# data[].attributes.body
Corante fluorescente que se liga ao DNA de fita dupla.

Quando o corante está ligado ao DNA, ele emite fluorescência, que pode ser detectada pelo equipamento de qPCR.

A intensidade de fluorescência é diretamente proporcional à quantidade de DNA amplificado.

Permite quantificar o DNA original na amostra.

# data[].attributes.body
Aumentam a especificidade da quantificação, pois se ligam a uma sequência alvo específica.

Reduz a possibilidade de detecção inespecífica.

Emitem fluorescência somente quando degradadas pela ação da polimerase.

# data[].attributes.body
Fluoróforo na extremidade 5’: Emite fluorescência.

Quencher na extremidade 3’: Supressor.

Enquanto o fluoróforo e o quencher estão próximos, a fluorescência é suprimida, evitando qualquer sinal antes da reação.

# data[].attributes.body
Durante o processo de amplificação, a sonda se hibridiza (liga) a uma região específica da sequência alvo entre os primers, onde o DNA será amplificado.

Essa ligação ocorre antes da extensão pelo DNA polimerase.

# data[].attributes.body
Quando a polimerase atinge a sonda ligada ao DNA alvo durante a etapa de extensão, ela degrada a sonda, rompendo o fluoróforo e o quencher.

# data[].attributes.body
Com a degradação da sonda, o fluoróforo é liberado e se separa do quencher, emitindo um sinal de fluorescência.

A intensidade da fluorescência é proporcional à quantidade de DNA amplificado.

Proporcional ao número de cópias do DNA alvo presente na amostra.

# data[].attributes.body
Vantagem:

Baixo custo.

Facilidade no uso.

Alta sensibilidade.

Desvantagem:

A ligação em todo DNA fita dupla que surge durante a reação, incluindo os dímeros dos iniciadores e produtos inespecíficos, podendo superestimar a concentração do fragmento alvo.

# data[].attributes.body
Apresenta 3 fases distintas:

1. Linha basal: Não houve produtos da PCR suficientes para detectar fluorescência.

2. Fase Log: A quantidade de produtos da PCR dobra a cada ciclo.

3. Fase platô: Não há mais aumento no número de produtos.

# data[].attributes.body
Molécula de oligonucleotídeo em forma de "haste-e-loop":

Loop: Contém a sequência complementar ao DNA/RNA alvo.

Haste: Formada por sequências complementares nas extremidades 5' e 3', permitindo que a molécula se dobre em uma estrutura fechada.

Marcadores:

Fluoróforo: Ligado à extremidade 5', emite fluorescência quando excitado.

Quencher: Ligado à extremidade 3', suprime a fluorescência do fluoróforo enquanto a estrutura está fechada.

# data[].attributes.body
Estado inicial (ausência de alvo):

O fluoróforo e o quencher estão próximos devido à estrutura dobrada ("haste-e-loop").

O quencher absorve a energia do fluoróforo, impedindo a emissão de fluorescência.

Hibridização com o DNA/RNA alvo:

O loop do Molecular Beacon se liga à sequência complementar.

Essa ligação causa uma mudança conformacional, separando o fluoróforo do quencher.

Emissão de fluorescência:

Após a separação ocorre a emissão de fluorescência.

Essa fluorescência é monitorada em tempo real pelo equipamento de PCR.

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Try Molecular Beacons for your multiplex assay

# data[].attributes.body
KUYPERS, J.; JEROME, K. R. Applications of Digital PCR for Clinical Microbiology. Journal of Clinical Microbiology, v. 55, n. 6, p. 1621–1628, 15 mar. 2017.

PubMed: PCR in diagnostics

SIGMA ALDRICH. Gold Nanoparticles: Properties and Applications. Merck, v. 1, n. 1, 2024.

WERNIKE, K. et al. Pitfalls in SARS‐CoV‐2 PCR diagnostics. Transboundary and Emerging Diseases, 5 jul. 2020.

Heloisa G.K, João Felipe, Maria Clara e Samara Almeida.

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Detecção de mutações genéticas.

Identificação de patógenos (bactérias, vírus ou protozoários).

Estudos de expressão gênica.

Farmacogenética e diagnóstico molecular.

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Detecção de Mutações no Gene BRCA1/BRCA2

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Detecção de Mutações no Gene BRCA1/BRCA2

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Isolamento de DNA: O DNA é isolado a partir de células de sangue ou saliva.

qPCR com Sondas de Alelo Específico: Utilizam-se sondas projetadas para diferenciar alelos normais e mutantes. Apenas a sonda correspondente ao alelo presente emite fluorescência.

A presença de uma mutação é indicada pela fluorescência, e sua quantidade permite verificar a frequência do alelo mutado.

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Extração de RNA: o RNA viral é extraído da amostra do paciente.

Transcrição Reversa: o RNA é convertido em DNA complementar (cDNA) pela enzima transcriptase reversa.

qPCR: a quantidade de cDNA é amplificada e quantificada por meio de sondas que emitem fluorescência ao se ligar a sequências alvo do SARS-CoV-2.

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Técnica utilizada para quantificar a expressão de genes ou detectar infecções virais e bacterianas em tempo real.

Possibilita a detecção e quantificação de ácidos nucleicos (DNA) em amostras.

Permite monitorar a amplificação do DNA durante cada ciclo da reação.

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1. Desnaturação: A dupla fita de DNA se separa em fitas simples.

1. Anelamento: Primers se ligam às sequências complementares nas fitas de DNA.

2. Extensão: A enzima Taq polimerase sintetiza novas fitas de DNA a partir dos primers.