente tenha algum anticorpo para determinado antígeno eritrocitário.

# data[].attributes.body
São duas classes de  imuno-
-globulinas, que desempenham
diferentes funções na defesa imune.
A IgM é um pentâmero encontrado no soro e é extremamente eficiente na ativação do complemento. É o anticorpo produzido nas fases iniciais na resposta imune.
A IgG é um monômero e representa o principal anticorpo no soro e nos tecidos (exceto mucosas), onde inativa patógenos diretamente e por sua interação com as moléculas efetoras, tais como complemento e receptores Fc. Os anticorpos de classe IgG indicam que o paciente já teve contato com o antígeno em questão.

# data[].attributes.body
Mesmo com o uso de muitos potencializadores, como albumina ou enzimas e a etapa final de centrifugação, muitos anticorpos IgG continuam incapazes de produzir diretamente hemaglutinação detectável. Para visualizar estes anticorpos, é preciso utilizar antiglobulinas humanas reagentes (AGH), que contém anticorpos específicos para imunoglobulinas humanas ou componentes do complemento. Os anticorpos presentes nos soros com AGH agem como pontes entre os eritrócitos já sensibilizados com o anticorpo ou complemento, para produzir uma rede em treliça, característica do segundo estágio da hemaglutinação. Esta é a base do teste de anti-globulina humana (TAD)

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Os Antígenos Rh são exclusivamente eritrocitários. O antígeno é composto por uma lipoproteína que atravessa a membrana eritrocitária 12 vezes. As regiões extracelulares desta proteína representam os sítios de polimorfismo responsáveis pelos D parciais. Já as regiões transmenbranas e intracelular são responsáveis pelos fenótipos D fraco.