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SARKOSYL, TRITON X, ISOCIANATO DE GUANDINA, FENOL

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CTAB, SDS,Tris-HCI, EDTA, B- MERCAPTOETANOL

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CLOROFORMO

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ALCOHOLES

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ETANOL 70%

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H2O TRATADA CON DEPC

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-70°C

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PROTEINASAS
STES. ORGANICOS
SALES

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ALCOHOLES
ALCOHOLES + SAL

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ETANOL 70%

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TE O H2O

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-20°C

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Se usan solventes orgánicos como fenol y cloroformo.

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Método del CTAB

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se adiciona la solución de lisis (2% de CTAB, 0.5% de PVP, 20mM EDTA pH 8.0, 100mM Tris base pH 8.0, 2.5M de NaCl).

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Adicionar sobre ella 10 volúmenes del buffer de lisis previamente precalentado. Homogenizar un par de veces antes de que descongele completamente.

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se agregan 0.5 volúmenes de fenol: cloroformo 5:1, 0.1 volúmenes de buffer de acetato de sodio 3M pH 5.2 y se homogeniza. Se centrifuga a 13,000 rpm por 10 minutos a 4oC.

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Agregar 0.1 volúmenes de acetato de sodio 3M (pH 5.2), 0.5 volúmenes de fenol-cloroformo (5:1 v/v), homogenizar y centrifugar a 14,000rpm por 10 minutos a temperatura ambiente.