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Roteiro de prática 3 - Cinética enzimática

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Roteiro de prática 3 - Cinética enzimática

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3.1. Efeito da temperatura

3.2. Efeito do pH

3.3. Efeito da concentração do substrato

3.4. Inibição pelo cianeto

4. RESULTADOS E DISCUSSÃO:
1. Identifique a enzima e o substrato e explique o mecanismo de ação desta proteína.

2. Construa um gráfico para cada uma das variáveis analisadas no experimento.

3. De acordo com os resultados obtidos, qual a melhor temperatura e pH para a enzima?
Este resultado é esperado? Justifique.

As enzimas funcionam melhor dentro de faixas específicas de pH e temperatura, além das determinadas "temperatura ótima" e do "pH ótimo" para o bom/ideal funcionamento.
Temperatura: aumentar a temperatura da reação tende a aumentar a velocidade da reação, enquanto a  diminuição de temperatura vai desacelerar a velocidade da mesma. Nas faixas de temperaturas extremamente altas, as enzimas tendem a se desnaturar - perdendo sua forma e consequentemente parando de funcionar.
pH: cada determinada enzima possui uma faixa de pH ótimo. Alterações dessa faixa ótima de pH acarretará na queda das atividades enzimáticas. De semelhante forma, quando exposto a valores extremos de pH as enzimas também poderão ser desnaturadas.

Na prática portanto, conclui-se que com os respectivos valores, a enzima teve um bom funcionamento/desempenho nas temperaturas: 0°, apesar de ter sido resfriada; de 25°, temperatura ambiente e suportou até os 37°, ao ser aquecida. Enquanto que, quando exposta as temperaturas maiores, de 70 e 100° obteve queda brusca de funcionamento.

4. Explique o comportamento dos gráficos de temperatura e pH.

5. Qual o efeito do aumento da concentração de Substrato? Os resultados obtidos são o que era esperado? Quais os resultados esperados.

Uma reação química continuará acontecendo até que reste substrato suficiente para se ligar a enzima catalisadora. Portanto, a quantidade de substrato é também um fator de influência na reação: quanto maior for a quantidade e concentração do substrato numa reação, por mais tempo ela irá durar, assim como conforme o substrato for acabando a reação se sucederá, por isso, dentre as técnicas de laboratório para obter uma reação mais duradoura, é de costume adicionar mais substrato.

6. Ao aumentar a quantidade de enzimas no sistema o que ocorre? Justifique. Como
poderíamos fazer isso neste experimento?

A quantidade de enzimas presente na reação é diretamente proporcional a atividade e continuidade da reação. Se aumentarmos a concentração de enzimas mais reações irão acontecer, bem como, se acabarem as enzimas, a reação igualmente.

7. Qual seria o efeito da adição de um inibidor competitivo ao sistema? Justifique

A inbição enzimática consiste na redução da velocidade de uma reação provocada por uma determinada molécula, na sua forma competitiva, a molécula inibidora é estruturalmente semelhante ao substrato da enzima que se liga para realizar a catálise.
Ela se liga ao sítio ativo da enzima, que não pode realizar o processo catalítico, pois seu sítio ativo está ocupado para poder ligar-se ao substrato correto, o inibidor então compete como substrato pelo sítio de ação. O inibidor forma com a enzima o complexo enzima-inibidor EI, que é análogo ao complexo enzima substrato ES. Portanto, a molécula do inibidor não é modificada pela enzima e o efeito da reação modifica o km, mas não altera sua velocidade.

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Roteiro prática 1 - Determinação do pH de soluções, tempões biólogicos e distúrbios ácido-base

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Roteiro prática 1 - Determinação do pH de soluções, tempões biólogicos e distúrbios ácido-base

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RESULTADOS E DISCUSSÃO:

a) O pH biológico é igual em todos os órgãos e líquidos do corpo humano? Justifique.
b) O valor do pH da água, medido com os indicadores, está de acordo com o esperado? Se não está
discuta o porquê.
c) O que acontece quando você sopra o tubo de ensaio? Discuta as diferenças observadas entre o tubo
que contém apenas água e o tubo que contem a solução tampão comparando ao que ocorre dentro do
organismo humano.
d) Além do sistema tampão (químico) que outros sistemas fisiológicos ajudam na regulação do pH
sanguíneo? Explique

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Roteiro prática 2 - Dosagem de proteínas totais e albumina

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Roteiro prática 2 - Dosagem de proteínas totais e albumina

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3.1. Dosagem de proteínas totais

3.2. Dosagem de proteínas albumina

5. DISCUSSÕES:
a) Como deve ser realizada a coleta e estocagem das amostras de sangue para o teste
de dosagem das proteínas totais e albumina?
b) Quais condições condições clínicas podem justificar o valor encontrado em sala de
aula para as dosagens de proteínas totais e albumina? Justifique Bioquimicamente.
c) Que medicações podem interferir na avaliação bioquímica de um paciente que realize
dosagem de proteínas totais e albumina? Explique.
d) Como é realizada a dosagem de fibrinogênio? Qual sua importância clínica?
e) Que outras técnicas de laboratório podem ser utilizadas para a dosagem desses
testes?

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 Roteiro prática 4 - Detecção de Proteínas nos Alimentos com o Uso do Teste do Biureto 

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 Roteiro prática 4 - Detecção de Proteínas nos Alimentos com o Uso do Teste do Biureto 

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1. Na tabela abaixo indique as concentrações de proteínas de cada alimento:

2. Qual o papel da água e da clara do ovo no experimento?

3. Qual a relação da coloração da água e da clara do ovo com a quantidade de proteínas que estes alimentos contém?

4. Quais os alimentos ricos em proteínas?
De forma geral, os alimentos de origem animal são os mais ricos em proteína, como frango (85g) = 28g de proteína, bife (85g) = 26g de proteína, salmão (85g) = 22g de proteína, atum (85g) = 22g de proteína, camarão (85g) = 20g de proteína e ovo (unidade) = 6g de proteína; Além de alimentos de origem animal e comuns ao dia a dia: leite, queijo, iorgute e presunto. As Leguminosas: feijão carioca (½ copo) = 11g de proteína, lentilha (½ copo) = 9g de proteína, vagem (½ copo) = 9g de proteína, feijão preto (½ copo) = 8g de proteína e quinoa (½ copo) = 4g de proteína. E os grãos: grão de soja (28g) = 12g de proteína, sementes de abóbora (28g) = 9g de proteína, amendoim (28g) = 7g de proteína, amêndoas (28g) = 6g de proteína, pistache (28g) = 6g de proteína, grão de chia (28g) = 5g de proteína, nozes (28g) = 4g de proteína;

Dentre os alimentos utilizados no experimento:

A principal proteína do ovo é a ovoalbumina, presente na clara do ovo.....

5. Qual a função das proteínas no organismo humano?

Construção e reparação dos tecidos e músculos;

Possuem valor nutricional e fornecem energia;

Função ESTRUTURAL - Algumas proteínas constituem estruturas celulares, como as histonas nos cromossomos;  São parte dos constituentes básicos de fibras musculares, cabelo, ossos, dentes e pele, além de fornecer elasticidade e resistência a órgãos e tecidos;

Função de RESERVA de substâncias - a exemplo a ovoalbumina da clara de ovo, constituem a reserva de aminoácidos para o desenvolvimento do embrião;

Função ENZIMÁTICA ou Ação catalisadora (pelas enzimas): atuam como catalisadores naturais ou biológicos, otimizando o tempo das reações químicas no metabolismo celular;

Função de TRANSPORTE  de substâncias - a exemplo, a hemoglobina, no transporte de oxigênio no sangue;

Função CONTRÁTIL - a exemplo a actina e a miosina, que constituem as miofibrilas responsáveis pela contração muscular;

Função de DEFESA - no sistema imunológico, como a imunoglobina;

Função HORMONAL ou Função reguladora do metabolismo - alguns hormônios possuem  natureza protéica; a exemplo, a insulina e o glucagon, os quais regulam os níveis de glicose no sangue.

6. Como funciona o teste de biureto?

Enquanto proteínas são determinadas como macromoléculas constituidas de aminoácidos, o biureto é uma substância gerada a partir da decomposição da ureia.

O teste de biureto é uma das formas de determinação quantitativa das moléculas de proteínas presentes e de sua concentração total, em meio distinto, como os alimentos, soro sanguíneo e urina (Almeida et al., 2012).
A reação do biureto ocorre pela formação de um complexo de entre os resíduos de ligações peptídicas e o íon metálico cúprico, Cu2+ , que se encontra no reagente de biureto.
No teste, a identificação das proteínas se da através da mudança de cor: se a mistura em questão adquire uma cor violeta - o alimento contém proteínas em sua composição.