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Alunos integrantes: Beatriz Martins da Silva, Giovanna de Campos Moraes e Julia Martins Araujo

Turma: A2

Data das atividades práticas: 13/11/2024 (experimentação) e 25/11/2024 (coleta dos resultados)

Local: Laboratório de ensino D do Instituto Biomédico da Universidade Federal Fluminense

Professores responsáveis: Joana e André

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Placas com os resultados dos experimentos nos diferentes tempos de exposição (5’, 10’, 15’, 20’ e 30’ minutos)

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Cada placa de cultura foi deixada aberta e exposta por tempos variáveis: 5, 10, 15, 20 e 30 minutos. Após a exposição, as placas foram incubadas por 12 dias para análise do crescimento bacteriano.

Resultados e Discussão

Placa 1 (5 minutos): Apresentou cinco colônias pequenas, todas com características semelhantes (morfologia circular, bordas regulares e crescimento uniforme). Não foi observada diversidade significativa, sugerindo a predominância de um único tipo de bactéria.

2. Placa 2 (10 minutos): Observou-se quatro colônias bacterianas, similares às da placa de 5 minutos, com morfologia uniforme e tamanho reduzido. A quantidade menor sugere possíveis variações momentâneas na dispersão bacteriana no ambiente.

3. Placa 3 (15 minutos): Registraram-se três colônias, também com características semelhantes às das placas anteriores. Esse resultado pode indica uma menor deposição bacteriana durante o período de exposição, possivelmente devido a mudanças nas condições do ambiente, como fluxo de ar e temperatura.

4. Placa 4 (20 minutos): Foi observado cinco colônias, todas pequenas e com morfologia circular uniforme, sem sinais de diversidade. O retorno ao número observado na placa de 5 minutos pode indicar maior estabilidade na dispersão bacteriana ao longo do tempo.

5. Placa 5 (30 minutos): Apresentou o maior crescimento bacteriano em quantidade e diversidade, com dez colônias. Dentre elas, nove apresentaram morfologia circular e bordas regulares, sendo uma visivelmente maior, com bordas mais amplas e circunferência considerável, sugerindo um micro-organismo distinto. Além dessas colônias, foi observado um padrão de crescimento atípico, com formato ramificado, ocupando cerca de um quinto da placa. Este resultado indica maior diversidade microbiana e maior deposição de micro-organismos ao longo do tempo de exposição.

Desse modo, os resultados apontam que o tempo de exposição influencia diretamente a quantidade e a diversidade de colônias bacterianas presentes no ar e capturadas pelas placas de cultura. A placa de 30 minutos apresentou não apenas o maior número de colônias, mas também a maior diversidade morfológica, evidenciada por diferenças no tamanho, no padrão de crescimento e na morfologia das bordas. Não obstante, variações momentâneas nas condições do ambiente, como o fluxo de ar, ventilação ou atividades humanas alteram a dispersão bacteriana, visto que as placas de 10 e 15 minutos apresentaram redução do crescimento bacteriano em relação à de 5 minutos.

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Bactérias na superfície: Placa com resultado do experimento de bactérias em superfície: 1. Alça de óculos; 2. Brinco; 3. Caneta; 4. Capa de celular.

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O experimento foi realizado dividindo a placa bacteriana em 4 partes e em cada uma delas diferentes objetos foram testados. Após o período de incubação de 12 dias, os resultados foram colhidos.

Resultado e Discussão

1. Alça de Óculos

Apenas uma pequena colônia de bactérias foi encontrada, indicando um baixo teor microbiano, o que pode ser reflexo de boas práticas de higiene ou da ausência de condições que favoreçam a proliferação microbiana. O resultado não era esperado pelas integrantes do grupo visto que óculos é um objeto exposto aos mais diversos microrganismos diariamente.

2. Brinco

Apresentou uma colônia bacteriana extensa, apresentando uma diversidade de dois tipos microbianos de aspectos diferentes - um com aspecto de conjunto de várias pequenas bolas e outro com aparência de apenas um círculo grande, contínuo e uniforme. O resultado era esperado pelo grupo e indica um meio que favorece o acúmulo microbiano devido a higienização insuficiente.

3. Caneta

Apresentou dois tipos de colônias diferentes, sendo um deles circular, esbranquiçado, maior e com 5 componentes, e o outro circular, roxo, menor e mais escasso, com 3 componentes. O resultado era esperado, visto que canetas geralmente são objetos pouco/não higienizados, o que favorece a proliferação bacteriana.

4. Capa de celular

Apresentou uma colônia com 48 pontos circulares, esbranquiçados e uniformes e 1 ponto roxo irregular, tendo assim uma diversidade microbiana. O resultado condiz com o esperado, visto que o celular é manipulado frequentemente, sendo assim exposto a contaminação pelos mais diversos microorganismos.

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Placa resultado do experimento de controle microbiano: 1- Dedo sem higienização; 2- Dedo higienizado com água e sabão; 3- Dedo higienizado com álcool 70%; 4- Dedo higienizado com álcool iodado

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A cultura bacteriana foi dividida em quatro áreas distintas, correspondendo aos diferentes métodos testados: 1. Sem higienização; 2. Lavagem com água e sabão; 3. Uso de álcool 70%; 4. Uso de álcool-iodado na pele. As culturas foram incubadas em condições padrão por 12 dias para análise do crescimento bacteriano.

Resultados e Discussão

1. Sem higienização: Observou-se um crescimento bacteriano considerável. A área apresentou uma colônia grande e densa, com aproximadamente 1,98 cm de diâmetro. Este resultado reflete a alta carga microbiana presente na pele sem higienização, o que era esperado, considerando o manuseio prévio de objetos contaminados.

2. Lavagem com água e sabão: O crescimento bacteriano foi reduzido em comparação ao dedo sem higienização. Contudo, ainda foi possível observar diversas colônias dispersas, embora pequenas. Esse resultado foi maior do que o esperado pelo grupo, indicando que a lavagem com sabão, embora eficaz, não é totalmente suficiente para eliminar todas as bactérias presentes na pele.

3. Uso de álcool 70%: Houve uma redução significativa no crescimento bacteriano, com apenas cerca de 8 a 10 colônias observadas, ainda menores que a com água e sabão. Este resultado está dentro do esperado, uma vez que o álcool 70% é conhecido por sua ação antimicrobiana eficiente, embora não elimine completamente todos os micro-organismos.

4. Uso de álcool iodado: Não foi identificado nenhum crescimento bacteriano no meio de cultura, evidenciando uma eficácia de 100% na eliminação das bactérias. Este resultado superou as expectativas do grupo, que esperava uma redução significativa, mas não completa.

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Placa com secreção de mucosa nasal obtida por SWAB. Lado esquerdo - SWAB da mucosa nasal da Beatriz; Lado direito -  SWAB da mucosa nasal da Julia 

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O experimento foi realizado com o objetivo de pesquisar a presença da bactéria Staphylococcus aureus (S. aureus) na microbiota nasal dos indivíduos. Foram coletados SWAB nasais das integrantes do grupo Beatriz e Julia, as culturas foram incubadas por 12 dias em meio de cultura Ágar Manitol Salgado por técnica de esgotamento, para análise do crescimento bacteriano.

O meio de cultura Ágar Manitol Salgado é um meio que permite a seleção e diferenciação das bactérias Staphylococcus aureus, pois há presença de NaCl no meio e esse gênero de bactéria é halotolerante. Desse modo, se houver presença de S. aureus, há fermentação do Manitol, o que diminui o pH do meio e, consequentemente, altera a coloração do meio de cultura para tons amarelados ao redor das UFC.

Resultado

1. Beatriz (lado esquerdo da placa)

Houve alteração do meio em algumas partes, indicando a formação de cerca de 23 colônias, o que afirma a presença de Staphylococcus aureus na microbiota nasal da Beatriz

2. Julia (lado direito da placa)

Houve alteração do meio em poucas partes, indicando a formação de cerca de 6 colônias. Assim, é possivel afirmar que há a presença de Staphylococcus aureus na microbiota nasal da Julia

Discussão

A cultura de ambos os SWABs nasais resultou em alteração da cor do meio para tom amarelado devido ao crescimento bacteriano. Portanto, pode-se afirmar que há a presença de Staphylococcus aureus na microbiota nasal da Beatriz e da Julia. No entanto, a partir da formação de maior quantidades de UFCs no lado da placa da Beatriz, pode-se afirmar que em sua microbiota há maior presença de S. aureus que na da Julia

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 Fotos com as medições dos diferentes halos. Canto superior esquerdo - Halo de Imipenem 10μg (IPM 10); Canto superior direito - Halo de Ampicilina 10μg (AMP 10); Canto inferior esquerdo - Halo de Ciprofloxacino 5μg (CIP 5); Canto inferior direito - Halo de Cefotaxima 30μg (CTX 30).

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O experimento começou com a coleta de Escherichia coli (E. coli) e com o seu espalhamento pela placa, fazendo movimentos cruzados com ângulo de 90°  para garantir que a bactéria fosse distribuída de maneira uniforme em toda a superfície. Então, usando uma pinça estéril, foram colocados os discos impregnados com os antimicrobianos Imipenem 10μg, Ampicilina 10μg, Ciprofloxacino 5μg e Cefotaxima 30μg sobre a superfície. Após o período de incubação de 12 dias, o resultado foi colhido.

Resultado e Discussão

Toda a discussão é baseada na tabela de pontos de corte do BrCAST para as Enterobacterales.

1) IPM10:

As E.coli são sensíveis a esse antimicrobiano caso o halo do Teste de Disco-Difusão seja maior que 22mm, e são resistentes caso esse halo seja menor que 19mm. O halo de inibição encontrado tinha 27mm, ou seja, a E.coli é sensível para o IPM 10, sendo o Imipenem 10μg um fármaco eficaz para combater uma infecção por E.coli.

2) AMP10:

As E.coli são sensíveis a esse antimicrobiano caso o halo do Teste de Disco-Difusão seja maior que 14mm, e são resistentes caso esse halo seja menor que 14mm. O halo de inibição encontrado tinha 20mm, ou seja, a E.coli é sensível para a AMP 10, sendo a Ampicilina 10μg um fármaco eficaz para combater uma infecção por E.coli.

3) CIP 5:

As E.coli são sensíveis a esse antimicrobiano caso o halo do Teste de Disco-Difusão seja maior que 25mm, e são resistentes caso esse halo seja menor que 22mm. O halo de inibição encontrado tinha 20mm, ou seja, a E.coli é resistente para o CIP 5, sendo o Ciprofloxacino 5μg um fármaco ineficaz para combater uma infecção por E.coli.

4) CTX30:

As E.coli são sensíveis a esse antimicrobiano caso o halo do Teste de Disco-Difusão seja maior que 20mm, e são resistentes caso esse halo seja menor que 17mm. O halo de inibição encontrado tinha 28mm, ou seja, a E.coli é sensível para a CTX 30, sendo a Cefotaxima 30μg um fármaco eficaz para combater uma infecção por E.coli.

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Foto resultado da lâmina de coloração gram de Escherichia coli  

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O experimento

O nosso grupo realizou a técnica coloração GRAM com a bactéria Escherichia coli com o objetivo de definir a sua categorização de acordo com a técnica.

1. Após coletada a colônia de E. coli, adicionou-se cristal violeta na placa por 1 minuto, a fim de corar os dois grupos de bactérias (GRAM - e GRAM +)

2. É adicionado Lugol na placa por 1 minuto, com o objetivo de fixar o corante na parede celular das bactérias. Depois, o excesso é retirado e inicia-se a lavagem com água corrente.

3. Álcool é utilizado por 15s para agir como um descorante apenas nas GRAM negativas, pois destrói a camada fosfolipídica.

4. Lava-se em água novamente, para retirar o álcool

5. Adiciona-se fucsina, um corante vermelho que impregna nas bactérias GRAM negativas.

Resultados e discussão

Foi possível observar a coloração rosa, caracterizando a Escherichia coli como uma bactéria GRAM negativa, visto que a coloração rosa determina a perda do corante cristal violeta na etapa do álcool. Além disso foi observada o morfologia de bastão, caracterizado-a, portanto, como bacilo.

Dessa forma, a técnica de coloração Gram possibilitou definir a Escherichia coli como um bacilo Gram negativo