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1.2 Tipos de cultivos celulares animales

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1.2 Tipos de cultivos celulares animales

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Monocapa.
Las células crecen adheridas sobre un soporte sólido (plástico o vidrio). El anclaje al sustrato es un prerrequisito para la proliferación celular.
Puede ser:
Estacionario. Las células incubadas sin agitación, sedimentan y se adhieren al fondo del envase, usualmente

liso.
Rotatorio. Envase de cultivo cilíndrico, que gira

lentamente de modo que las células se unen a la superficie

interna del frasco.

Suspensión.
Las células se encuentran dispersas en el medio de cultivo. Su crecimiento no depende del anclaje.

Ventajas del uso de cultivos celulares animales.

Control de factores fisicoquímicos y fisiológicos del medio.

Las células en cultivo asumen una constitución homogénea.

Disminución del uso de experimentación invivo.

Desventajas del uso de cultivos celulares animales.

Requiere estrictas condiciones de asepsia.

Altos costos para producir una pequeña cantidad de células.

Problemas de inestabilidad genética cuando se realizan varios pases.

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Cultivo celular: Actualmente se entiende por cultivo celular al conjunto de técnicas que permiten el mantenimiento de las células 'in vitro', manteniendo al máximo sus propiedades fisiológicas, bioquímicas y genéticas. Mediante condiciones determinadas de temperatura, humedad y medio nutritivo.
Cultivo celular animal: Cultivo de células animales es el término general que se le ha dado al aislamiento de un tipo específico de células provenientes de tejidos u órganos animales, que posteriormente son colocadas en un ambiente artificial que favorece su división, crecimiento, multiplicación y en algunos casos diferenciación.

El cultivo celular animal ha permitido estudiar:

La actividad intracelular

Los flujos metabólicos

Las interacciones con el medio ambiente

Las interacciones célula-célula

La genética

La generación de metabolitos de interés

Estos principios básicos han sido aplicados en:

Biología celular, biología del desarrollo y la fisiología. (donde la generación de conocimiento básico está relacionada con la estructura y función celular)

La toxicología y farmacología. (donde el conocimiento es aplicado a las ciencias farmacéuticas)

Linea del tiempo:
Siglo XIX: Primeros intentos para promover el crecimiento de órganos de diferentes animales sumergiéndolos en fluidos biológicos.
1907: Harrison fue el primer científico que empleó técnicas in vitro para el estudio de fenómenos in vivo, realizando cultivos de médula espinal embrionaria de anfibios.

1910: Burrows empleó plasma de pollo para nutrir los explantes de tejidos embrionarios de pollo.
1920-1940: Subcultivo de fibroblastos.

1952: Gry y col. establecen la primera línea celular humana, las células HeLa.

1960s: Líneas celulares CHO (Chinese Hamster Ovarium) y la línea BHK21 (Baby Hamster Kidney).

1970s: Primeros ensayos de transferencia de ADN en células animales.
1980s: Se empiezan a conocer los mecanismos de la transformación.
1990s-2000s: Empezaron a producirse medicamentos a escala industrial en biorreactores.

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Subcultivo:

Las células son consideradas como cultivo primario hasta que se subcultiven con éxito (es decir, sean transferidas, con o sin dilución, de un recipiente de cultivo a otro)

Pasos a seguir (técnica de subcultivo):

1. Aspirar el medio

2. Realizar lavado

3. Añadir tripsina e incubar

4. Inactivar la tripsina

5. Pasar a una nueva placa

Líneas celulares:

Los sucesivos cultivos formados se denominan una línea celular

Son células que han sobrevivido a través de muchos subcultivos y tienen expectativas de vida infinita

La línea celular se refiere a células que permanecen en división continua durante todo el tiempo que se mantengan en cultivo, sin morir y manteniendo sus características físicas y de requerimientos de nutrientes relativamente estables. Esto permite desarrollar investigaciones durante largos periodos de tiempo, manteniendo las células con características idénticas por meses o años

La formación de una línea celular a partir de un cultivo primario implica que:

1. Aumenta el número de células obtenidas

2. La población celular se hace uniforme y homogénea

3. Sus características se conservan

Tipos:

Línea celular continua: Línea celular que ha demostrado posibilidades de ser subcultivada in vitro por lo menos 70 veces (≥70 subcultivos) indefinidamente

Línea celular finita: Línea celular que tiene un número limitado de posibles subcultivos (alrededor de
50)

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1.3 Cultivo celular primario (de células animales)

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1.3 Cultivo celular primario (de células animales)

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Cultivos primarios. Los cultivos primarios están constituidos por células que han sido aisladas de un tejido y que proliferan en las condiciones apropiadas.

Características:

Se obtienen de un animal recién sacrificado.

100% cariotipo original

Formado por células indiferenciadas de forma similar al tejido que le dio origen.

Su duración es aprox. 7 días.

Pasos a seguir para el cultivo:

Aislamiento del tejido de interés.

Disociación mecánica y enzimática del tejido

Obtención de la suspensión celular.

Siembra en soporte adecuado para la proliferación en monocapa o en suspensión.

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Introducción al cultivo de animales. Sitio web: https://www.ehu.eus/biofisica/juanma/mbb/pdf/cultivo_celular.pdf

Universidad Complutense de Madrid. (2017, 18 octubre). https://www.ucm.es/data/cont/docs/1462-2017-10-18-1.3+Cell+culture_es.pdf

Tavira Montalván Carlos Alberto. Alcances y perspectivas del cultivo de células animales en la biotecnología farmacéutica. Facultad de Farmacia. Universidad Autónoma del Estado de Morelos. Documento en: https://www.redalyc.org/pdf/579/57912962006.pdf

Brito Lysbeth. Departamento de Cultivo Celular. Aspectos básicos sobre el manejo y preservación de los cultivos celulares. Sitio web: https://www.paho.org/hq/dmdocuments/2010/L%20Brito%20INHRR.pdf

INTRODUCCIÓN AL CULTIVO CELULAR, Recuperado el 19/01/2023 de: https://www.ehu.eus/biofisica/juanma/mbb/pdf/cultivo_celular.pdf

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Unidad 1: Introducción al cultivo de células animales

Optativa 1. Cultivo celular animal

Integrantes:

Alcalá Romo Clarissa Lizette

Esqueda Padilla Gisela

Ramirez Lopez Alondra

Gutierrez Tapia Claudia Nayeli

2023-A