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El protocolo de este tipo de proceso es muy variado dependiendo de la técnica a realizar. En uno de las situaciones los pasos a seguir son:

1. Aislar las células de interés en un tubo de ensayo (usando el citómetro de flujo por ejemplo) como son los basófilos.
2. Agregar al mismo tubo una concentración conocida de alérgeno.
3. Medir la concentración de histamina en el medio.

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Los resultados de esta técnica se van a poder obtener tras el paso de cierto tiempo desde que las células se exponen al alérgeno. Se podrá valorar el nivel de histamina en el medio u observar si los basófilos y los linfocitos han sufrido modificaciones.

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Es importante en este caso realizar un control negativo, al tener una prueba en la que estas células tengan el mismo tratamiento pero en un caso no se expongan a los alérgenos y en el otro si estén expuestos.

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Ante la presencia de un alérgeno en concreto, se va a medir la respuesta celular a través de la medición de la concentración de sustancias que liberan. Se aíslan basófilos, linfocitos o eosinófilos. Las pruebas que se pueden hacer son:

- Test de liberación de histamina (TLH)
- Test de activación de basófilos (TAB)
- Test de transformación linfocitaria

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Para poder realizar una determinación de IgE por ELISA se deben seguir estos pasos de manera general:

1. Fijar en una placa ELISA anticuerpo Anti-IgE.
2. Agregar el suero del paciente.
3. Añadir anticuerpo Anti-IgE con peroxidasa acoplada.
4. Agregar el sustrato de la enzima y leer fluorescencia.

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Para este tipo de pruebas es necesario contar con un control positivo que siempre va a reaccionar en el test serológico (normalmente un ELISA) para saber que la técnica se ha realizado correctamente, pero también se tendrá un control negativo para descartar un positivo por contaminación.

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Cuando se produce una reacción alérgica se producen diferentes moléculas en el torrente sanguíneo, siendo una respeuta inmunitaria ante este agente extraño. Es por ello que estas pruebas se fundamentan en detectar estas moléculas que se producen en respuesta al proceso alérgico. La prueba más común es la determinación de IgE, aunque también se puede determinar otras Ig.

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Consiste en la exposición de sustancia que puede producir una reacción alérgica con la piel. Para que pueda penetrar correctamente se perfora la piel para pasar la barrera primaria del organismo.

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En el Prick Test se debe contar con un control positivo (principalmente histamina) para conocer que el test es válido. También se agregará un control negativo usando suero con el mismo tipo de aguja para descartar una reacción al material de esta.

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1. Se limpia la zona con alcohol y con una gasa.
2. Se señala la piel con un rotulador de punta fina
3. Se coloca al paciente de cubito prono.
4. Con una lanceta atravesar un alérgeno y la piel simultaneamente.
5. Esperar los resultados.

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1. La solución se inyecta por vía intradérmica con una aguja 26G o 0,45 mm.
2. Este tipo de pruebas deben iniciarse inyectando 0,02-0,05 de solución con alérgenos en una dilución 1:10.000 seguida de 1:1.000, 1:100 y 1:10 y de esta manera se forma en el lugar de la inyección la denominada pápula primaria, con un diámetro de 3 mm.
3. El resultado debe leerse cuando la reacción es más intensa, después de 15-20 min.

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¿Cómo se realizan las pruebas de alergia?

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1. En una habitación cómoda y con equipo de respuesta ante emergencias, sentar al paciente.

2. Administrar de manera aspirada, de contacto ocular o ingiriendo la sustancia de estudio (con colirios o con mascarillas de administración).

3. Esperar 30 minutos - 1 hora para valorar una posible respuesta (anotar cualquier efecto que se produzca)

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¿Qué son los test de provocación a medicamentos? ¿Cuándo han de utilizarse?

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Los resultados se podrán ver a simple vista tras administrar la sustancia a estudio.

- Se puede presentar conjuntivitis o rinitis en el caso de alergia a un colorio.
- En el caso de medicamentos o alimentos ingeridos se puede presentar vómitos, diarreas, fiebre y en casos graves una anafilaxis. (Se debe responder médicamente)

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Esta técnica puede ser inocua, pero también puede suponer un gran riesgo para la vida de un paciente. En caso de shock anafiláctico grave se debe responder de una manera rápida, y es por eso que se debe hacer siempre en un ambiente hospitalario.

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Se puede aplicar un control negativo al exponer a un paciente a otra sustancia la cual se sabe que no es sensible, y siempre con el mismo tipo de material. Aunque no es lo común.

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-Con esta prueba se administra a un paciente el posible alérgeno y se espera a la posible reacción. De esta manera se confirma la reacción y el diagnóstico.

-Se puede administrar de manera oral ingiriendo (medicamento o alimento) para detectar una intolerancia.

- Se puede aplicar en el ojo con colirios especiales. (en busca de rinitir)

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La reacción que debe valorarse es el habón o pápula.  Los resultados se comparan con el control negativo, considerando una prueba positiva si la pápula tiene un diámetro de menos de 3 mm de dicho control.
Si el habón es 1-2 mm de diámetro, con eritema y picor, pueden considerarse que hay reacción inmunológica o sensibilización.

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La técnica del prick-test fue introducida por Blackley a finales del siglo XIX y descrita por primera vez por Lewis y Grant en 1924 pero no fue hasta 1975 cuando, tras las modificaciones realizadas por Pepys, se generalizó su uso.

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1. Con la piel limpia y sin ningún tipo de loción aplicar el parche con antígenos alimentarios en la espalda (se colocará uno sin ellos de control).
2. Transucrridas 24 horas, se marcará en la espalda el contorno de la pegatina para tener una referencia de la posible inflamación.
3. Transcurridas 48 horas se retirará la pegatina y se valorarán las erupciones (siempre 30 minutos después de retirarlo para evitar que se confunda con una irritación por la pegatina)

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Esta prueba se mantiene en la piel durante 48 horas. Se retira en presencia de un alergólo o dermatólogo y se valoran la erupciones en la piel. Se medirá el diámetro de las reacciones para valorar el alcance de la alergia.

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Al paciente se le coloca un parche sin ningún tipo de antígeno para descartar una reacción al propio parche. Además, también se usa un control negativo con una sustancia que nunca debería reaccionar.

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En esta prueba se aplican parches con antígenos a diferentes alérgenos. Sobre todo se centran en alergias alimentarias. Este parche se coloca en la espalda durante 48 horas y se valorará la reacción dérmica que se pueda tener a estos antígenos.

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Los resultados se van a poder visualizar a través del informe analítico, al observar la concentración de IgE. En el caso de adultos debe ser menos a 100 UI/ml, pero si se supera se podrá considerar un positivo y concluir que se está ante un proceso alérgico.

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Después de unos 20min, se examina el área en busca de una reacción en el sitio. La reacción típica se asemeja a una pequeña urticaria con inflamación y enrojecimiento.

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Aunque la prueba de la piel puede parecer un procedimiento benigno, tiene algunos riesgos que incluyen urticaria hasta la asfixia en casos más extremos.
Los antihistamínicos que se usan comúnmente para tratar los síntomas de alergia interfieren con las pruebas cutáneas ya que pueden evitar que la piel reaccione a los alérgenos que se están probando.

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El control positivo se usa para:
- Detectar la inhibición de la reacción cutánea a fármacos o enfermedades asociadas.
- Identificar casos de reacción débil a la histamina.
El control negativo se usa para:
- Dermografismo
- Reacción cutánea causada por el instrumento empleado para las pruebas.

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La finalidad en estas técnicas es la cuantificación de diferentes proteínas en el suero que están relacionados con los procesos alérgicos.

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Las soluciones con alérgenos se inyectan por vía intradérmica con una aguja 26G (0,45 mm). Las pruebas intradérmicas deben iniciarse inyectando 0,02-0,05 ml en una dilución 1:10.000, 1:1000, 1:100, 1:10.

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Exponer a una persona ante una sustancia a la que puede tener reacción bajo circunstancias controladas. Estas sustancias pueden ser ingeridas, aspiradas o aplicadas en los ojos.

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Aplicación de parches en la espalda con una baja concentración de antígenos.

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Es una de las pruebas más comunes, la prueba de alergia intradérmica consiste en provocar una pequeña y controlada reacción al inyectar una pequeña cantidad de alérgeno en la piel.

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Es una prueba rápida, sencilla, de elevada especificidad y sensibilidad, de alta fiabilidad y de bajo coste, que resulta muy útil para confirmar una sospecha diagnóstica de alergia

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Con la prueba celular se aíslan las células responsables de la respuesta alérgica y se exponen a una sustancia concreta. Se busca la estimulación ante esta sustancia para conocer si son sensibles a su presencia o no.

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42. Los análisis de sangre para el estudio de la alergia. Dra. María José Goikoetxea Lapresa