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La guerra franco-asburgica ebbe tre fasi: nella prima (1525-1529) la Francia risultò perdente: venne sconfitta a Pavia e il re Francesco I venne fatto prigioniero. Però, non abbandonò la lotta e stipulò con i maggiori Stati italiani una Lega, alla quale aderì anche il papa Clemente VII. Carlo V, indignato dall’appoggio dato dal pontefice ai suoi nemici, inviò in Italia un esercito di lanzichenecchi (mercenari tedeschi) che devastarono Roma nel 1527(sacco di Roma). Mediante il trattato di Barcellona il papa poté riconciliarsi con Carlo V, il quale in cambio della restituzione di Firenze ai Medici venne incoronato imperatore dal papa a Bologna. A questo punto, i francesi stipularono con l’imperatore la pace di Cambrai, con la quale si impegnavano a rinunciare a Napoli e a Milano.

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Carlo fu educato nel 1509 da Guillaume de Croy, Signore di Chièvres. Tutta l'educazione del giovane principe si svolse nelle Fiandre e fu ammantata di cultura fiamminga e in lingua francese, nonostante i suoi natali austro-ispanici. Praticò la scherma, fu abile cavallerizzo ed esperto nel torneare, ma di salute precaria, soffrendo anche di epilessia in gioventù. Il 5 gennaio 1515, nella sala degli Stati del palazzo di Bruxelles,Carlo fu dichiarato maggiorenne e fu proclamato nuovo duca di Borgogna.Carlo, a soli sedici anni, ereditò anche il trono d'Aragona, concentrando nelle sue mani tutta la Spagna, per cui poté fregiarsi del titolo di re di Spagna a tutti gli effetti, assumendo il nome di Carlo I.

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Carlo era figlio di Filippo il Bello d'Asburgo, figlio a sua volta dell'Imperatore Massimiliano I d'Austria e di Maria di Borgogna, erede dei vasti possedimenti dei Duchi di Borgogna. La madre era invece Giovanna di Castiglia e d'Aragona, detta "la Pazza", figlia del re cattolico Ferdinando II d'Aragona.Carlo poté ereditare un vastissimo impero, oltretutto in continua espansione, ed esteso su tre continenti (Europa, Africa e America). Nelle sue vene infatti scorreva sangue delle più disparate nazionalità: austriaca, tedesca, spagnola, francese, polacca, italiana e inglese.Oltre a Carlo, alla coppia nacquero altri cinque figli. Eleonora, la primogenita, che andò in sposa prima a Emanuele I di Aviz, re del Portogallo e poi a Francesco I di Valois-Angoulême, re di Francia. Dopo di lui, in successione, nacquero: Isabella che andò in sposa a Cristiano II di Oldenburg, re di Danimarca; Ferdinando che sposò Anna Jagellone d'Ungheria dando inizio a un rinnovato ramo austriaco degli Asburgo; Maria che andò sposa a Luigi II d'Ungheria e Boemia e infine Caterina che andò sposa a Giovanni III di Aviz, re del Portogallo

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Carlo, come re di Spagna, era affiancato da un Consiglio di Stato, composto di otto membri: un italiano, un savoiardo, due spagnoli e quattro fiamminghi.Fin dalla sua costituzione, nel Consiglio si formarono due schieramenti: uno faceva capo al viceré di Napoli Carlo di Lannoy e l'altro al piemontese Mercurino Arborio di Gattinara che era anche il Gran Cancelliere del re.