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OBSERVACION EN MEDIOS DE CULTIVO LIQUIDOS

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OBSERVACION EN MEDIOS DE CULTIVO LIQUIDOS

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1. Enturbiamiento homogéneo en el caldo de cultivo.

2. Enturbiamiento heterogéneo formando grumos.

3. Formación de un grumo compacto en el fondo del tubo y el resto transparente.

4. Desarrollo en la superficie formando un velo o película.

5. Aparición de color en el medio de cultivo debido a la síntesis de pigmentos difusibles.

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OBSERVACION EN MEDIOS DE CULTIVO SOLIDOS

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OBSERVACION EN MEDIOS DE CULTIVO SOLIDOS

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CARACTERISTICAS
TAMAÑO

1. Tamaño pequeño: colonias puntiformes con aproximadamente 0,5 mm de diámetro o inferiores.

2. Tamaño mediano: de 1 a 2 mm de diámetro.

3. Tamaño grande: de 4 a 6 mm de diámetro.

4.  Tamaño muy grande: colonias extendidas en forma de velo invadiendo toda la superficie del medio de cultivo.

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1. Cromóforos: el pigmento está contenido en el protoplasma y no colorea a la colonia ni al medio, propio de sulfobacterias. Ej.: Chromatium okenii

2. Paracromóforos: el pigmento está en la pared de la célula y por lo tanto la colonia aparece coloreada. Son pigmentos no difusibles y limitados a la bacteria y por ende, a la colonia. Ej.: Staphylococcus aureus.

3. Cromóparos: el pigmento es segregado al exterior de la célula y difunde al medio de cultivo que resulta por lo tanto coloreado. Ej: Pseudomona aeruginosa.

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Es el aspecto general simplificado que adquieren las colonias, pueden ser puntiforme, circular, rizoide, filamentosa, irregular y fusiforme.
BORDES:
Es el aspecto que adquiere el contorno de la colonia, puede ser entero, lobulado, rizoide, filamentoso, ondulado, aserrado, espiculado, rizado,etc.
ELEVACION:
Es el aspecto que adquiere el cuerpo de la colonia, pueden ser plana, convexa (semiconvexa), cóncava (semicóncava), pulvinada, umbilicada, acuminada, planoconvexa, papilada, montañosa, crateriforme, semiesférica, umbeliforme, elevada, etc.

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Está referido a la textura que adquiere la colonia. Pueden ser lisas, rugosas, mate, brillante, mucosas, secas, etc.
Es importante diferenciar las colonias lisas y rugosas.
RUGOSAS: presentan capsulas u otros componentes superficiales que proporciona un aspecto compacto o rugoso.

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Las colonias pueden ser duras, viscosas, mucosas, secas, muy secas, cremosas, etc.
TRANSPARENCIA:
La transparencia puede ser completa, en cuyo caso, se habla de colonias translúcidas, semitransparentes o completamente opacas, dependiendo del tipo bacteriano o del medio de cultivo utilizado.

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Es muy frecuente la presencia de distintos sustratos en el medio de cultivo que influyen de forma decisiva en el aspecto de la colonia, uno de ellos es la presencia o no de halos de transparencia en torno a la colonia.
IMAGEN:

Staphylococcus aureus

Forma puntiforme

Borde entero

Consistencia suave

Halo transparente

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Esta hemólisis puede ser: Beta o total, Alfa o parcial y Gamma o no hemólisis.

HEMOLISIS ALFA: la bacteria digiere parcialmente los eritrocitos.

HEMOLISIS BETA: la bacteria digiere completamente los eritrocitos.

HEMOLISIS GAMA: la bacteria no digiere los eritrocitos, consume nutrientes de otros componentes de la sangre o del medio.

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Positivo: Crecimiento alrededor de S. aureus. Negativo: Crecimiento no alrededor de S. aureus.

H. ducreyi : no requiere factor V no crece alrededor de con S. aureus

H. haemolyticus y H. parahaemolyticus : requieren factor V, no crece alrededor de S. aureus, son hemolíticas

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La cual adquiere diferentes colores y aspectos dependiendo del medio en el que crezca, puede ser amarilla, naranja, verde metálica, azul, rosada, etc.

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Se observa teñida la célula sobre un fondo claro.

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Tinción simple con cristal violeta. Bacillus anthracis

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1.Frotis

2.Colorante básico (1 minuto)

3.Enjuagar con agua

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El fondo se tiñe de oscuro para observar células o estructuras refringentes.

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Las tinciones selctivas son utilizadas para dar color y aislar partes especìficas de los microorganismos.

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Las tinciones selctivas son utilizadas para dar color y aislar partes especìficas de los microorganismos.

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-endoesporas
-flagelo
-nùcleo

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1.Preparar extendido de Muestra o frotis

2.Añadir tinta china o nigrosina

3.Secar al aire
4.Añadir Safranina de Gram o Cristal Violeta (1minuto)

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AGRUPACIONES BACTERIANES:
-Diplococos
-Estreptococos
-Estafilococos
-Tetradas
-Sarcinas
-Diplobacilos
-Estreptobacilos
FORMAS BACTERIANAS:
-Cocos
-Bacilos
-Cocobacilos
-Vibrios
-Espirilos
-Espiroquetas
-Filamentos
-Bastones y Helices

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1.extender, secar

2.no fijar

3.cristal violeta al 1% (2m)

4.lavar con sulfato de cobre al 20%

5.resultado: la capsula de tiñe de azul violeta. El resto de azul oscuro.

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Positivas Compuestas (dos o mas colorantes)

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Positivas Compuestas (dos o mas colorantes)

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Tinción compuesta de Wrigth

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1-preparar extendido de muestra
2-añadir verde de maquita al 5% (calentar 10 min )
3-lavar con agua
4añadir safranina

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Procedimiento con capacidad de preservar la vida de los microorganismos en líquidos.
VENTAJAS:
Se aprecia mejor su motilidad al estar vivo
DESVENTAJAS:
Necesita iluminación para observarlo. requiere mayor destreza
METODO:
Utiliza el microscopio, suero fisiológico, solución KHO, agua marina, agua dulce, clara de huevo.
Existen 2 técnicas:
-TECNICA DE EXAMEN EN FRESCO
-TECNICA DE GOTA A PENDIENTE
VENTAJAS: Es rápido, evita distorsiones.
DESVENTAJAS: Poco contraste, necesita videocámaras.

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TÈCNICA DE TINCIÒN
1-encender mechero
2-tomar muestra con hisopo esteril
3-realizar extendido en lamina portaobjetos.
4-dejar secar al ambiente.
5-fijar la muestra
6-realizar la tinciòn de GRAM.

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1-colorante primario (rosa anlina)
2-mordente (àcido tànico)
3-colorante de contraste (azul de metileno)

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Tècnica creada por el bacteriologo FRANZ ZIEHL y el patòlogo FRIEDRICH NEELZEN, SU FINALIDAD ES DETCTAR MYCOBACTERIAS

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Tècnica creada por el bacteriologo FRANZ ZIEHL y el patòlogo FRIEDRICH NEELZEN, SU FINALIDAD ES DETCTAR MYCOBACTERIAS

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TECNICA:
1-encender mechero
2-realizar frotis bacteriano
3-carbofucsina (5 min9
4-alcohol àcido (hasta que la muestra tenga color rosado)
5-azul de metileno(1min)
6-lavar con agua detilada y dejar secar  al aire
7-observar en el microscopio

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1-mecheros encendidos
2-cristal violeta (1min)
3-lugol (2min)
4-alcohol cetona(1min)
5-safranina 30 seg)

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Procedimiento donde los microorganismos no están vivos.
COLORANTE
: Compuesto que al combinarse con otras sustancias les importa color. Esta formado por un grupo cromóforo y auxocromo, que al formar sales permite disociarse y combinarse con las estructuras celular.
FACTORES QUE INFLUYEN UNA CORRECTA COLORACION:
-Pureza del colorante y del reactivo
-Concentración del colorante
-PH de la solución del colorante: ACIDO, BASICO, NEUTRO.
-Temperatura
-Tiempo de tinción
-Sustancias adicionales
PREPARACION DE COLORANTES:
Antiguamente se preparaban porque venian en polvo, actualmente ya vienen preparados.

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MATERIAL:
-Portaobjetos y cubreobjetos
-Asas de siembra
-Mechero
-Microscopio
-Cuenta gotas
-Cristalizador
-Frasco lavador
-Barras paralelas
TECNICA:
-Extensión, desecación, fijación, tinción, lavado y secado.
PREPARACION DEL FROTIS:
-Cultivo de moho
-Brote de bacterias
-Colonias de bacterias y levaduras
-Muestra directa bucal o genital
-Muestra directa de sangre

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Tamaño
Color
Fuerza
Bordes
Elevación
Superficie
Consistencia
Transparencia