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El laboratorio de bioquímica clínica emplea gran diversidad de técnicas analíticas y es uno de los lugares en que primero se aplican las evoluciones tecnológicas. Se ha conseguido auto­ matizar la mayoría de estas técnicas para ofrecer servicio a la ele­vada demanda asistencial.

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El laboratorio de bioquímica clínica emplea gran diversidad de técnicas analíticas y es uno de los lugares en que primero se aplican las evoluciones tecnológicas. Se ha conseguido auto­ matizar la mayoría de estas técnicas para ofrecer servicio a la ele­vada demanda asistencial.

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Muchas de las técnicas utilizadas habitualmente en el laboratorio utilizan la luz como fundamento de medida. La luz, como energía, está formada por paquetes de energía denominados fotones.

Espectrofotometría: Parte de la luz se absorbe y otra parte se transmite sin pérdida de energía.

Fotometría: Consiste en la excitación térmica de los átomos mediante el empleo de una llama, de forma de éstos, al volver a su nivel basal de energía.

Fluorimería: Se basa en la propiedad que poseen algunas moléculas de emitir luz. (Excitación de moléculas)

Fotoluminiscencia, se emplea luz.2.

Quimioluminiscencia, se emplea una reacción química.3.

Bioluminiscencia, es bioquímica.4.

Electroquimioluminiscencia, es electroquímica.

Nefelometría: Mide la luz dispersada por una solución de partículas, por lo que el detector se sitúa formando un ángulo con la luz incidente.

Turbidimetría: Mide la disminución de la luz que atraviesa la solución debido a la turbidez (transmitancia), por lo que el detector se sitúa en línea con la luz incidente.

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Se basan en la medida de una señal eléctrica producida durante una reacción química en una célula electroquímica.
Existen diversos métodos analíticos que se basan en fenómenos electroquímicos:

1. La potenciometría, que mide el voltaje, o la diferencia de potencial entre dos electrodos de una célula electroquímica, a una intensidad constante.

2. La amperometría, que mide la intensidad de corriente causada por la aplicación de un voltaje constante en una célula electro química, lo que produce una reacción química en la solución.

3. La culombimetría, que mide la cantidad de carga eléctrica necesaria para que reaccione un compuesto en la solución.

4.  La conductimetría, que mide la corriente que puede transportar una solución aplicando una diferencia de potencial.

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La cromatografía es una técnica física de separación de los compo nentes de una mezcla por su diferente distribución entre una fase fija y otra fase móvil, que son inmiscibles.

Tipos de separación :

Atendiendo a la fase móvil, la cromatografía se divide en cromatografía líquida y de gas. Asimismo, según el tipo de interacción que permite separar los solutos, la cromatografía puede ser:

Adsorción

Partición

Intercambio Iónico

Filtración por geles

Afinidad

Tipos de cromatografia:

En capa fina

Gas Líquido, permite una rápida separación de componentes volátiles.

Líquida de Alta Eficacia (HPLC).

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Esta técnica se utiliza principalmente para separar proteínas en líquidos biológicos, especialmente suero, orina y líquido cefalo rraquídeo. Se basa en la aplicación de un campo eléctrico sobre una solución en la que las moléculas cargadas migrarán hacia el electrodo de carga opuesta a la suya.
La velocidad de migración depende de las siguientes propiedades:

Carga, tamaño y forma.

Corriente, voltaje y potencia.

Propiedades fisicoquímicas.

Fuerza iónica.

Temperatura y tiempo.

Electroforesis capilar :
se basa en la carga, tamaño, hidrofobicidad y estereoespecificidad. El flujo electroos- mótico es importante, debido al intenso campo eléctrico, de modo que el movimiento del tampón hacia el cátodo arrastra todas las m oléculas.

La electroforesis capilar, en cierto modo, es similar a las técnicas de HPLC, y comparte con ellas muchas aplicaciones.

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Electroforesis de ADN: Conceptos Básicos

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Los análisis a la cabecera del paciente se pueden dividir en tres grupos según su utilidad clínica:

1. Los que se realizan para minimizar el tiempo de respuesta, es decir, aquéllos que se realizan a pacientes en estado crítico y en los cuales es necesario un resultado para ejercer una acción clínica inmediata ante un riesgo severo o vital.

2. Los que se realizan para m ejorar la calidad asistencial. Estos análisis no son urgentes, pero, dado que la mayoría de las decisiones clínicas se basan en los resultados analíticos, el he cho de disponer de esta información de forma rápida ayuda a la atención clínica.

3. Los que se realiza el paciente en su propio domicilio para un autocontrol responsable de la enfermedad.

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Es una técnica compleja y especializada tanto cualitativa como cuantitativa de analitos. El fundamento de ésta consiste en la ionización de la molécula de interés en estado gaseoso y posterior separación de los distintos iones formados para medir la masa de dichos fragmentos. Con ello se consigue identificar cada elemento a partir de una mezcla de iones mediante la determinación de las relaciones de masa/carga.

Instrumentación:

1. Sistema de Introducción de la muestra.

2. Sistema de Vacío.

3. Sistema de Ionización de la muestra.

4. Analizador de masas.

5. Detector.

6. Analizador de Datos.

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METODOLOGIA ANALITICA: ANALISIS A LA CABECERA DEL PACIENTE

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METODOLOGIA ANALITICA: ANALISIS A LA CABECERA DEL PACIENTE

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Se utiliza el término de análisis a la cabecera del paciente (POCT, del inglés, point-of-care testing) para designar las pruebas analíticas realizadas en la proximidad del paciente, en el lugar donde se desa rrolla el proceso asistencial. Los avances en la tecnología disponible han permitido este acercamiento de los análisis del laboratorio central al paciente, lo que implica una reducción máxima del tiempo de análisis y de los tiempos preanalítico y postanalítico.

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EJEMPLO DE APLICACIONES DE LOS ANÁLISIS A LA CABECERA DEL PACIENTE:

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EJEMPLO DE APLICACIONES DE LOS ANÁLISIS A LA CABECERA DEL PACIENTE:

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Glucometría en sangre capilar.

Gases arteriales

Cooximetría y pulsioximetría

Marcadores cardíacos

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Con la automatización y miniaturización de los métodos analíticos, muchos de éstos pueden desarrollarse fuera del laboratorio, trans formándose en un nuevo campo de trabajo del analista, que ha de velar por la selección de éstos y por la calidad de su realización.

El laboratorio central ejerce diversas acciones sobre los análisis realizados fuera de sus instalaciones:

1. Desde el laboratorio central se realiza la elección de equipos y su mantenimiento.

2. El personal técnico que realiza el análisis es ajeno al laboratorio y precisa una formación básica en el manejo de muestras y ana lizadores, que es responsabilidad de los servicios de laboratorio.

3. El laboratorio central es el responsable de validar los resultados y registrar las calibraciones, el control de calidad y los resultados de pacientes.

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Los especímenes más utilizados son los de sangre. También se usan, aunque menos, mu chos otros tipos de especímenes, como la orina, la saliva (p. ej., para determinar la ingesta de drogas de abuso), el aliento (p. ej., para de terminar la ingesta de etanol) o las heces (p. ej„ para determinar la existencia de sangre oculta).

Cuando el espécimen es sangre, habitualmente se trabaja con cantidades de muestra de unos pocos microlitros, lo que es impor tante, porque este tipo de análisis se suele repetir en intervalos cor tos de tiempo.

Otro tipo de espécimen rápido de obtener es el de orina de una micción, con el cual se obtienen resultados cualitativos o semi cuantitativos.

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CALIDAD DE LOS ANÁLISIS A LA CABECERA DEL PACIENTE

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CALIDAD DE LOS ANÁLISIS A LA CABECERA DEL PACIENTE

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Los equipos de análisis a la cabecera del paciente se consideran como el resto de los equipos del laboratorio y, por tanto, todos los requisitos de calidad son aplicables a ellos.
El laboratorio central establece las pautas y la frecuencia para realizar los controles de calidad externos e in ternos, y la revisión de todos los resultados del control de calidad.

El aseguramiento de la calidad en análisis a la cabecera del paciente debe comprender tanto la fase preanalítica (obtención del espécimen, evitar hemolisis, preparación adecuada del pacien te, evitar retraso en la realización del análisis, mezcla adecuada de la muestra, evitar introducción de burbujas de aire, etc.), como el equipo y los reactivos (alm acenam iento, calibraciones, variación de lote a lote, mantenimiento, etc.), el procedimiento, el personal (formación y actualización), el registro de resultados y la inte gración en la historia clínica del paciente.

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1. González Á. Principios de bioquímica clínica y patología molecular. 2nd ed. Barcelona, España: ELSEVIER; 2014.

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Algunos tests son cualitativos o semicuantitativos y no requie ren ningún equipo especial, ya que la lectura de los resultados se realiza visualmente. Estos tests suelen ser más económicos y no precisan un personal entrenado.

La determinación de la mayoría de las magnitudes bioquímicas se basa en los siguientes métodos:

1. Reacciones químicas, como las de las tiras de urianálisis.

2. Reacciones enzimáticas, que proporcionan la especificidad propia de la enzima.

3. Reacciones electroquímicas, que se emplean de forma abundante en la determinación de gases en sangre e iones (Na* y K*).

4. Reacciones inmunológicas, que se emplean en la mayoría de los procedimientos de análisis de proteínas y drogas de abuso. Existen tres tipos de métodos: aglutinación, inmunofiltración y, sobre todo, inmunocromatografía.

Espectrofotometría de reflectancia: e sta técnica se emplea mucho en los análisis a la cabecera del paciente, como en la mayoría de los equipos que emplean tiras reactivas, como los de urianálisis. En ella, un rayo de luz incide formando un ángulo de 45 ° sobre la tira reactiva de forma directa o difusa, donde el cromógeno absorbe una parte de la radiación y el resto sale de forma difusa.

Inmunocromatografía:  Ésta es una técnica muy común en los sistemas de análisis a la cabecera del paciente, porque combina la especificidad y la sen sibilidad de la técnica de sándwich con una elevada rapidez en mostrar el resultado. Consiste en un soporte de plástico sobre el cual se dispone una membrana de nitrocelulosa en la que se diferencian tres zonas sucesivas una primera con un anticuerpo conjugado con una molécula de detección, como una partícula de oro, que reconoce el antígeno que se desee detectar; a continuación, una segunda con un anticuerpo de captura frente a otro epítopo del antígeno, y una tercera zona con un anticuerpo frente al anticuerpo conjugado.