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Una tinción simple se fundamenta en la afinidad que va a tener la pared bacteriana por un colorante.

Es una técnica de decantación en la que se hace uso de los puentes de tinción, en los que se colocan los portaobjetos con las preparaciones secas y fijadas. La técnica de tinción se realiza según el protocolo.

Se usa un solo colorante para teñir la pared bacteriana y observar así su morfología y agrupación. No sirve para visualizar estructuras puesto que rara vez se tiñen.

Los colorantes más utilizados son azúl de metileno, fuchsina, verde malaquita, violeta de genciana, cristal violeta, verde janús y rojo fenol.

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Los colorantes catiónicos ("colorantes básicos") son atraídos a los componentes celulares que son ácidos de forma natural
La tinción con colorantes catiónicos se realiza en medio básico. En estas condiciones los grupos ácido de la fibra se transforman en grupos carboxilato con carga negativa. Así, el colorante catiónico, a través del nitrógeno positivo, se une por fuerzas electrostáticas, a los grupos aniónicos de la fibra.

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Colorantes aniónicos ("colorantes ácidos") son atraídos por componentes celulares que son básicos (cargados positivamente; acidófilos).
Suelen tener uno o más grupos sulfónico

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Esta tinción diferencial fue propuesta por el medico danés Christian Gram (1884) que examinando tejido pulmonar de enfermos fallecidos por neumonía observó que la bacteria Streptococcus pneumoniae, presente en los pulmones, retenía el colorante conocido como marrón Bismark (sustituido posteriormente por el cristal violeta), mientras que el tejido pulmonar no era capaz de retener el colorante

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Esta tinción diferencial fue propuesta por el medico danés Christian Gram (1884) que examinando tejido pulmonar de enfermos fallecidos por neumonía observó que la bacteria Streptococcus pneumoniae, presente en los pulmones, retenía el colorante conocido como marrón Bismark (sustituido posteriormente por el cristal violeta), mientras que el tejido pulmonar no era capaz de retener el colorante

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Material necesario Cultivos de bacterias gram positivas: Bacillus cereus y gram negativas: Escherichia coli, frasco lavador, cristalizador, soporte, portaobjetos, asa de siembra, cristal violeta, safranina, lugol y alcohol, aceite de inmersión

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Material necesario Cultivos de bacterias gram positivas: Bacillus cereus y gram negativas: Escherichia coli, frasco lavador, cristalizador, soporte, portaobjetos, asa de siembra, cristal violeta, safranina, lugol y alcohol, aceite de inmersión

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Poner sobre un portaobjetos una gota de agua y una pequeña alícuota de un cultivo bacteriano con el asa de siembra estéril. Hacer el frotis, formando una película homogénea sobre el portaobjetos con el asa de siembra. Dejar secar. Fijar la preparación, pasando a través de la llama del mechero el portaobjetos

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Poner sobre un portaobjetos una gota de agua y una pequeña alícuota de un cultivo bacteriano con el asa de siembra estéril. Hacer el frotis, formando una película homogénea sobre el portaobjetos con el asa de siembra. Dejar secar. Fijar la preparación, pasando a través de la llama del mechero el portaobjetos

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Cubrir la preparación (previamente realizada) con colorante cristal violeta por un tiempo de 1 minuto, enjuagar a chorro de agua

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Cubrir la preparación (previamente realizada) con colorante cristal violeta por un tiempo de 1 minuto, enjuagar a chorro de agua

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Colocar en la preparación Lugol por el tiempo de 1 minuto, enjuagar

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Agregar alcohol- acetona y enjuagar inmediatamente (decoloración)

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Agregar alcohol- acetona y enjuagar inmediatamente (decoloración)

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Añadir Safranina a la preparación por el tiempo de 1 minuto, enjuagar a chorro de agua

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Añadir Safranina a la preparación por el tiempo de 1 minuto, enjuagar a chorro de agua

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La endospora bacteriana es una estructura de resistencia que se presenta en algunos géneros bacterianos cuando las condiciones en el medio son adversos

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La endospora bacteriana es una estructura de resistencia que se presenta en algunos géneros bacterianos cuando las condiciones en el medio son adversos

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su localización puede ser central subterminal o terminal, deformante o no deformante.
esta resistencia puede ser agentes fisicos, como faltas de nutrientes, altas temperaturas o agentes químicos.

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La espora debe hallarse en un medio rico para poder germinar
Se inicia al ser activada por el calor
Se rompen las estructuras protectoras
Absorción de agua, activación de enzimas y actividad respiratoria
Una vez germinada esta continua para su desarrollo normal

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RESISTENCIA QUÍMICA: Se da por la impermeabilidad de la espora
RESISTENCIA A LA RADIACIÓN: Se da por el contenido de compuestos azufrados que se unen a radicales libres.

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Los flagelos son órganos de locomoción.
Filamentos simples compuestos químicamente compuestos de proteínas conocidas como flagelina
La tinción de flagelos es un arte que se adquiere sólo con la práctica.

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monotricas

lofotricas

anfitricas

peritricas

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Es una tinción para lograr observar flagelos de bacterias. Es usada en laboratorios, pero no de rutina. Los pasos que sigue son el de usar rosanilina sirve como tinción principal, y ácido tánico es agregado a la solución como mordiente.

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Colorante de Leifson
Fucsina básica en Alcohol etílico.
Ácido tánico en agua destilada.
Cloruro de sodio en agua destilada.

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Para preparar la solución de uso, se mezclan cantidades iguales de las soluciones A, B, y C y se guarda en frasco cerrado herméticamente en la nevera donde es estable durante varias semanas.

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Hacer un círculo en un portaobjetos perfectamente limpio para lo cual previamente fue sumergido en mezcla crómica durante 24 horas, lavado posteriormente con agua destilada, enjuagado con alcohol y secado con un trozo de tela limpio. Desengrasarlo pasando por una flama varias veces.

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Colocar dentro del círculo con pipeta Pasteur, una gotita de la suspensión bacteriana e inclinar el portaobjetos de uno y otro lado para extender la muestra.

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Fijar la preparación al aire ya que si esta operación se hace usando la flama del mechero se pueden destruir los flagelos

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Humedecer la preparación con el Colorante de Leifson y dejarla en reposo a temperatura ambiente durante 10 minutos en tiempo caluroso o en la incubadora en tiempo frío

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Lavar con agua destilada & observar resultados

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Bacillus cereus

Visión al microscopio de una tinción de flagelos, se observan bacilos curvos, algunos prácticamente en forma de media luna. La punta de flecha muestra la inserción de los flagelos.