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Swab nasal: Exame solicitado com objetivo de avaliar a microbiota local e para a detecção de micro-organismos patogênicos, tais como Streptococcus pyogenes, Streptococcus beta-hemolíticos, S. pneumoniae, H. influenzae, S. aureus e entre outros.
Swab oral: Exame solicitado com objetivo de avaliar a microbiota local e para a detecção de microrganismos patogênicos, tais como Streptococcus pyogenes, Streptococcus beta-hemolíticos, S. pneumoniae, H. influenzae, S. aureus e entre outros.

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- Secreção Nasofaríngea
Com o método Swab é utilizado amostra de muco

- Secreção Orofaríngea
Uma amostra que pode ser utilizada para a realização de teste com Swab é o esfregaço de Tonsilas purulentas ou não para a analise.

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Nesta aula prática realizamos a identificação da presença de cocos gram- positivos através das seguintes provas para chegar na espécie correta:
-Cultura em Ágar sangue
-Cultura em MacConkey
-Coloração de gram
-Teste da catalase
-Teste da coagulase
-Fermentação do Manitol
-Teste de Sensibilização a Novobiocina

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Resultados observados nas culturas de Ágar sangue e Ágar MacConkey:  

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Resultados observados nas culturas de Ágar sangue e Ágar MacConkey:  

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Mecanismos bioquímicos das provas de identificação para micro-organismos Gram positivos:

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Mecanismos bioquímicos das provas de identificação para micro-organismos Gram positivos:

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-Cultura em ágar sangue: A cultura em ágar sangue é essencial para a observação de hemólise na suspeita de bactérias hemolíticas como as gram positivas. Foi observado, assim, a Beta-hemólise no procedimento, com morfologia descrita no ítem de "característica das colônias" indicando suspeita de Staphylococcus

-Cultura em MacConkey:  A cultura em MacConkey é realizada pois esse é um meio seletivo, que apresenta combinação de sais biliares e cristal violeta, que inibem os microrganismos gram positivos, possibilitando a diferenciação de gram-positivos e negativos. No caso da nossa prática não observou-se crescimento nesse meio.

- Coloração de Gram: Importante para diferenciação das bactérias gram negativas (-) e gram positivas (+), em que a primeira obterá a cor rosa e a segunda a cor roxa. Para a prática em questão, foi observada a coloração Roxa. Além da cor, também é possível observar a morfologia (cocos, cachos, bacilos...) e na prática, então foi observado cocos em cachos de bactérias gram positivas, o que confirma a observação em ágar sangue

-Catalase: Importante para a diferenciação entre Staphylococcus e Streptococcus, uma vez que Staphylococcus produz catalase e na presença de peróxido de hidrogênio forma bolhas. Como na imagem deste tópico, o observado na prática foi um teste de catalase +, o que indica, em comunhão com os outros, que temos cocos gram positivos do gênero Staphylococcus.

-Coagulase: Esse teste diferencia as espécies de Staphylococcus entre aureus e coagulase negativa, uma vez que o aureus tem a coagulase e consegue converter o fibrinogênio em fibrina, formando um coágulo. A partir disso, foi obtido na prática o teste de coagulase +, o que complementa que temos uma cultura de Staphylococcus aureus

- Fermentação de manitol: Um teste também seletivo para a diferenciação de Staphylococcus, que consegue fermentar o meio em manitol obtendo a coloração amarela. Assim na prática foi observado o teste de fermentação em manitol +

- Sensibilidade à Novobiocina:  O teste com o novobiocina é usado para identificar a espécie de Staphylococcus coagulase negativa observando se o microrganismo é resistente à novobiocina (antibiótico).
Caso seja resistente: S. saprophyticus.
Caso seja sensível: S. epidermidis e S. haemolyticus

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Cuidados com a coleta de Naso e Orofaringe

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Cuidados com a coleta de Naso e Orofaringe

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1: Identificar o frasco coletor ou o tubo com a solução fisiológica: nome do paciente, município, data de coleta, natureza da amostra e tipo de exame solicitado
2: Lavagem das mãos
3: Colocar equipamento de epi (avental descartável, máscara n95, luvas de látex descartáveis, gorro e óculos ou viseira de proteção)
4:  Introduzir o swab na cavidade nasal (cerca de 5 cm), direcionando-o para cima (direção dos olhos), com uma angulação de 30 a 45º em relação ao lábio superior,  Após a introdução, esfregar o coletor com movimentos circulares delicados, pressionando-o contra a parede lateral do nariz (em direção à orelha do paciente).
5:  A coleta do swab de orofaringe é executado introduzindo o swab maior na região posterior da faringe e tonsilas, evitando tocar na língua

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 Amostra 1 em ágar sangue                         

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 Amostra 1 em ágar sangue                         

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Crescimento moderado na amostra 1.
Características das colônias: Circular, Convexa e Inteira.

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Crescimento acentuado na amostra 2.
Características das colônias:  Circular, Convexa e Inteira.

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Não houve crescimento no MacConkey nem para amostra 1 nem para amostra 2
Esse resultado indicou que se tratam de bactérias Gram-positivas e beta hemolíticas. Podendo se encaixar no grupo de Staphylococcus ou Streptococcus. Sendo necessário partir para a prova da catalase para diferenciação.

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Coloração de gram para confirmar se são bactérias gram-positivas

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Coloração de gram para confirmar se são bactérias gram-positivas

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Métodos:
• As placas de Petri com meio de cultura foram mantidas próxima a chama da lamparina, sem abrir a placa nesse momento;
• Flambou-se a alça bacteriológica para esterilizá-la, coletou-se 2 a 3 gotas de solução salina e depositou-se a
substância sobre a lâmina para microscopia;
• Flambou-se a alça bacteriológica, esperou-se esfriar e abriu-se a placa de petri, selecionando uma das colônias
isoladas;
• Misturou-se a colônia coletada nas gotas de solução salina, para diluí-la (técnica de esfregaço);
• Fixou-se o esfregaço passando a lâmina rapidamente sobre a chama da lamparina;
• Colocou-se a lâmina sobre o suporte e seguiu-se os seguintes passos com os tempos estritamente corretos:
- Cristal Violeta (1 minuto) - descartando o reagente na pia depois do tempo;
- Lugol (1 minuto) - descartando o reagente na pia depois do tempo;
- Álcool (pingou-se gotas na lateral da lâmina para escorrer sobre o esfregaço até parar de sair o corante);
- Fucsina (30 segundos) - descartando o reagente na pia depois do tempo;
• Abriu-se a torneira até obter um filete de água, e colocou-se a lâmina abaixo até parar de escorrer corante (deixando o filete tocar laterais do esfregaço, não nele diretamente);
• Secou-se a lâmina ao ar ambiente;
• Colocou-se 1 gota de óleo de imersão sobre o esfregaço e observou-se no microscópio utilizando a objetiva de 100x.

Resultado da observação: cocos em cachos de bactérias gram positivas, o que confirma a observação em ágar sangue.

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Na prova da catalase ambas as amostras (1 e 2) possuem catalase (isto é, são catalase-positivas), pois quando a pequena quantidade isolada bactérias foi adicionada ao peróxido de hidrogênio, bolhas de oxigênio foram observadas. Desse modo descobrimos que se tratam de Staphylococcus.

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-Amostra 1 criou coágulo: coagulase positiva por isso trata-se de S. aureus.
-Amostra 2 não criou coágulo: coagulase negativa

# data[].attributes.body
Foi utilizada para definir o que é a amostra 2 (que foi coagulase negativa).
Nesse teste foi trabalhado com Ágar sangue, solução salina com suspensão de escala 0,5, calor inativo e o disco de antibiótico.

Observações sobre o resultado:
-25 milimitros de diâmetro.
Indicando que é sensível ao antibiótico pois teve alo acima de 16mm.
-Dessa maneira, trata-se de Staphylococcus coagulase negativo ( S. epidermidis ou S. haemolyticus). Nesse caso provavelmente S. epidermites por se tratar de amostra de ferida.

# data[].attributes.body
-Amostra 1: fermentou manitol pois coloração do meio ficou amarelada. Confirmando então que trata-se de S.aureus.
-Amostra 2: Não fermentou manitol, confirmando ser S. coagulase negativa

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A urocultura, também chamada de urinocultura ou cultura da urina, é um exame laboratorial realizado com a urina que complementa o diagnóstico de infecçãourinária causada por bactérias.

Consiste em colocar-se uma pequena quantidade de urina em um meio que favorece o crescimento de eventuais germes presentes, chamado “meio de cultura” e assim facilitar a detecção e a identificação deles.

As bactérias normalmente encontradas a partir desse exame são:
Escherichia coli, Enterococcus spp., Klebisiella-Enterobacter spp., Staphylococcus saprophyticus e Pseudomonas spp.

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- Amostra de Urina de jato médio.

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- Realizar a higiene íntima, preferivelmente com sabonete neutro líquido
- Coletar a primeira urina da manhã (mais concentrada)
- Para coletar, desprezar o primeiro jato a fim de evitar contaminação por microbiota na amostra, coletar o jato médio no pote, e desprezar o jato final no sanitário
- Finalizar com a higiene externa do coletor, seguida da higiene das mãos

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a) Homogeneizou-se a amostra de urina (Primeira micção - jato médio). Não centrifugou.
b) Imergiu-se a alça calibrada de 0,001 mL (1 μL) na urina de forma vertical. Observando se preencheu todo o espaço do aro com urina e se não ficou bolhas no líquido que preenche o aro.
c) Semeou-se primeiro, pela técnica de semeadura quantitativa, em placa de ágar CLED (não seletivo), imergiu-se novamente a alça na urina e em seguida semeou-se a placa de ágar MacConkey (seletivo).
d) Incubou-se em estufa à 35 ±1°C por 18 a 24 horas.

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- Ágar CLED
É adequado para o isolamento e contagem de muitos microrganismos de crescimento aeróbico, como Enterobacteriaceae, Pseudomonas e outros bastonetes Gram negativos não fermentadores, enterococos, estafilococos, espécies de Candida e muitos outros de amostras de urina.

- Ágar MacConkey
O ágar McConkey é muito utilizado para o crescimento de bactérias, tendo a vantagem de ser um meio seletivo e diferencial que cultiva apenas gram-negativas, por meio da técnica do metabolismo da lactose, visto que, se positivo indicando que ocorreu fermentação as colônias ficam vermelho ou rosa, se negativo, não muda de cor, indicando que não ocorreu fermentação.

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Resultados das semeaduras de urina nos diferentes meios de cultura:

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Resultados das semeaduras de urina nos diferentes meios de cultura:

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Amostra 1 CLED
-Cresceu acima de 100mil UFC (Não dá pra contar)
-Fermentou lactose pois ficou amarela.

# data[].attributes.body
Amostra 1 MacConkey
-Cresceu acima de 100mil UFC
-Gram-negativa
-Fermentou lactose (meio rosa)
Resultado: Enterobactéria.

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Bactérias/vírus envolvidos em amostras de coprocultura

Na cultura de fezes, habitualmente, são pesquisados os agentes bacterianos mais comuns em nosso meio: Salmonella spp., Shigella spp, alguns sorotipos de Escherichia coli e Campylobacter spp. Outros agentes também podem ser pesquisados, mas é importante que sejam mencionados na solicitação médica como, por exemplo, Yersinia spp e Vibrio spp, Clostridioides difficile (anteriormente Clostridium difficile). A pesquisa de toxina para C. difficile é indicada para pacientes com diarreia, com suspeita clínica de colite pseudomembranosa, com história de antibioticoterapia prévia e após investigação de outros patógenos entéricos causadores de diarreia.

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- Amostra de fezes

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PROCEDIMENTO DA COLETA
• A coleta deve ser realizada no início dos episódios de diarreia (geralmente em até 7 dias), uma vez que a positividade diminui com o tempo devido a redução do número de bactérias eliminadas
• 1 a 2g de fezes (equivalente a 1 colher das de sobremesa ou 5 ml de fezes líquidas) no início do quadro diarreico antes da antibioticoterapia representa a amostra ideal
• Coletar as fezes em recipiente limpo e seco. Não utilizar papel higiênico para coletar as fezes, pois podem estar impregnados de sais de bário, inibidores de alguns patógenos fecais
• Transferir a amostra para frasco com conservante e homogeneizar. É importante que a quantidade de fezes não exceda a quantidade recomendada, respeitando a diluição da amostra no conservante. Quantidade excessiva de fezes resulta em conservação inadequada da amostra
• Meios de transporte líquidos associados ao uso de swab estão disponíveis comercialmente para aumentar a praticidade da coleta e do processamento da amostra. Utilizar o swab que acompanha o meio de transporte -mergulhar nas fezes recém-colhidas, inserir o swab no meio de transporte
e encaminhar ao laboratório à temperatura ambiente.
• Coleta com swabs retais são aceitáveis somente em casos especiais, como por exemplo, em recém-nascidos. Verificar após a coleta se a ponta do swab contém amostra fecal e inserir imediatamente no meio conservante.

# data[].attributes.attachment_caption
Cor púrpura = Positivo para descarboxilação da lisina

# data[].attributes.body
*Descarboxilação da lisina

- Amostra 1: Positivo
- Amostra 2: Negativo
- Amostra 3: Positivo

# data[].attributes.body
- Ágar Salmonella Shigella (SS)
É um meio diferencial selectivo utilizado no isolamento de bacilos entéricos patogénicos, especialmente os que pertencem ao género Salmonella, provenientes de amostras clínicas.
- Ágar MacConkey
O ágar McConkey é muito utilizado para o crescimento de bactérias, tendo a vantagem de ser um meio seletivo e diferencial que cultiva apenas gram negativas, por meio da técnica do metabolismo da lactose, visto que, se positivo indicando que ocorreu fermentação as colônias ficam vermelho ou rosa, se negativo, não muda de cor, indicando que não ocorreu fermentação.

# data[].attributes.body
*Desaminação do L-triptofano (TRI)

Coloração verde garrafa indica resultado positivo

- Amostra 1: negativo
- Amostra 2: positivo
- Amostra 3: negativo

*Fermentação da glicose

Amarelo no fundo do tubo indica resultado positivo

- Amostra 1: positivo
- Amostra 2: Presença de H2S mascarando resultado
- Amostra 3: Presença de H2S mascarando resultado

*Produção de gás a partir da glicose
- Amostra 1: Positivo
- Amostra 2: --
- Amostra 3: Positivo

*Produção de H ₂ S
- Amostra 1: Negativo
- Amostra 2: Positivo
- Amostra 3: Positivo

*Hidrólise de ureia
- Amostra 1: Negativo
- Amostra 2: Positivo
- Amostra 3: Negativo

# data[].attributes.body
Amostra 2 CLED
-Cresceu acima de 100mil UFC.
-Gram negativa
-Mas não fermentou lactose pois não mudou de cor.

# data[].attributes.body
*Descarboxilação da ornitina

Cor roxa representa resultado positivo e cor amarela negativo

- Amostra 1: Positivo
- Amostra 2: Positivo
- Amostra 3: Positivo

*Motilidade

Aspecto turvo indica resultado positivo

- Amostra 1: Positivo
- Amostra 2: Positivo
- Amostra 3: Positivo

*Indol

Cor rosa indica resultado positivo

- Amostra 1: Positivo
- Amostra 2: Negativo
- Amostra 3: Negativo

# data[].attributes.body
- Ágar SS: As bactérias Gram-positivas são inibidas pela presença de sais biliares, verde brilhante e citrato sódico presentes na formulação do meio. O vermelho neutro serve de indicador de pH, sendo que as colônias que fermentam a lactose produzem colônias rosa e que não fermentam, como a Shiguella spp. e Salmonella spp., formam colônias transparentes. A maioria das linhagens de Proteus spp. e Salmonella spp. produzem colônias com centro negro, pois produzem H2S que reage com citrato férrico e tiossulfato de sódio, resultado no sulfato ferroso, de cor preta. Não havendo crescimento bacteriano, constata-se amostra isenta de bactérias. As bactérias que não fermentam lactose (supostamente patogênicas) formam colônias claras, transparentes e incolores, ao contrário dos coliformes, que são bastante inibidos e formam colônias pequenas que variam de rosa a vermelho. As bactérias formadoras de sulfetos formam colônias transparentes que apresentam um centro negro, como Proteus spp. e algumas espécies de Salmonella spp.

- Ágar MacConkey: O Ágar macconkey é um meio de cultivo para bactérias gram negativas e indica a fermentação por lactose , esse processo ocorre pois ele tem em seu composto substâncias que inibem o crescimento das bactérias gram positivas, as bactérias fermentadoras de lactose (Klebsiela, Enterobacter), utilizam a lactose disponível no meio e produzem ácido como produto final. Este ácido diminui o pH do meio para valores inferiores a 6.8, resultando na observação de colónias rosa choque/vermelhas.

# data[].attributes.attachment_caption
Coloração amarela = positivo para consumo de rhamnose

# data[].attributes.body
*Fermentação da rhamnose
- Amostra 1: Positivo
- Amostra 2: Negativo
- Amostra 3: Positivo

# data[].attributes.attachment_caption
Coloração azul = Positivo para consumo de citrato

# data[].attributes.body
*Consumo de citrato
- Amostra 1: Negativa
- Amostra 2: Positiva
- Amostra 3: Positiva

# data[].attributes.headline
Resultado da amostra 3 em ágar Salmonella-Shigella

# data[].attributes.subject
Resultado da amostra 3 em ágar Salmonella-Shigella

# data[].attributes.body
Produção de H₂S em centro na placa conclusivo para Salmonella spp

# data[].attributes.body
Amostra 2 MacConkey
- Cresceu acima de 100mil UFC
-Gram negativa
- Não fermentou lactose
* Partir para prova da oxidase para diferenciar se é Pseudomonas ou Enterobactérias.

# data[].attributes.body
Prova da oxidase
-Fita não ficou roxa, por isso trata-se de uma bactéria anaeróbia.
-Oxidase negativa.
-Resultado: Enterobactéria.

# data[].attributes.attachment_caption
Superfície verde: Positivo para desaminação de fenilalanina

# data[].attributes.body
*Desaminação de fenilalanina
- Amostra 1: Negativo
- Amostra 2: Positivo
- Amostra 3: Negativo

# data[].attributes.attachment_caption
Vermelho = Positivo para bactérias que fermentam glicose por via ácida

# data[].attributes.body
* Coloração Vermelho de metila
- Amostra 1: Positivo
- Amostra 2: Positivo
- Amostra 3: Positivo

# data[].attributes.attachment_caption
Amarelo = Negativo para produção de compostos não-ácidos para fermentação da glicose; Vermelho: Positivo

# data[].attributes.headline
Prova de Voges-Proskauer com alfa-naftol

# data[].attributes.subject
Prova de Voges-Proskauer com alfa-naftol

# data[].attributes.body
Amostra 1: Negativo
Amostra 2: Negativo
Amostra 3: Negativo

# data[].attributes.attachment_caption
Bactérias identificadas pelo app "Identificador Bacteriano" (ícone)

# data[].attributes.body
- Amostra 1: Escherichia coli
- Amostra 2: Poteus mirabilis
- Amostra 3: Salmonella spp.

# data[].attributes.body
O resultado deu negativo.
As bactérias gram-negativas que são capazes de fermentar a lactose produzindo colônias rosas, enquanto aquelas incapazes de fermentar a lactose produzem colônias incolores.

# data[].attributes.headline
Relatório final de microbiologia clínica

# data[].attributes.subject
Relatório final de microbiologia clínica